當(dāng)前位置:上海莼試生物技術(shù)有限公司>>細胞生物學(xué)試劑>>蛋白提取/檢測>> 酵母蛋白裂解液50ml實驗方法
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更新時間:2017-07-05 10:13:09瀏覽次數(shù):144次
聯(lián)系我時,請告知來自 儀表網(wǎng)產(chǎn)品名稱:酵母蛋白裂解液50ml實驗方法
儲存條件:室溫保存。
有效期:一年。
產(chǎn)品簡介:
酵母蛋白裂解液用于對酵母的裂解。酵母裂解液已含常用蛋白酶抑制劑和磷酸酶抑制劑。
酵母蛋白裂解液50ml實驗方法使用注意事項
1.微量試劑取用前請離心集液。
2.7-AAD避光保存及使用。
3.7-AAD為潛在致癌物,操作時請采取防護措施,穿*、戴手套等。
4.本試劑盒適用于檢測活細胞,流式細胞儀檢測時,細胞數(shù)量不以應(yīng)低于1×105,,不*用于檢測組織樣本。
酵母蛋白裂解液50ml實驗方法操作方法
1.懸浮細胞離心(2000rpm離心5min)收集;貼壁細胞用*消化收集用PBS洗滌細胞二次(2000rpm離心5min)收集1~5×105細胞;
2.加入5μL 7-AAD染液,混勻;室溫、避光、反應(yīng)5~15min;
3.加入500μL的1×Assays Buffer懸浮細胞;
4.請在1 hour內(nèi),進行下述熒光顯微鏡或流式細胞儀的觀察和檢測。
A.熒光顯微鏡觀察
1.滴一滴上述染色后的細胞懸液于載玻片上,并用蓋玻片蓋上細胞;
2.對于貼壁細胞來說,也可直接用蓋玻片來培養(yǎng)細胞并誘導(dǎo)細胞凋亡;
(1)將細胞于蓋玻片上生長,用適當(dāng)?shù)牡蛲稣T導(dǎo)劑誘導(dǎo)細胞凋亡,并設(shè)立陰性對照組;
(2)用PBS洗滌細胞兩次;
(3)在500μL 的1×Assays Buffer中加入5μL7-AAD染液,混勻;
(4)將上述溶液滴加于蓋玻片表面,使長有細胞的蓋玻片表面均勻覆蓋;
(5)避光、室溫反應(yīng)5 min。
3.將蓋玻片倒置于載玻片上,于熒光顯微鏡下觀察激發(fā)波長546nm,發(fā)射波長647 nm,7-AAD熒光信號呈紅色。
B.流式細胞儀分析
用流式細胞儀檢測,激發(fā)波長Ex=546 nm; 發(fā)射波長Em=647 nm。
7-AAD紅色熒光建議使用FL3通道檢測。
酵母蛋白裂解液50ml實驗方法實驗步驟
貼壁細胞需用0.25%的*消化。注意過度消化可損傷細胞。在消化時可加2%的BSA可防止消化過度。如果用含EDTA的*消化時,注意必須*清除EDTA:在標(biāo)記前用1×PBS或1×bindingbuffer洗滌,清除EDTA,以免殘余的EDTA與Ca2+螯合,影響Annexin V的結(jié)合。
(1)用去離子水將10×Binding Buffer稀釋成1×Binding Buffer;
(2)細胞收集。懸浮細胞收集:離心5分鐘;貼壁細胞:用不含EDTA的*消化收集后(注:*消化時間不宜過長,否則會影響細胞膜上磷脂酰*與Annexin V-FITC的結(jié)合),于室溫2000rpm離心5~10分鐘,收集細胞;
(3)細胞洗滌:用預(yù)冷1×PBS(4℃)重懸細胞一次,2000rpm離心5~10分鐘,洗滌細胞;
(4)加入300μL 的1×Binding Buffer 懸浮細胞;
(5)Annexin V-FITC標(biāo)記:加入5μL的Annexin V-FITC混勻后,避光,室溫孵育15分鐘;
(6)PI標(biāo)記:上機前5分鐘再加入5μL的PI染色。
(7)上機前,補加200μL的1×Binding Buffer。
植物牛膝Achyranthes bidentata Bl Stachysterone D 旌節(jié)花甾酮D 26361-67-1 C27H42O6 ≥98%
芹菜速cpigqninHPLC≥98%;20mg/支
光甘草定 Glabridin 59870-68-7 20mg HPLC≥98% 用于含量測定
UV法含量測定*100776-200501常溫,避光100mg
本那普利相關(guān)化合物E標(biāo)準(zhǔn)品25mg
2078-54-8 *標(biāo)準(zhǔn)品 290MG
B-蒎烯B-pinene17-91-320mg
Cyclocerberidol (1R-反式)-7-輕基-7-(輕基甲基)-2-氧雜二環(huán)[2.2.1]庚烷-1-乙醇 126594-66-9
metxscopolamine Bromide *標(biāo)準(zhǔn)品155-41-9 200mg*標(biāo)準(zhǔn)品
L-谷酰胺;L-Glutamine 56-85-9 20mg 訂購|咨詢
葶藶子(獨行菜) Semen Lepidii(Lepidium) 0.5g
異土木香內(nèi)酯Isoclcntolcctonq470-17-7HPLC≥98%,20mg/vial
光萼野百合減 Usaramine 15503-87-4 HPLC≥98% 20mg/支
含量測定本唑西林0482-99012-8℃,避光500mg
秦皮甲素;七葉甙,七葉苷,七葉樹素 Esculin 531-75-9 20mg HPLC≥98% 用于含量測定
大鼠纖溶酶抗纖溶酶復(fù)合物(PAP)ELISA試劑盒 ,英文名: PAP ELISA Kit
人戊型肝炎病毒IgG(HEV-IgG)ELISA檢測試劑盒humanhepatitisEvirusIgG,HEV-IgGELISAKit 96T/48T
大鼠Ⅳ型膠原(Col Ⅳ)免疫試劑盒 Rat Collagen Type Ⅳ,Col Ⅳ ELISA KIT
CLIAKitforSAA(HumanSerumamyloidA)ELISAKit人血清淀粉樣蛋白A規(guī)格:48T/96T
石蠟切片結(jié)締組織(CONNECTIVETISSUE)改良格莫瑞三色(MGT)染色試劑盒50次
ELISAKitMYO/MB人肌紅蛋白規(guī)格:48T/96T
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HumanCX3C-chemokinereceptor1,CX3CR1ELISA試劑盒人CX3C趨化因子受體1(CX3CR1)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
組織ERK1/2激酶活性定量檢測試劑盒(A/B/C)20次
Humanprogesteronereceptor,PGRELISAKit人孕同受體(PGR)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
酵母蛋白裂解液50ml實驗方法人聚集蛋白(Agrin)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
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人巨噬細胞移動抑制因子(MIF)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
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