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更新時間:2017-07-04 14:08:36瀏覽次數(shù):227次
聯(lián)系我時,請告知來自 儀表網(wǎng)核蛋白提取試劑盒50T實驗方法使用注意事項
1.微量試劑取用前請離心集液。
2.7-AAD避光保存及使用。
3.7-AAD為潛在致癌物,操作時請采取防護措施,穿*、戴手套等。
4.本試劑盒適用于檢測活細(xì)胞,流式細(xì)胞儀檢測時,細(xì)胞數(shù)量不以應(yīng)低于1×105,,不*用于檢測組織樣本。
產(chǎn)品名稱:核蛋白提取試劑盒50T實驗方法
產(chǎn)品簡介:
提供全套試劑,適用于從各種原代或傳代細(xì)胞和各種實體組織,如腦、脊髓、神經(jīng)結(jié)或纖維、脂肪、肝臟、消化道、腎臟、心臟、肌肉、血管、結(jié)締組織等哺乳動物組織中提取核蛋白和胞漿蛋白。提取過程簡單方便,可在1小時內(nèi)完成。制備的核蛋白和胞漿蛋白不僅純度高,保持天然活性,而且絕少交叉污染。提取的蛋白可用于Western Blotting、轉(zhuǎn)錄活性分析、Gel shift凝膠阻滯實驗、免疫共沉淀、酶活性測定等蛋白研究。
50T實驗方法操作方法
1.懸浮細(xì)胞離心(2000rpm離心5min)收集;貼壁細(xì)胞用*消化收集用PBS洗滌細(xì)胞二次(2000rpm離心5min)收集1~5×105細(xì)胞;
2.加入5μL 7-AAD染液,混勻;室溫、避光、反應(yīng)5~15min;
3.加入500μL的1×Assays Buffer懸浮細(xì)胞;
4.請在1 hour內(nèi),進行下述熒光顯微鏡或流式細(xì)胞儀的觀察和檢測。
A.熒光顯微鏡觀察
1.滴一滴上述染色后的細(xì)胞懸液于載玻片上,并用蓋玻片蓋上細(xì)胞;
2.對于貼壁細(xì)胞來說,也可直接用蓋玻片來培養(yǎng)細(xì)胞并誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡;
(1)將細(xì)胞于蓋玻片上生長,用適當(dāng)?shù)牡蛲稣T導(dǎo)劑誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡,并設(shè)立陰性對照組;
(2)用PBS洗滌細(xì)胞兩次;
(3)在500μL 的1×Assays Buffer中加入5μL7-AAD染液,混勻;
(4)將上述溶液滴加于蓋玻片表面,使長有細(xì)胞的蓋玻片表面均勻覆蓋;
(5)避光、室溫反應(yīng)5 min。
3.將蓋玻片倒置于載玻片上,于熒光顯微鏡下觀察激發(fā)波長546nm,發(fā)射波長647 nm,7-AAD熒光信號呈紅色。
B.流式細(xì)胞儀分析
用流式細(xì)胞儀檢測,激發(fā)波長Ex=546 nm; 發(fā)射波長Em=647 nm。
7-AAD紅色熒光建議使用FL3通道檢測。
50T實驗方法實驗步驟
貼壁細(xì)胞需用0.25%的*消化。注意過度消化可損傷細(xì)胞。在消化時可加2%的BSA可防止消化過度。如果用含EDTA的*消化時,注意必須*清除EDTA:在標(biāo)記前用1×PBS或1×bindingbuffer洗滌,清除EDTA,以免殘余的EDTA與Ca2+螯合,影響Annexin V的結(jié)合。
(1)用去離子水將10×Binding Buffer稀釋成1×Binding Buffer;
(2)細(xì)胞收集。懸浮細(xì)胞收集:離心5分鐘;貼壁細(xì)胞:用不含EDTA的*消化收集后(注:*消化時間不宜過長,否則會影響細(xì)胞膜上磷脂酰*與Annexin V-FITC的結(jié)合),于室溫2000rpm離心5~10分鐘,收集細(xì)胞;
(3)細(xì)胞洗滌:用預(yù)冷1×PBS(4℃)重懸細(xì)胞一次,2000rpm離心5~10分鐘,洗滌細(xì)胞;
(4)加入300μL 的1×Binding Buffer 懸浮細(xì)胞;
(5)Annexin V-FITC標(biāo)記:加入5μL的Annexin V-FITC混勻后,避光,室溫孵育15分鐘;
(6)PI標(biāo)記:上機前5分鐘再加入5μL的PI染色。
(7)上機前,補加200μL的1×Binding Buffer。
紅花 Carthamus tinctorius Saffower Yellower * 36338-96-2 C43H44O24 ≥98%
濱蒿內(nèi)酯ScopcronqHPLC≥98%,20mg/支
扁塑藤素 Pristimerin 1258-84-0 20mg HPLC≥98% 用于含量測定
含量測定*100666-200401常溫,避光50mg
草酸*雜質(zhì)A對照品標(biāo)準(zhǔn)品128173-53-510mg
15308-34-6 鹽酸去甲本福林標(biāo)準(zhǔn)品 25mg
華三松Pinus armandii (E)-3-乙酰氧基-5-甲氧基二本 71144-78-0 C17H16O3 ≥98% 鎮(zhèn)痛新;噴他佐心 - 對照譜圖(P005500
(-)-Rhododendrol 杜鵑醇 501-96-2
Digitalis洋地黃標(biāo)準(zhǔn)品8031-42-33g
款冬酮 84625-50-3 HPLC≥98%;20mg 訂購|咨詢
99-67-2 丙戊酸相關(guān)物質(zhì)A標(biāo)準(zhǔn)品 0.25ml
羽葉頭樹Garuga pinnata none 56973-51-4 C19H22O4 ≥95% 香茅醇0 6681
Rotundic acid 鐵冬青酸 20137-37-5
Trientine xy7nochloride鹽酸三四胺標(biāo)準(zhǔn)品38260-01-4 200mg
沒食子酸乙酯 831-61-8 HPLC≥98%;20mg 訂購|咨詢
小鼠賴酸tRNA合成酶(KARS)ELISA試劑盒 ,英文名: KARS ELISA Kit
人纖維母細(xì)胞表面抗原(FSP)ELISA檢測試劑盒HumanFibroblastsurfaceprotein,FSPELISAKit 96T/48T
大鼠血小板反應(yīng)蛋白/*敏感蛋白1(TSP-1)免疫試劑盒 Rat thrombospondin 1,TSP-1 ELISA Kit
英文名稱RatTumornecrosisfactorsolublereceptorIELISAKIT大鼠腫瘤壞死因子可溶性受體I(TNFsRI)規(guī)格:96T/48T
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