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更新時間:2017-07-04 14:03:55瀏覽次數(shù):380次
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產(chǎn)品名稱:支原體去除噴劑200ml實驗方法
儲存條件:2-8℃保存。
有效期:一年。
產(chǎn)品簡介:
支原體是一種大小僅為0.2~0.3μm,無細胞壁,可透過一般過濾膜(0.22-0.45μm)的原核生物,在細胞培養(yǎng)過程中,支原體感染發(fā)生率達到63%,因而細胞培養(yǎng)過程中被支原體污染是一個世界性的難題。多篇文獻研究表明:當細胞(特別是傳代細胞)被支原體污染后,細胞內(nèi)的DNA、RNA及蛋白表達發(fā)生改變,而細胞的生長率一般并未發(fā)生顯著的影響,因而細胞被支原體污染一般難以察覺,嚴重時會導(dǎo)致細胞生長緩慢,狀態(tài)不好。
支原體去除噴劑200ml實驗方法使用注意事項
1.微量試劑取用前請離心集液。
2.7-AAD避光保存及使用。
3.7-AAD為潛在致癌物,操作時請采取防護措施,穿*、戴手套等。
4.本試劑盒適用于檢測活細胞,流式細胞儀檢測時,細胞數(shù)量不以應(yīng)低于1×105,,不*用于檢測組織樣本。
支原體去除噴劑200ml實驗方法操作方法
1.懸浮細胞離心(2000rpm離心5min)收集;貼壁細胞用*消化收集用PBS洗滌細胞二次(2000rpm離心5min)收集1~5×105細胞;
2.加入5μL 7-AAD染液,混勻;室溫、避光、反應(yīng)5~15min;
3.加入500μL的1×Assays Buffer懸浮細胞;
4.請在1 hour內(nèi),進行下述熒光顯微鏡或流式細胞儀的觀察和檢測。
A.熒光顯微鏡觀察
1.滴一滴上述染色后的細胞懸液于載玻片上,并用蓋玻片蓋上細胞;
2.對于貼壁細胞來說,也可直接用蓋玻片來培養(yǎng)細胞并誘導(dǎo)細胞凋亡;
(1)將細胞于蓋玻片上生長,用適當?shù)牡蛲稣T導(dǎo)劑誘導(dǎo)細胞凋亡,并設(shè)立陰性對照組;
(2)用PBS洗滌細胞兩次;
(3)在500μL 的1×Assays Buffer中加入5μL7-AAD染液,混勻;
(4)將上述溶液滴加于蓋玻片表面,使長有細胞的蓋玻片表面均勻覆蓋;
(5)避光、室溫反應(yīng)5 min。
3.將蓋玻片倒置于載玻片上,于熒光顯微鏡下觀察激發(fā)波長546nm,發(fā)射波長647 nm,7-AAD熒光信號呈紅色。
B.流式細胞儀分析
用流式細胞儀檢測,激發(fā)波長Ex=546 nm; 發(fā)射波長Em=647 nm。
7-AAD紅色熒光建議使用FL3通道檢測。
支原體去除噴劑200ml實驗方法實驗步驟
貼壁細胞需用0.25%的*消化。注意過度消化可損傷細胞。在消化時可加2%的BSA可防止消化過度。如果用含EDTA的*消化時,注意必須*清除EDTA:在標記前用1×PBS或1×bindingbuffer洗滌,清除EDTA,以免殘余的EDTA與Ca2+螯合,影響Annexin V的結(jié)合。
(1)用去離子水將10×Binding Buffer稀釋成1×Binding Buffer;
(2)細胞收集。懸浮細胞收集:離心5分鐘;貼壁細胞:用不含EDTA的*消化收集后(注:*消化時間不宜過長,否則會影響細胞膜上磷脂酰*與Annexin V-FITC的結(jié)合),于室溫2000rpm離心5~10分鐘,收集細胞;
(3)細胞洗滌:用預(yù)冷1×PBS(4℃)重懸細胞一次,2000rpm離心5~10分鐘,洗滌細胞;
(4)加入300μL 的1×Binding Buffer 懸浮細胞;
(5)Annexin V-FITC標記:加入5μL的Annexin V-FITC混勻后,避光,室溫孵育15分鐘;
(6)PI標記:上機前5分鐘再加入5μL的PI染色。
(7)上機前,補加200μL的1×Binding Buffer。
構(gòu)樹Broussonetia papyrifera Rutaretin 蕓香霉素 13895-92-6 C14H14O5 ≥95%
(R型)人參皂苷Rh2GinsqnosidqRh2(Rtypq)20mg/支
斑蝥素 Cantharidin 56-25-7 20mg HPLC≥98% 用于含量測定
HPLC法含量測定*100658-200401常溫,避光100mg
*相關(guān)物質(zhì)A標準品63-56-2 30mg
151-21-3 十二烷基流鈉標準品 1g
屋司他丁Ulinastatin1000u/瓶
Xanthoxyletin 黃木亭 84-99-1
Asparagine Monohydrate一水天冬酰胺標準品5794-13-8200mg
白果新酸 20261-38-5 HPLC≥98%;20mg 訂購|咨詢
纖維蛋白原(牛血) Fibrinogen(Niu Xue) 88mg可凝蛋白/支
鳶尾苷Tqctoridin248-77-6HPLC≥98%,20mg/vial
楊梅苷;楊梅甙; 五輕基黃同-3-鼠李糖苷 Myricetrin 17912-87-7 20mg HPLC≥98% 用于含量測定
標準品肝素509-9911效價測定
格列風內(nèi)酯 Griffonilide 61371-55-9 20mg HPLC≥98% 用于含量測定
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