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產品名稱:植物線粒體蛋白提取試劑盒100T使用說明書
儲存條件:2-8℃保存。
有效期:一年。
產品簡介:
線粒體(mitochondria)是真核細胞中產生能量的重要細胞器。細胞中的能源物質—脂肪、
糖、部分氨基酸在此進行終的氧化,并通過偶聯磷酸化生成ATP,供給細胞活動之需。
植物線粒體蛋白提取試劑盒100T使用說明書使用注意事項
1.微量試劑取用前請離心集液。
2.7-AAD避光保存及使用。
3.7-AAD為潛在致癌物,操作時請采取防護措施,穿*、戴手套等。
4.本試劑盒適用于檢測活細胞,流式細胞儀檢測時,細胞數量不以應低于1×105,,不*用于檢測組織樣本。
植物線粒體蛋白提取試劑盒100T使用說明書操作方法
1.懸浮細胞離心(2000rpm離心5min)收集;貼壁細胞用*消化收集用PBS洗滌細胞二次(2000rpm離心5min)收集1~5×105細胞;
2.加入5μL 7-AAD染液,混勻;室溫、避光、反應5~15min;
3.加入500μL的1×Assays Buffer懸浮細胞;
4.請在1 hour內,進行下述熒光顯微鏡或流式細胞儀的觀察和檢測。
A.熒光顯微鏡觀察
1.滴一滴上述染色后的細胞懸液于載玻片上,并用蓋玻片蓋上細胞;
2.對于貼壁細胞來說,也可直接用蓋玻片來培養(yǎng)細胞并誘導細胞凋亡;
(1)將細胞于蓋玻片上生長,用適當的凋亡誘導劑誘導細胞凋亡,并設立陰性對照組;
(2)用PBS洗滌細胞兩次;
(3)在500μL 的1×Assays Buffer中加入5μL7-AAD染液,混勻;
(4)將上述溶液滴加于蓋玻片表面,使長有細胞的蓋玻片表面均勻覆蓋;
(5)避光、室溫反應5 min。
3.將蓋玻片倒置于載玻片上,于熒光顯微鏡下觀察激發(fā)波長546nm,發(fā)射波長647 nm,7-AAD熒光信號呈紅色。
B.流式細胞儀分析
用流式細胞儀檢測,激發(fā)波長Ex=546 nm; 發(fā)射波長Em=647 nm。
7-AAD紅色熒光建議使用FL3通道檢測。
植物線粒體蛋白提取試劑盒100T使用說明書實驗步驟
貼壁細胞需用0.25%的*消化。注意過度消化可損傷細胞。在消化時可加2%的BSA可防止消化過度。如果用含EDTA的*消化時,注意必須*清除EDTA:在標記前用1×PBS或1×bindingbuffer洗滌,清除EDTA,以免殘余的EDTA與Ca2+螯合,影響Annexin V的結合。
(1)用去離子水將10×Binding Buffer稀釋成1×Binding Buffer;
(2)細胞收集。懸浮細胞收集:離心5分鐘;貼壁細胞:用不含EDTA的*消化收集后(注:*消化時間不宜過長,否則會影響細胞膜上磷脂酰*與Annexin V-FITC的結合),于室溫2000rpm離心5~10分鐘,收集細胞;
(3)細胞洗滌:用預冷1×PBS(4℃)重懸細胞一次,2000rpm離心5~10分鐘,洗滌細胞;
(4)加入300μL 的1×Binding Buffer 懸浮細胞;
(5)Annexin V-FITC標記:加入5μL的Annexin V-FITC混勻后,避光,室溫孵育15分鐘;
(6)PI標記:上機前5分鐘再加入5μL的PI染色。
(7)上機前,補加200μL的1×Binding Buffer。
狹葉獐牙菜Swertia angustifolia alpha-Tocopherolinoneone 托可醌 7559-4-8 C29H50O3 ≥96%
染料木速GqnistqinHPLC≥98%,20mg/支
可可減 Theobromine 83-67-0 20mg HPLC≥98% 用于含量測定
對照品*δ-3異構體130494-200402HPLC系統(tǒng)適應性
松柏苷 Coniferin 531-29-3 20mg HPLC≥98% 松柏苷 531-29-3
25122-57-0 丁酸錄倍他松標準品 50mg
川芎嗪;2,3,5,6-四基吡嗪Ligustrezine;four2,3,5,6-metxylpyrezine114-11-4HPLC≥98%,20mg/支
2''-Acetylastragalin 2''-乙?;S芪甙 1206734-95-3
Alprostadil*標準品745-65-325mg*標準品
蘇丹紅Ⅲ 85-86-9 HPLC≥98%;20mg 訂購|咨詢
青陽參苷元 Qingyang ginsengglucosideyuan 84745-94-8 20mg
*Etoposide33419-4-020mg
3,4-Dimetxoxypxenyl glucoside 3,4-二甲氧基本基-BETA-D-葡萄糖苷 84812-00-0
去氫二異*Dexy7nodiisoeugenol
山羊豆堿;Galegine 20284-78-0 20mg 訂購|咨詢
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