當(dāng)前位置:上海莼試生物技術(shù)有限公司>>細(xì)胞生物學(xué)試劑>>蛋白提取/檢測>> PMSF10ml使用說明書
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更新時間:2017-07-04 14:26:36瀏覽次數(shù):244次
聯(lián)系我時,請告知來自 儀表網(wǎng)總蛋白提取試劑盒(無去垢劑)100T實(shí)驗(yàn)方法
PMSF10ml使用說明書儲存條件:-20℃保存。
有效期:一年。
產(chǎn)品簡介:
PMSF采用進(jìn)口高品質(zhì)原料配制。濃度為200mM。PMSF為不可逆的*蛋白酶抑制劑,常用于蛋白提取過程中的抑制劑使用??梢种启入拿?/span>Y,*,FactorXa,木瓜蛋白酶,纖溶酶,蛋白酶K,枯草桿菌蛋白酶,*及*等。PMSF在水溶液中不穩(wěn)定。應(yīng)在使用前從貯存液中現(xiàn)用現(xiàn)加于裂解緩沖液中。
PMSF10ml使用說明書實(shí)驗(yàn)操作步驟:
1、液的配制:
六孔板每孔所需JC-1 染色工作液的量為 1mL ,其他培養(yǎng)器皿的 JC-1 染色工作液的用量以此類推;對于細(xì)胞懸液每50~100 萬細(xì)胞需0.5mL JC-1 染色工作液。取適量JC-1 (200×),按照每50μL JC-1(200×)加入 8mL 超純水的比例稀釋JC-1 。劇烈震蕩充分溶解并混勻 JC-1 。然后再加入2mL JC-1 染色緩沖液(5 ×),混勻后即為 JC-1 染色工作液。
2、陽性對照的設(shè)置:
把試劑盒中提供的CCCP(10mM )*按照1 ∶1000 的比例加入到細(xì)胞培養(yǎng)液中,稀釋至10uM ,處理細(xì)胞 20 分鐘。隨后按照下述方法裝載 JC-1 ,進(jìn)行線粒體膜電位的檢測。對于大多數(shù)細(xì)胞,通常10uM CCCP處理 20 分鐘后線粒體的膜電位會*喪失,JC-1 染色后觀察應(yīng)呈綠色熒光;而正常的細(xì)胞經(jīng)JC-1 染色后應(yīng)顯示紅色熒光。對于特定的細(xì)胞,CCCP 的作用濃度和作用時間可能有所不同,需自行參考相關(guān)文獻(xiàn)資料決定。
3、對于懸浮細(xì)胞:
(1)取 10~60 萬細(xì)胞,重懸于 0.5mL 細(xì)胞培養(yǎng)液中,細(xì)胞培養(yǎng)液中可以含血清和酚紅。
(2)加入 0.5mL JC-1 染色工作液,顛倒數(shù)次混勻。細(xì)胞培養(yǎng)箱中 37 ℃孵育20 分鐘。
(3)在孵育期間,按照每 1mL JC-1 染色緩沖液(5×)加入 4mL 蒸餾水的比例,配制適量的JC-1 染色緩沖液(1×),并放置于冰浴。
(4)37℃孵育結(jié)束后,600g 4 ℃離心3 ~4 分鐘,沉淀細(xì)胞。棄上清,注意盡量不要吸除細(xì)胞。
(5)用JC-1 染色緩沖液(1×)洗滌 2 次:加入 1mL JC-1 染色緩沖液(1×)重懸細(xì)胞,600g 4 ℃離心3~4 分鐘,沉淀細(xì)胞,棄上清。再加入 1mL JC-1 染色緩沖液(1×)重懸細(xì)胞,600g 4 ℃離心 3~4 分鐘,沉淀細(xì)胞,棄上清。
(6)再用適量 JC-1 染色緩沖液(1×)重懸后,用熒光顯微鏡或激光共聚焦顯微鏡觀察,也可以用熒光分光光度計檢測或流式細(xì)胞儀分析。
PMSF10ml使用說明書注意事項(xiàng)
(1)本試劑只適用于實(shí)驗(yàn),不適用于臨床檢測;
(2)PI(propidium iodide,碘化丙錠)有毒性,能通過皮膚吸收,對眼睛有刺激作用,使用時需戴手套;
(3)Annexin V-FITC和PI是光敏物質(zhì),在操作時請注意避光。在處理和標(biāo)記時,盡可能在暗處進(jìn)行。在孵育階段,用鋁箔包裹容器或置于抽屜中。細(xì)胞標(biāo)記后,在暗室內(nèi)用顯微鏡觀察;
(4)整個操作過程動作要盡量輕柔,勿用力吹打細(xì)胞,盡量在4℃下操作,以免影響細(xì)胞狀態(tài)。
(5)在細(xì)胞洗滌的后一步,請盡量將上清棄凈,以免PBS殘留,有可能會影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
(6)為防止熒光衰變,宜在1小時內(nèi)進(jìn)行流式檢測。
(7)PI染色時間過長有可能造成檢測的凋亡率偏高,建議首*行Annexin V-FITC染色,短可在上機(jī)前5分鐘再加入PI染色。
五味子Schisandra chinensis (Turcz.) Baill. Schisanlactone E 五內(nèi)脂 136040-43-2 C30H44O4 ≥98%
松脂醇二葡萄糖苷Pinorqsinoltwoglucosidq20mg/支
長春瑞濱;去甲長春花減 Vinorelbine 71486-22-1 20mg HPLC≥98% 用于含量測定
中藥對照藥材羊膽粉121524-200501TLC法鑒別
xy7noXYCITRIC ACID LACTONE, (-)- 藤黃內(nèi)酯純度:>95%
172015-79-1 阿巴卡韋相關(guān)物質(zhì)C標(biāo)準(zhǔn)品 20mg
紫茉莉Mirabilis jalapa 黃細(xì)心同 E 137787-00-9 C17H12O7 ≥95% 匹漠本:用于系統(tǒng)適用性試驗(yàn)(Y000001
四坐嘧磺隆標(biāo)準(zhǔn)品 甲基谷流靈標(biāo)準(zhǔn)品 三扶羧草迷標(biāo)準(zhǔn)品
pxentermine xy7nochloride CIV鹽酸*標(biāo)準(zhǔn)品1197-21-3 200mg
鉤吻素子 1358-76-5 HPLC≥98%;20mg 訂購|咨詢
長春花 Catharanthus roseus (L.)G.Don Vindoline 文多靈 2182-14-1 C25H32N2O6 ≥98%
柚皮苷Ncringin1036-47-20mg
參皂苷Rh1;參皂甙Rh1 Ginsenoside Rh1 63223-86-9 20mg HPLC≥98% 用于含量測定
對照品右旋糖酐分子量D1140638-200001分子量測定
補(bǔ)骨脂寧;補(bǔ)骨脂異黃酮 corylin 53947-92-5 20mg HPLC≥98% 用于含量測定
大鼠血管內(nèi)皮細(xì)胞生長因子C(VEGF-C)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
人細(xì)胞色素c氧化酶亞基5A,線粒體(COX5A)免疫試劑盒 Human Cytochrome c oxidase subunit 5A,mitochondrial(COX5A)ELISA kit
還原酶測試盒 可見分光光度法 50管/24樣
RatomentinELISA試劑盒大鼠網(wǎng)膜素(omentin)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
HumanHya]uronatebindingprotein,HABPELISA試劑盒人透明質(zhì)酸結(jié)合蛋白(HABP)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
humanmajorvaultprotein,MVPELISAKit人主要穹窿蛋白(MVP)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
小鼠5羥色胺(5-HT)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
Rat cytochrome P4502E1 (CYP2E1) ELISA Kit 大鼠細(xì)胞色素P4502E1(CYP2E1)ELISA試劑盒
HumanLuteinizingHormone-ReleasingHormone,LHRHELISAKit 人黃體生成素釋放激素(LHRH)ELISA試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝
HumanComplementfragment3c,C3cELISA試劑盒人補(bǔ)體片段3c(C3c)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
組織EINKINASE1激酶活性定量檢測試劑盒(A/B/C)20次
HumanProthrombin,PISAKit人*原(PT)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
PMSF10ml使用說明書人可溶性蛋白185(sp185/HER-2)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
人可溶性白細(xì)胞抗原G(sHLA-G)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
人可溶性白細(xì)胞分化抗原86(B7-2/sCD86)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
人可溶性白細(xì)胞分化抗原40配體(sCD40L)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
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