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蛋白酶抑制劑混合物(植物蛋白提取)1ml實(shí)驗(yàn)方法

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更新時間:2017-07-04 14:11:21瀏覽次數(shù):523次

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蛋白酶抑制劑混合物(植物蛋白提取)1ml實(shí)驗(yàn)方法產(chǎn)品簡介:

植物蛋白提取的過程中,蛋白質(zhì)容易被胞體和外源性蛋白酶降解。本試劑采用特殊的配方, 不含有EDTA,與金屬螯和層析兼容,適合于植物蛋白和重組蛋白質(zhì)的提取,大程度地保持蛋白質(zhì)的完整性。此抑制劑混合物為 100 倍濃縮DMSO 溶液,適用于從植物中提取蛋白,直接加入任何類型的裂解產(chǎn)物中,均能有效抑制蛋白酶的活性,更高效的提取目的蛋白。適用于Western Blot 和免疫共沉淀等。

蛋白酶抑制劑混合物(植物蛋白提?。?/span>1ml實(shí)驗(yàn)方法實(shí)驗(yàn)操作步驟:
1、液的配制:
六孔板每孔所需JC-1 染色工作液的量為 1mL ,其他培養(yǎng)器皿的 JC-1 染色工作液的用量以此類推;對于細(xì)胞懸液每50100 萬細(xì)胞需0.5mL JC-1 染色工作液。取適量JC-1 200×),按照每50μL JC-1200×)加入 8mL 超純水的比例稀釋JC-1 。劇烈震蕩充分溶解并混勻 JC-1 。然后再加入2mL JC-1 染色緩沖液(5 ×),混勻后即為 JC-1 染色工作液。
2、陽性對照的設(shè)置:
    把試劑盒中提供的CCCP10mM )*按照1 1000 的比例加入到細(xì)胞培養(yǎng)液中,稀釋至10uM ,處理細(xì)胞 20 分鐘。隨后按照下述方法裝載 JC-1 ,進(jìn)行線粒體膜電位的檢測。對于大多數(shù)細(xì)胞,通常10uM CCCP處理 20 分鐘后線粒體的膜電位會*喪失,JC-1 染色后觀察應(yīng)呈綠色熒光;而正常的細(xì)胞經(jīng)JC-1 染色后應(yīng)顯示紅色熒光。對于特定的細(xì)胞,CCCP 的作用濃度和作用時間可能有所不同,需自行參考相關(guān)文獻(xiàn)資料決定。
3、對于懸浮細(xì)胞:
1)取 1060 萬細(xì)胞,重懸于 0.5mL 細(xì)胞培養(yǎng)液中,細(xì)胞培養(yǎng)液中可以含血清和酚紅。
2)加入 0.5mL JC-1 染色工作液,顛倒數(shù)次混勻。細(xì)胞培養(yǎng)箱中 37 孵育20 分鐘。
3)在孵育期間,按照每 1mL JC-1 染色緩沖液()加入 4mL 蒸餾水的比例,配制適量的JC-1 染色緩沖液(),并放置于冰浴。
437孵育結(jié)束后,600g 4 離心3 4 分鐘,沉淀細(xì)胞。棄上清,注意盡量不要吸除細(xì)胞。
5)用JC-1 染色緩沖液()洗滌 2 次:加入 1mL JC-1 染色緩沖液()重懸細(xì)胞,600g 4 離心34 分鐘,沉淀細(xì)胞,棄上清。再加入 1mL JC-1 染色緩沖液()重懸細(xì)胞,600g 4 離心 34 分鐘,沉淀細(xì)胞,棄上清。
6)再用適量 JC-1 染色緩沖液()重懸后,用熒光顯微鏡或激光共聚焦顯微鏡觀察,也可以用熒光分光光度計(jì)檢測或流式細(xì)胞儀分析。
蛋白酶抑制劑混合物(植物蛋白提?。?/span>1ml實(shí)驗(yàn)方法注意事項(xiàng)
1)本試劑只適用于實(shí)驗(yàn),不適用于臨床檢測;
2PIpropidium iodide,碘化丙錠)有毒性,能通過皮膚吸收,對眼睛有刺激作用,使用時需戴手套;
3Annexin V-FITCPI是光敏物質(zhì),在操作時請注意避光。在處理和標(biāo)記時,盡可能在暗處進(jìn)行。在孵育階段,用鋁箔包裹容器或置于抽屜中。細(xì)胞標(biāo)記后,在暗室內(nèi)用顯微鏡觀察;
4)整個操作過程動作要盡量輕柔,勿用力吹打細(xì)胞,盡量在4下操作,以免影響細(xì)胞狀態(tài)。
5)在細(xì)胞洗滌的后一步,請盡量將上清棄凈,以免PBS殘留,有可能會影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
6)為防止熒光衰變,宜在1小時內(nèi)進(jìn)行流式檢測。
7PI染色時間過長有可能造成檢測的凋亡率偏高,建議首*行Annexin V-FITC染色,短可在上機(jī)前5分鐘再加入PI染色。
白柳皮 white willow bark P.E. Salicin 水楊苷 138-52-3 C13H18O7 98%

肉桂醇CinncmylclcoholHPLC98%;20mg/

濱蒿內(nèi)酯;6,7-二甲氧基;七葉內(nèi)酯二甲迷;蒿屬香豆精;東喘寧 Scoparone;6,7-Dimetxoxycoumarin 120-08-1 20mg HPLC98% 用于含量測定

HPLC法含量測定*100672-200401常溫,避光100mg

殘留溶劑第2類混合物B標(biāo)準(zhǔn)品1.2ml×3ampules
15500-66-0 泮庫溴銨標(biāo)準(zhǔn)品 200mg

賽門苷ISimonglycosideIHPLC98%,20mg/;

Rubiadin 茜根定 117-02-2

咪唑 標(biāo)準(zhǔn)品 號:31431-39-7 100MG

D-麥芽糖;純品型;標(biāo)準(zhǔn)品;有證書 6363-53-7 0.25g 訂購|咨詢
楊梅苷 17912-87-7 檢測用對照品 楊梅甙;五羥基黃酮-3-鼠李糖苷

羽扇豆 Lupinus polyphyllus 羽扇豆醇 545-47-1 C30H50O2 98% 青銅成分分析標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)(G02140

Alismoxide環(huán)氧澤瀉烯87701-68-620mg/

錄米芬相關(guān)雜質(zhì)A標(biāo)準(zhǔn)品74056-26-1100mg

華山姜Alpinia chinensis 15,16-Epoxy-12-xy7noxylabda- 8(17),13(16),14-triene 15,16-環(huán)氧-12R-羥基賴百當(dāng)-8(17),13(16),14-三烯 216011-55-1 C20H30O2 95%
大鼠血栓前體蛋白(TpP)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝

人纖溶抑制因子/*激活的纖溶抑制物(TAFI)免疫試劑盒 Human TAFI ELISA Kit

銅藍(lán)蛋白含量測試盒 可見分光光度法 50/24

RatNeonatalThyroxine,NN-T4ELISA試劑盒大鼠新生甲狀腺素(NN-T4)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T

HumanHerpessimplexvirusantibody,HSVAbELISA試劑盒人單純皰疹病毒Ⅰ型抗體(HSVAb)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T

Humanlymphocytefunctionassociatedantigen2,LFA-2ELISAKit人淋巴細(xì)胞功能相關(guān)抗原2(LFA-2/CD2)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
小鼠P選擇素(P-Selectin/CD62P/GMP140)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝

Rat glucocorticoid receptor alpha (GR- alpha) ELISA Kit 大鼠糖皮質(zhì)激素受體α(GR-α)ELISA試劑盒

Humanthyroxine,T4ELISAKit 人甲狀腺素(T4)ELISA試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

Humancoagulationfactor,FELISA試劑盒人*Ⅲ(F)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T

組蛋白脫乙?;?/span>6(HDAC6)活性比色法定量檢測試劑盒20

Humanretinoicacidinduciblegene/RIG-likereceptor,RLR-9ELISAKit人*誘導(dǎo)基因/RIG-1樣受體(RLR)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
蛋白酶抑制劑混合物(植物蛋白提?。?/span>1ml實(shí)驗(yàn)方法人*Ⅷ(F)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

人*Ⅲ(F)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

人*Ⅱ(F)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

人*原片段F1+2(F1+2)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

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