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膜蛋白提取試劑盒(2D電泳用)50T使用說明書

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更新時間:2017-07-05 10:27:58瀏覽次數(shù):124次

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公司供應(yīng)的膜蛋白提取試劑盒(2D電泳用)50T使用說明書品種類齊全,檢測效果好,質(zhì)量保證,歡迎廣大科研用戶!

膜蛋白提取試劑盒(2D電泳用)50T使用說明書使用注意事項
1.微量試劑取用前請離心集液。
27-AAD避光保存及使用。
37-AAD為潛在致癌物,操作時請采取防護措施,穿*、戴手套等。
4.本試劑盒適用于檢測活細胞,流式細胞儀檢測時,細胞數(shù)量不以應(yīng)低于1×105,,不*用于檢測組織樣本。
產(chǎn)品名稱:膜蛋白提取試劑盒(2D電泳用)50T使用說明書
儲存條件:蛋白酶抑制劑-20℃保存; 蛋白提取液AB 2-8℃保存;試劑C室溫保存。

有效期:一年。

產(chǎn)品簡介:

哺乳動物跨膜蛋白承擔(dān)各種生物功能,在疾病的發(fā)生、發(fā)展過程中扮演重要角色。膜蛋白樣品的制備需要充分考慮到與下游的膠分析及質(zhì)譜分析等應(yīng)用配套,因此膜蛋白樣本制備成為一個難以逾越的挑戰(zhàn)。傳統(tǒng)制備膜蛋白樣品的方法是使用去污劑和表面活性劑增溶。去污劑處理會使膜蛋白喪失其天然結(jié)構(gòu),因而妨礙了膜蛋白的功能研究。

膜蛋白提取試劑盒(2D電泳用)50T使用說明書操作方法
1.懸浮細胞離心(2000rpm離心5min)收集;貼壁細胞用*消化收集用PBS洗滌細胞二次(2000rpm離心5min)收集1~5×105細胞;
2.加入5μL 7-AAD染液,混勻;室溫、避光、反應(yīng)515min;
3.加入500μL1×Assays Buffer懸浮細胞;
4.請在1 hour內(nèi),進行下述熒光顯微鏡或流式細胞儀的觀察和檢測。
A.熒光顯微鏡觀察
1.滴一滴上述染色后的細胞懸液于載玻片上,并用蓋玻片蓋上細胞;
2.對于貼壁細胞來說,也可直接用蓋玻片來培養(yǎng)細胞并誘導(dǎo)細胞凋亡;
1)將細胞于蓋玻片上生長,用適當(dāng)?shù)牡蛲稣T導(dǎo)劑誘導(dǎo)細胞凋亡,并設(shè)立陰性對照組;
2)用PBS洗滌細胞兩次;
3)在500μL 1×Assays Buffer中加入5μL7-AAD染液,混勻;
4)將上述溶液滴加于蓋玻片表面,使長有細胞的蓋玻片表面均勻覆蓋;
5)避光、室溫反應(yīng)5 min。
3.將蓋玻片倒置于載玻片上,于熒光顯微鏡下觀察激發(fā)波長546nm,發(fā)射波長647 nm,7-AAD熒光信號呈紅色。
B.流式細胞儀分析
用流式細胞儀檢測,激發(fā)波長Ex=546 nm; 發(fā)射波長Em=647 nm。
7-AAD紅色熒光建議使用FL3通道檢測。
膜蛋白提取試劑盒(2D電泳用)50T使用說明書實驗步驟
貼壁細胞需用0.25%的*消化。注意過度消化可損傷細胞。在消化時可加2%的BSA可防止消化過度。如果用含EDTA的*消化時,注意必須*清除EDTA:在標記前用1×PBS1×bindingbuffer洗滌,清除EDTA,以免殘余的EDTACa2+螯合,影響Annexin V的結(jié)合。
1)用去離子水將10×Binding Buffer稀釋成1×Binding Buffer
2)細胞收集。懸浮細胞收集:離心5分鐘;貼壁細胞:用不含EDTA的*消化收集后(注:*消化時間不宜過長,否則會影響細胞膜上磷脂酰*與Annexin V-FITC的結(jié)合),于室溫2000rpm離心510分鐘,收集細胞;
3)細胞洗滌:用預(yù)冷1×PBS4)重懸細胞一次,2000rpm離心510分鐘,洗滌細胞;
4)加入300μL 1×Binding Buffer 懸浮細胞;
5Annexin V-FITC標記:加入5μLAnnexin V-FITC混勻后,避光,室溫孵育15分鐘;
6PI標記:上機前5分鐘再加入5μLPI染色。
7)上機前,補加200μL1×Binding Buffer。
丁香樹Clove tree Syringaresinol-di-O- glucoside 丁香樹脂醇雙葡萄糖苷 66791-77-3 C34H46O18 98%

紅景天苷SclidrosidqHPLC98%;20mg/

花椒毒酚;8-輕基補骨脂素;花椒毒醇 Xanthotol 2009-24-7 20mg HPLC98% 用于含量測定

對照品錄霉素二醇物130436-200503檢查

Petunidin 3-arabinoside chloride矮牽牛素阿拉伯糖苷純度:
2216-51-5 (-)-薄荷醇(GC萜烯標準品) 1g

黃花蒿 Artemisia annua 脫氧青高素 72826-63-2 C15H22O4 98% L-本丙安酸(P1150000

對照品維生素E10062-0007含量測定

Flavoxate Related Compound C黃酮哌酯相關(guān)物質(zhì)C標準品35888-94-9 20mg黃酮哌酯相關(guān)物質(zhì)C標準品

細辛Asarum (-)-Ain 細辛脂素 133-04-0 C20H18O6 98%
九里香 Orange Jessamine 1g

異鳥苷Isoguanosine1818-71-9HPLC98%20mg/vial

PalMatine 巴馬亭 3486-67-7

培養(yǎng)基適應(yīng)性沙門、志賀菌屬瓊脂對照培養(yǎng)基135010-201002常溫,避光18.0g/400ml

豨薟醚酸 siegesmetxyicacid 20mg HPLC98% 用于含量測定
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