當前位置:上海谷研實業(yè)有限公司>>生化檢測試劑盒>>氧化磷酸化系列>> 48T/96TATP含量HPLC法檢測試劑盒
貨號 | GOY-01S6550 |
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商品屬性:
產(chǎn)品名稱 | |
規(guī)格 | 50管/48樣 |
檢測方法 | HPLC法 |
貨號 | GOY-01S6550 |
商品介紹:
測定意義
ATP廣泛存在于動物、植物、微生物和培養(yǎng)細胞中,是生物能量通貨,能荷是描述細胞能量代謝狀態(tài)的主要參數(shù)。測定ATP含量并且計算能荷,能夠反映能量代謝狀態(tài)。
測定原理:
肌酸激酶催化肌酸和ATP反應生成磷酸肌酸,可在700nm下用磷鉬酸比色法檢測磷酸肌酸含量,以此反應ATP含量。
自備儀器和用品:
分光光度計/酶標儀、水浴鍋、可調(diào)式移液槍、微量石英比色皿/96孔板、研缽和蒸餾水。
實驗方法學:
一、肝素的配制: 市售肝素凍干粉140單位/mg,1克瓶裝,每瓶140,000單位,稱取0.1克肝素凍干粉,加生理鹽水5ml,配成2800單位/ml。取50~100μl濕潤管壁,可抗凝人血3~5ml,血液不會凝固。老鼠血易凝固,所以最好更濃一些??梢匀?/span>0.1克肝素凍干粉,加3ml生理鹽水溶解后,取50~100μl,可抗凝鼠血2~4ml。 肝素抗凝管的制備:取0.1克肝素凍干粉,加2.5ml生理鹽水。取100μl~150μl滴入塑料或玻璃管中,濕潤管壁,低于80℃小烤箱中(可以用烤面包的小烤箱),橫向轉(zhuǎn)動,每隔5~10分鐘轉(zhuǎn)動一次,直至干燥后放入4℃保存,可使2~5ml血液不凝固。 | 二、血液樣本的收集: 全血根據(jù)收集的條件,分成不抗凝和抗凝兩種。同時,不抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱之為血清;抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱之為血漿。 1、不抗凝收集血清:將收集好的全血,靜置1~2小時,直接低速離心分離出血清待用或保存。 2、抗凝收集血漿: 收集抗凝全血,輕輕顛倒充分抗凝后,可直接低速離心分離血漿(也可靜置半小時左右再低速離心分離血漿)待用或保存。根據(jù)不同抗凝劑的性能特征,選擇合適的抗凝劑。實驗室常用的抗凝劑有肝素的各種鹽、EDTA。 |
選擇抗凝的注意點:
①、每一份樣本所加的抗凝劑的量要一致,同時所取的全血的量也要盡量一致;
②、收集抗凝全血后一定要輕輕顛倒,充分抗凝,防止部分血液未接觸到抗凝劑而導致凝固;
③、抗凝全血收集的血漿相對較多(1ml抗凝全血能分離出0.4~0.5ml血漿);
④、抗凝收集的血漿冷凍保存后,解凍時可能會出現(xiàn)絮狀渾濁,如有則需要離心去掉渾濁后
用于測定。
L-纈甲酯鹽酸鹽 99%斯皮諾素 分析標準品,≥97%Anti-MDM2 雙微體2癌基因抗體
環(huán)烷羧酸 98%水飛薊寧 分析標準品,≥98% Anti-Phospho-MDM2 (Ser166) 化雙微體2癌基因抗體
吡咯烷 99%水飛薊亭 分析標準品,≥98% Anti-MDR1/p-GP/CD243 多藥耐藥蛋白/P-糖蛋白抗體
1-四氫萘酮 97% 分析標準品,≥98%Anti-MEF2A 肌增強因子2抗體
鎢酸銨 99.99% (metals basis)茵芋苷 分析標準品,≥98%Anti-Phospho-MEF2A (Thr312) 化肌增強因子2抗體
鎢酸銨 AR,99%知母皂苷元 分析標準品,≥98% Anti-Phospho-MEF2A (Ser408) 化肌增強因子2抗體
仲鎢酸銨 99.95 %千金藤堿 分析標準品,≥98%Anti-Megsin 蛋白抑制劑B7抗體
鉬酸銨,四水 AR五味子素 分析標準品,≥98%Anti-Melamine 三聚抗體
ATP含量HPLC法檢測試劑盒聚烯酰 非離子型,分子量:200萬-1400萬絲氨蛋白/線粒體絲氨蛋白多肽抗原
N-鄰 99%離子鈣接頭蛋白抗原
蘿卜硫素 90%小腸型脂肪結(jié)合蛋白抗原
異龍腦酯 95%干擾素誘導跨膜蛋白1抗原
亞鈉 80%干擾素-α抗原(人)
N,N-二乙-2--1,4- 99%干擾素-gamma受體1抗原
超細球形銅粉 99.9%,D50(0.2~0.55μm) 胰島素樣生長因子結(jié)合蛋白-2(多肽)
2,4-二-3,5-二硝三氟 97%胰島素樣生長因子結(jié)合蛋白-3抗原
2,4,5-三嘧 98%胰島素樣生長因子2 mRNA 結(jié)合蛋白3抗原
2-酰酯 98%KB抑制蛋白β(多肽)
氨乙縮二 97%KB抑制蛋白α抗原
4-乙烯 98% 白介素12抗原(白介素-12)
納米氮化鋁 99.9% metals basis,50nm白介素12抗原(人)
六方氮化 99.9% metals basis,1~2μm白介素-12受體β2抗原
碳化 1-10 μm,98%白介素13抗原
操作步驟:
實驗開始前,各試劑均應平衡至室溫(試劑不能直接在37℃溶解);試劑或樣品稀釋時,均需混勻,混勻時盡量避免起泡。實驗前應預測樣品含量,如樣品濃度過高時,應對樣品進行稀釋,以使稀釋后的樣品符合試劑盒的檢測范圍,計算時再乘以相應的稀釋倍數(shù)。
1. 加樣:分別設(shè)空白孔、標準孔、待測樣品孔。空白孔加樣品稀釋液100μl,余孔分別加標準品或待測樣品100μl,注意不要有氣泡,加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻,酶標板加上蓋或覆膜,37℃反應120分鐘。為保證實驗結(jié)果有效性,每次實驗請使用新的標準品溶液。
2. 棄去液體,甩干,不用洗滌。每孔加檢測溶液A工作液 100μl(在使用前一小時內(nèi)配制),酶標板加上覆膜, 37℃反應60分鐘。
3. 溫育60分鐘后,棄去孔內(nèi)液體,甩干,洗板3次,每次浸泡1-2分鐘,大約400μl/每孔,甩干(也可輕拍將孔內(nèi)液體拍干)。
4. 每孔加檢測溶液B工作液(同檢測A工作液) 100μl,酶標板加上覆膜37℃反應60分鐘。
5. 溫育60分鐘后,棄去孔內(nèi)液體,甩干,洗板5次,每次浸泡1-2分鐘,350μl/每孔,甩干(也可輕拍將孔內(nèi)液體拍干)。
6. 依序每孔加底物溶液90μl,酶標板加上覆膜37℃避光顯色(30分鐘內(nèi),此時肉眼可見標準品的前3-4孔有明顯的梯度蘭色,后3-4孔梯度不明顯,即可終止)。
7. 依序每孔加終止溶液50μl,終止反應,此時藍色立轉(zhuǎn)黃色。終止液的加入順序應盡量與底物液的加入順序相同。為了保證實驗結(jié)果的準確性,底物反應時間到后應盡快加入終止液。
8. 用酶聯(lián)儀在450nm波長依序測量各孔的光密度(OD值)。
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