支原體預防試劑5ml使用說明書儲存條件：2-8℃保存。

有效期：一年。

產(chǎn)品簡介：

支原體是一種大小僅為0.2~0.3μm，無細胞壁，可透過一般過濾膜（0.22-0.45μm）的原核生物，在細胞培養(yǎng)過程中，支原體感染發(fā)生率達到63%，因而細胞培養(yǎng)過程中被支原體污染是一個世界性的難題。多篇文獻研究表明：當細胞（特別是傳代細胞）被支原體污染后，細胞內(nèi)的DNA、RNA及蛋白表達發(fā)生改變，而細胞的生長率一般并未發(fā)生顯著的影響，因而細胞被支原體污染一般難以察覺，嚴重時會導致細胞生長緩慢，狀態(tài)不好。

支原體預防試劑5ml使用說明書實驗操作步驟：
1、液的配制：
六孔板每孔所需JC-1 染色工作液的量為 1mL ，其他培養(yǎng)器皿的 JC-1 染色工作液的用量以此類推；對于細胞懸液每50～100 萬細胞需0.5mL JC-1 染色工作液。取適量JC-1 （200×），按照每50μL JC-1（200×）加入 8mL 超純水的比例稀釋JC-1 。劇烈震蕩充分溶解并混勻 JC-1 。然后再加入2mL JC-1 染色緩沖液（5 ×），混勻后即為 JC-1 染色工作液。
2、陽性對照的設置：
    把試劑盒中提供的CCCP（10mM ）*按照1 ∶1000 的比例加入到細胞培養(yǎng)液中，稀釋至10uM ，處理細胞 20 分鐘。隨后按照下述方法裝載 JC-1 ，進行線粒體膜電位的檢測。對于大多數(shù)細胞，通常10uM CCCP處理 20 分鐘后線粒體的膜電位會*喪失，JC-1 染色后觀察應呈綠色熒光；而正常的細胞經(jīng)JC-1 染色后應顯示紅色熒光。對于特定的細胞，CCCP 的作用濃度和作用時間可能有所不同，需自行參考相關文獻資料決定。
3、對于懸浮細胞：
（1）取 10～60 萬細胞，重懸于 0.5mL 細胞培養(yǎng)液中，細胞培養(yǎng)液中可以含血清和酚紅。
（2）加入 0.5mL JC-1 染色工作液，顛倒數(shù)次混勻。細胞培養(yǎng)箱中 37 ℃孵育20 分鐘。
（3）在孵育期間，按照每 1mL JC-1 染色緩沖液（5×）加入 4mL 蒸餾水的比例，配制適量的JC-1 染色緩沖液（1×），并放置于冰浴。
（4）37℃孵育結束后，600g 4 ℃離心3 ～4 分鐘，沉淀細胞。棄上清，注意盡量不要吸除細胞。
（5）用JC-1 染色緩沖液（1×）洗滌 2 次：加入 1mL JC-1 染色緩沖液（1×）重懸細胞，600g 4 ℃離心3～4 分鐘，沉淀細胞，棄上清。再加入 1mL JC-1 染色緩沖液（1×）重懸細胞，600g 4 ℃離心 3～4 分鐘，沉淀細胞，棄上清。
（6）再用適量 JC-1 染色緩沖液（1×）重懸后，用熒光顯微鏡或激光共聚焦顯微鏡觀察，也可以用熒光分光光度計檢測或流式細胞儀分析。
支原體預防試劑5ml使用說明書注意事項
（1）本試劑只適用于實驗，不適用于臨床檢測；
（2）PI（propidium iodide，碘化丙錠）有毒性，能通過皮膚吸收，對眼睛有刺激作用，使用時需戴手套；
（3）Annexin V-FITC和PI是光敏物質(zhì)，在操作時請注意避光。在處理和標記時，盡可能在暗處進行。在孵育階段，用鋁箔包裹容器或置于抽屜中。細胞標記后，在暗室內(nèi)用顯微鏡觀察；
（4）整個操作過程動作要盡量輕柔，勿用力吹打細胞，盡量在4℃下操作，以免影響細胞狀態(tài)。
（5）在細胞洗滌的后一步，請盡量將上清棄凈，以免PBS殘留，有可能會影響實驗結果。
（6）為防止熒光衰變，宜在1小時內(nèi)進行流式檢測。
（7）PI染色時間過長有可能造成檢測的凋亡率偏高，建議首*行Annexin V-FITC染色，短可在上機前5分鐘再加入PI染色。
吳茱萸Evodia rutaecarpa (Juss.) Benth. Rutaecarpine 吳茱萸次堿 84-26-4 C18H13N3O ≥98%

白花前胡炳速WhiticnHuBingsuHPLC≥98%;20mg/支

楊素;5,7-二輕基黃同; 柯應; 5,7-楊黃素; 金黃同 Chrysin 480-40-0 20mg HPLC≥98% 用于含量測定

HPLC法含量測定*100657-200401常溫，避光100mg

*相關物質(zhì)B標準品4880-92-6 30mg
1508-65-2 錄化奧昔布寧標準品 200mg

秋水仙減;秋水仙速Colchicine;ColchicineColchicineHPLC≥98%,20mg/支

p-CouMaryl alcohol 對輕基肉桂醇 653915

potewwium Gluconate 葡萄糖酸鉀標準品299-27-4 200mg葡萄糖酸鉀標準品

派利文堿 2673-40-7 HPLC≥98%;20mg 訂購|咨詢
*雜質(zhì)B標準品 1.15ml

鳶尾皇速Tectorigenin248-77-6HPLC≥98%,20mg/支

StigMasta-4,22-diene-3β,6β-diol 豆甾-4,22-二烯-3BETA,6BETA-二醇 167958-89-6

Oxybenzone 羥本甲酮標準品131-57-7 150mg羥本甲酮標準品

鯊肌醇 488-59-5 HPLC≥98%;20mg 訂購|咨詢
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