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蛋白濃縮柱個(gè)實(shí)驗(yàn)方法

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更新時(shí)間:2017-07-04 14:15:50瀏覽次數(shù):256次

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蛋白濃縮柱個(gè)實(shí)驗(yàn)方法注意事項(xiàng)
1)本試劑只適用于實(shí)驗(yàn),不適用于臨床檢測(cè);
2PIpropidium iodide,碘化丙錠)有毒性,能通過(guò)皮膚吸收,對(duì)眼睛有刺激作用,使用時(shí)需戴手套;
3Annexin V-FITCPI是光敏物質(zhì),在操作時(shí)請(qǐng)注意避光。在處理和標(biāo)記時(shí),盡可能在暗處進(jìn)行。在孵育階段,用鋁箔包裹容器或置于抽屜中。細(xì)胞標(biāo)記后,在暗室內(nèi)用顯微鏡觀察;
4)整個(gè)操作過(guò)程動(dòng)作要盡量輕柔,勿用力吹打細(xì)胞,盡量在4下操作,以免影響細(xì)胞狀態(tài)。
5)在細(xì)胞洗滌的后一步,請(qǐng)盡量將上清棄凈,以免PBS殘留,有可能會(huì)影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
6)為防止熒光衰變,宜在1小時(shí)內(nèi)進(jìn)行流式檢測(cè)。
7PI染色時(shí)間過(guò)長(zhǎng)有可能造成檢測(cè)的凋亡率偏高,建議首*行Annexin V-FITC染色,短可在上機(jī)前5分鐘再加入PI染色。
蛋白濃縮柱個(gè)實(shí)驗(yàn)方法產(chǎn)品簡(jiǎn)介:

蛋白濃縮柱是一種方便的蛋白濃縮脫鹽工具,只需要離心操作即可以用來(lái)對(duì)蛋白質(zhì)液體樣本進(jìn)行濃縮,還可以用于蛋白質(zhì)、抗原、抗體、酶和微生物的濃縮純化。也可以用來(lái)對(duì)蛋白質(zhì)樣品中的鹽分、糖類(lèi)、核酸、非水溶劑及其他一些低分子量物質(zhì)進(jìn)行去除和緩沖液置換。還可以用來(lái)分離蛋白質(zhì)標(biāo)記時(shí)未結(jié)合上的游離標(biāo)記物。

實(shí)驗(yàn)操作步驟:
1、液的配制:
六孔板每孔所需JC-1 染色工作液的量為 1mL ,其他培養(yǎng)器皿的 JC-1 染色工作液的用量以此類(lèi)推;對(duì)于細(xì)胞懸液每50100 萬(wàn)細(xì)胞需0.5mL JC-1 染色工作液。取適量JC-1 200×),按照每50μL JC-1200×)加入 8mL 超純水的比例稀釋JC-1 。劇烈震蕩充分溶解并混勻 JC-1 。然后再加入2mL JC-1 染色緩沖液(5 ×),混勻后即為 JC-1 染色工作液。
2、陽(yáng)性對(duì)照的設(shè)置:
    把試劑盒中提供的CCCP10mM )*按照1 1000 的比例加入到細(xì)胞培養(yǎng)液中,稀釋至10uM ,處理細(xì)胞 20 分鐘。隨后按照下述方法裝載 JC-1 ,進(jìn)行線粒體膜電位的檢測(cè)。對(duì)于大多數(shù)細(xì)胞,通常10uM CCCP處理 20 分鐘后線粒體的膜電位會(huì)*喪失,JC-1 染色后觀察應(yīng)呈綠色熒光;而正常的細(xì)胞經(jīng)JC-1 染色后應(yīng)顯示紅色熒光。對(duì)于特定的細(xì)胞,CCCP 的作用濃度和作用時(shí)間可能有所不同,需自行參考相關(guān)文獻(xiàn)資料決定。
3、對(duì)于懸浮細(xì)胞:
1)取 1060 萬(wàn)細(xì)胞,重懸于 0.5mL 細(xì)胞培養(yǎng)液中,細(xì)胞培養(yǎng)液中可以含血清和酚紅。
2)加入 0.5mL JC-1 染色工作液,顛倒數(shù)次混勻。細(xì)胞培養(yǎng)箱中 37 孵育20 分鐘。
3)在孵育期間,按照每 1mL JC-1 染色緩沖液()加入 4mL 蒸餾水的比例,配制適量的JC-1 染色緩沖液(),并放置于冰浴。
437孵育結(jié)束后,600g 4 離心3 4 分鐘,沉淀細(xì)胞。棄上清,注意盡量不要吸除細(xì)胞。
5)用JC-1 染色緩沖液()洗滌 2 次:加入 1mL JC-1 染色緩沖液()重懸細(xì)胞,600g 4 離心34 分鐘,沉淀細(xì)胞,棄上清。再加入 1mL JC-1 染色緩沖液()重懸細(xì)胞,600g 4 離心 34 分鐘,沉淀細(xì)胞,棄上清。
6)再用適量 JC-1 染色緩沖液()重懸后,用熒光顯微鏡或激光共聚焦顯微鏡觀察,也可以用熒光分光光度計(jì)檢測(cè)或流式細(xì)胞儀分析。
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含量測(cè)定本溴馬隆100677-200401常溫,避光100mg

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小鼠S100鈣結(jié)合蛋白B(S100B)ELISA試劑盒 ,英文名: S100B ELISA Kit

人纖溶酶抗纖溶酶復(fù)合物(PAP)ELISA檢測(cè)試劑盒Humanplasmin-antiplasmincomplex,PAPELISAKit 96T/48T

大鼠橫紋肌輔肌動(dòng)蛋白α (sm Actinin-α )免疫試劑盒 Rat skeletal muscle Actinin-α,sm Actinin-α ELISA Kit

英文名稱Rat17-KSELISAKIT大鼠17-同皮質(zhì)類(lèi)固醇(17-KS)規(guī)格:96T/48T

裂解液IX:真菌/酵母細(xì)胞裂解液50

ELISAKitNGB人腦紅蛋白規(guī)格:48T/96T
小鼠N端前腦鈉素(NT-proBNP)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝

Rat homocysteic acid (Hcy) ELISA Kit 大鼠同型半*(Hcy)ELISA試劑盒

HumanEstradiol,E2ELISAKit 人雌二醇(E2)ELISA試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

humancolicinELISA試劑盒人大腸菌素(colicin)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T

組織3--3-甲戊二酰輔酶A(HMG-COA)合成酶活性比色法定量檢測(cè)試劑盒20

Humanregeneratinggene,REG-4ELISAKit人再生基因蛋白IV(REG-4)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
人內(nèi)皮型一氧化氮合成酶(eNOS)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

人內(nèi)皮素1(ET-1)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

人內(nèi)皮素(ET)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

人內(nèi)肽-2(EM-2)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

 

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