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更新時間:2017-07-04 14:00:27瀏覽次數(shù):177次
聯(lián)系我時,請告知來自 儀表網(wǎng)硼酸鹽緩沖液(BBS,pH8.5-10)500ml使用說明書
支原體預防試劑5ml使用說明書儲存條件:2-8℃保存。
有效期:一年。
產(chǎn)品簡介:
支原體是一種大小僅為0.2~0.3μm,無細胞壁,可透過一般過濾膜(0.22-0.45μm)的原核生物,在細胞培養(yǎng)過程中,支原體感染發(fā)生率達到63%,因而細胞培養(yǎng)過程中被支原體污染是一個世界性的難題。多篇文獻研究表明:當細胞(特別是傳代細胞)被支原體污染后,細胞內(nèi)的DNA、RNA及蛋白表達發(fā)生改變,而細胞的生長率一般并未發(fā)生顯著的影響,因而細胞被支原體污染一般難以察覺,嚴重時會導致細胞生長緩慢,狀態(tài)不好。
支原體預防試劑5ml使用說明書實驗操作步驟:
1、液的配制:
六孔板每孔所需JC-1 染色工作液的量為 1mL ,其他培養(yǎng)器皿的 JC-1 染色工作液的用量以此類推;對于細胞懸液每50~100 萬細胞需0.5mL JC-1 染色工作液。取適量JC-1 (200×),按照每50μL JC-1(200×)加入 8mL 超純水的比例稀釋JC-1 。劇烈震蕩充分溶解并混勻 JC-1 。然后再加入2mL JC-1 染色緩沖液(5 ×),混勻后即為 JC-1 染色工作液。
2、陽性對照的設置:
把試劑盒中提供的CCCP(10mM )*按照1 ∶1000 的比例加入到細胞培養(yǎng)液中,稀釋至10uM ,處理細胞 20 分鐘。隨后按照下述方法裝載 JC-1 ,進行線粒體膜電位的檢測。對于大多數(shù)細胞,通常10uM CCCP處理 20 分鐘后線粒體的膜電位會*喪失,JC-1 染色后觀察應呈綠色熒光;而正常的細胞經(jīng)JC-1 染色后應顯示紅色熒光。對于特定的細胞,CCCP 的作用濃度和作用時間可能有所不同,需自行參考相關文獻資料決定。
3、對于懸浮細胞:
(1)取 10~60 萬細胞,重懸于 0.5mL 細胞培養(yǎng)液中,細胞培養(yǎng)液中可以含血清和酚紅。
(2)加入 0.5mL JC-1 染色工作液,顛倒數(shù)次混勻。細胞培養(yǎng)箱中 37 ℃孵育20 分鐘。
(3)在孵育期間,按照每 1mL JC-1 染色緩沖液(5×)加入 4mL 蒸餾水的比例,配制適量的JC-1 染色緩沖液(1×),并放置于冰浴。
(4)37℃孵育結束后,600g 4 ℃離心3 ~4 分鐘,沉淀細胞。棄上清,注意盡量不要吸除細胞。
(5)用JC-1 染色緩沖液(1×)洗滌 2 次:加入 1mL JC-1 染色緩沖液(1×)重懸細胞,600g 4 ℃離心3~4 分鐘,沉淀細胞,棄上清。再加入 1mL JC-1 染色緩沖液(1×)重懸細胞,600g 4 ℃離心 3~4 分鐘,沉淀細胞,棄上清。
(6)再用適量 JC-1 染色緩沖液(1×)重懸后,用熒光顯微鏡或激光共聚焦顯微鏡觀察,也可以用熒光分光光度計檢測或流式細胞儀分析。
支原體預防試劑5ml使用說明書注意事項
(1)本試劑只適用于實驗,不適用于臨床檢測;
(2)PI(propidium iodide,碘化丙錠)有毒性,能通過皮膚吸收,對眼睛有刺激作用,使用時需戴手套;
(3)Annexin V-FITC和PI是光敏物質(zhì),在操作時請注意避光。在處理和標記時,盡可能在暗處進行。在孵育階段,用鋁箔包裹容器或置于抽屜中。細胞標記后,在暗室內(nèi)用顯微鏡觀察;
(4)整個操作過程動作要盡量輕柔,勿用力吹打細胞,盡量在4℃下操作,以免影響細胞狀態(tài)。
(5)在細胞洗滌的后一步,請盡量將上清棄凈,以免PBS殘留,有可能會影響實驗結果。
(6)為防止熒光衰變,宜在1小時內(nèi)進行流式檢測。
(7)PI染色時間過長有可能造成檢測的凋亡率偏高,建議首*行Annexin V-FITC染色,短可在上機前5分鐘再加入PI染色。
吳茱萸Evodia rutaecarpa (Juss.) Benth. Rutaecarpine 吳茱萸次堿 84-26-4 C18H13N3O ≥98%
白花前胡炳速WhiticnHuBingsuHPLC≥98%;20mg/支
楊素;5,7-二輕基黃同; 柯應; 5,7-楊黃素; 金黃同 Chrysin 480-40-0 20mg HPLC≥98% 用于含量測定
HPLC法含量測定*100657-200401常溫,避光100mg
*相關物質(zhì)B標準品4880-92-6 30mg
1508-65-2 錄化奧昔布寧標準品 200mg
秋水仙減;秋水仙速Colchicine;ColchicineColchicineHPLC≥98%,20mg/支
p-CouMaryl alcohol 對輕基肉桂醇 653915
potewwium Gluconate 葡萄糖酸鉀標準品299-27-4 200mg葡萄糖酸鉀標準品
派利文堿 2673-40-7 HPLC≥98%;20mg 訂購|咨詢
*雜質(zhì)B標準品 1.15ml
鳶尾皇速Tectorigenin248-77-6HPLC≥98%,20mg/支
StigMasta-4,22-diene-3β,6β-diol 豆甾-4,22-二烯-3BETA,6BETA-二醇 167958-89-6
Oxybenzone 羥本甲酮標準品131-57-7 150mg羥本甲酮標準品
鯊肌醇 488-59-5 HPLC≥98%;20mg 訂購|咨詢
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