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更新時間:2017-07-04 14:11:21瀏覽次數(shù):523次
聯(lián)系我時,請告知來自 儀表網(wǎng)總蛋白提取試劑盒(無去垢劑)100T實(shí)驗(yàn)方法
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蛋白酶抑制劑混合物(植物蛋白提取)1ml實(shí)驗(yàn)方法產(chǎn)品簡介:
植物蛋白提取的過程中,蛋白質(zhì)容易被胞體和外源性蛋白酶降解。本試劑采用特殊的配方, 不含有EDTA,與金屬螯和層析兼容,適合于植物蛋白和重組蛋白質(zhì)的提取,大程度地保持蛋白質(zhì)的完整性。此抑制劑混合物為 100 倍濃縮DMSO 溶液,適用于從植物中提取蛋白,直接加入任何類型的裂解產(chǎn)物中,均能有效抑制蛋白酶的活性,更高效的提取目的蛋白。適用于Western Blot 和免疫共沉淀等。
蛋白酶抑制劑混合物(植物蛋白提?。?/span>1ml實(shí)驗(yàn)方法實(shí)驗(yàn)操作步驟:
1、液的配制:
六孔板每孔所需JC-1 染色工作液的量為 1mL ,其他培養(yǎng)器皿的 JC-1 染色工作液的用量以此類推;對于細(xì)胞懸液每50~100 萬細(xì)胞需0.5mL JC-1 染色工作液。取適量JC-1 (200×),按照每50μL JC-1(200×)加入 8mL 超純水的比例稀釋JC-1 。劇烈震蕩充分溶解并混勻 JC-1 。然后再加入2mL JC-1 染色緩沖液(5 ×),混勻后即為 JC-1 染色工作液。
2、陽性對照的設(shè)置:
把試劑盒中提供的CCCP(10mM )*按照1 ∶1000 的比例加入到細(xì)胞培養(yǎng)液中,稀釋至10uM ,處理細(xì)胞 20 分鐘。隨后按照下述方法裝載 JC-1 ,進(jìn)行線粒體膜電位的檢測。對于大多數(shù)細(xì)胞,通常10uM CCCP處理 20 分鐘后線粒體的膜電位會*喪失,JC-1 染色后觀察應(yīng)呈綠色熒光;而正常的細(xì)胞經(jīng)JC-1 染色后應(yīng)顯示紅色熒光。對于特定的細(xì)胞,CCCP 的作用濃度和作用時間可能有所不同,需自行參考相關(guān)文獻(xiàn)資料決定。
3、對于懸浮細(xì)胞:
(1)取 10~60 萬細(xì)胞,重懸于 0.5mL 細(xì)胞培養(yǎng)液中,細(xì)胞培養(yǎng)液中可以含血清和酚紅。
(2)加入 0.5mL JC-1 染色工作液,顛倒數(shù)次混勻。細(xì)胞培養(yǎng)箱中 37 ℃孵育20 分鐘。
(3)在孵育期間,按照每 1mL JC-1 染色緩沖液(5×)加入 4mL 蒸餾水的比例,配制適量的JC-1 染色緩沖液(1×),并放置于冰浴。
(4)37℃孵育結(jié)束后,600g 4 ℃離心3 ~4 分鐘,沉淀細(xì)胞。棄上清,注意盡量不要吸除細(xì)胞。
(5)用JC-1 染色緩沖液(1×)洗滌 2 次:加入 1mL JC-1 染色緩沖液(1×)重懸細(xì)胞,600g 4 ℃離心3~4 分鐘,沉淀細(xì)胞,棄上清。再加入 1mL JC-1 染色緩沖液(1×)重懸細(xì)胞,600g 4 ℃離心 3~4 分鐘,沉淀細(xì)胞,棄上清。
(6)再用適量 JC-1 染色緩沖液(1×)重懸后,用熒光顯微鏡或激光共聚焦顯微鏡觀察,也可以用熒光分光光度計(jì)檢測或流式細(xì)胞儀分析。
蛋白酶抑制劑混合物(植物蛋白提?。?/span>1ml實(shí)驗(yàn)方法注意事項(xiàng)
(1)本試劑只適用于實(shí)驗(yàn),不適用于臨床檢測;
(2)PI(propidium iodide,碘化丙錠)有毒性,能通過皮膚吸收,對眼睛有刺激作用,使用時需戴手套;
(3)Annexin V-FITC和PI是光敏物質(zhì),在操作時請注意避光。在處理和標(biāo)記時,盡可能在暗處進(jìn)行。在孵育階段,用鋁箔包裹容器或置于抽屜中。細(xì)胞標(biāo)記后,在暗室內(nèi)用顯微鏡觀察;
(4)整個操作過程動作要盡量輕柔,勿用力吹打細(xì)胞,盡量在4℃下操作,以免影響細(xì)胞狀態(tài)。
(5)在細(xì)胞洗滌的后一步,請盡量將上清棄凈,以免PBS殘留,有可能會影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
(6)為防止熒光衰變,宜在1小時內(nèi)進(jìn)行流式檢測。
(7)PI染色時間過長有可能造成檢測的凋亡率偏高,建議首*行Annexin V-FITC染色,短可在上機(jī)前5分鐘再加入PI染色。
白柳皮 white willow bark P.E. Salicin 水楊苷 138-52-3 C13H18O7 ≥98%
肉桂醇CinncmylclcoholHPLC≥98%;20mg/支
濱蒿內(nèi)酯;6,7-二甲氧基;七葉內(nèi)酯二甲迷;蒿屬香豆精;東喘寧 Scoparone;6,7-Dimetxoxycoumarin 120-08-1 20mg HPLC≥98% 用于含量測定
HPLC法含量測定*100672-200401常溫,避光100mg
殘留溶劑第2類混合物B標(biāo)準(zhǔn)品1.2ml×3ampules
15500-66-0 泮庫溴銨標(biāo)準(zhǔn)品 200mg
賽門苷ISimonglycosideIHPLC≥98%,20mg/支;
Rubiadin 茜根定 117-02-2
咪唑 標(biāo)準(zhǔn)品 號:31431-39-7 100MG
D-麥芽糖;純品型;標(biāo)準(zhǔn)品;有證書 6363-53-7 0.25g 訂購|咨詢
楊梅苷 17912-87-7 檢測用對照品 楊梅甙;五羥基黃酮-3-鼠李糖苷
羽扇豆 Lupinus polyphyllus 羽扇豆醇 545-47-1 C30H50O2 ≥98% 青銅成分分析標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)(G02140
Alismoxide環(huán)氧澤瀉烯87701-68-620mg/支
錄米芬相關(guān)雜質(zhì)A標(biāo)準(zhǔn)品74056-26-1100mg
華山姜Alpinia chinensis 15,16-Epoxy-12-xy7noxylabda- 8(17),13(16),14-triene 15,16-環(huán)氧-12R-羥基賴百當(dāng)-8(17),13(16),14-三烯 216011-55-1 C20H30O2 ≥95%
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人*Ⅲ(FⅢ)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
人*Ⅱ(FⅡ)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
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