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當(dāng)前位置:上海谷研實(shí)業(yè)有限公司>>生化檢測(cè)試劑盒>>氧化磷酸化系列>> 轉(zhuǎn)氫酶1紫外分光光度法檢測(cè)試劑盒
貨號(hào) | GOY-01S6566 |
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操作步驟:
實(shí)驗(yàn)開(kāi)始前,各試劑均應(yīng)平衡至室溫(試劑不能直接在37℃溶解);試劑或樣品稀釋時(shí),均需混勻,混勻時(shí)盡量避免起泡。實(shí)驗(yàn)前應(yīng)預(yù)測(cè)樣品含量,如樣品濃度過(guò)高時(shí),應(yīng)對(duì)樣品進(jìn)行稀釋,以使稀釋后的樣品符合試劑盒的檢測(cè)范圍,計(jì)算時(shí)再乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù)。
1. 加樣:分別設(shè)空白孔、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測(cè)樣品孔??瞻卓准訕悠废♂屢?00μl,余孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品或待測(cè)樣品100μl,注意不要有氣泡,加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動(dòng)混勻,酶標(biāo)板加上蓋或覆膜,37℃反應(yīng)120分鐘。為保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果有效性,每次實(shí)驗(yàn)請(qǐng)使用新的標(biāo)準(zhǔn)品溶液。
2. 棄去液體,甩干,不用洗滌。每孔加檢測(cè)溶液A工作液 100μl(在使用前一小時(shí)內(nèi)配制),酶標(biāo)板加上覆膜, 37℃反應(yīng)60分鐘。
3. 溫育60分鐘后,棄去孔內(nèi)液體,甩干,洗板3次,每次浸泡1-2分鐘,大約400μl/每孔,甩干(也可輕拍將孔內(nèi)液體拍干)。
4. 每孔加檢測(cè)溶液B工作液(同檢測(cè)A工作液) 100μl,酶標(biāo)板加上覆膜37℃反應(yīng)60分鐘。
5. 溫育60分鐘后,棄去孔內(nèi)液體,甩干,洗板5次,每次浸泡1-2分鐘,350μl/每孔,甩干(也可輕拍將孔內(nèi)液體拍干)。
6. 依序每孔加底物溶液90μl,酶標(biāo)板加上覆膜37℃避光顯色(30分鐘內(nèi),此時(shí)肉眼可見(jiàn)標(biāo)準(zhǔn)品的前3-4孔有明顯的梯度蘭色,后3-4孔梯度不明顯,即可終止)。
7. 依序每孔加終止溶液50μl,終止反應(yīng),此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色。終止液的加入順序應(yīng)盡量與底物液的加入順序相同。為了保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性,底物反應(yīng)時(shí)間到后應(yīng)盡快加入終止液。
8. 用酶聯(lián)儀在450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的光密度(OD值)。
商品屬性:
產(chǎn)品名稱 | |
規(guī)格 | 50管/48樣 |
檢測(cè)方法 | 紫外分光光度法 |
貨號(hào) | GOY-01S6566 |
商品介紹:
測(cè)定意義
TH位于線粒體的內(nèi)膜上,又稱為線粒體復(fù)合體六,催化NADH+NADP+和NAD++NADPH相互轉(zhuǎn)化,調(diào)節(jié)線粒體NAD(H)和NADP(H)平衡。把逆向反應(yīng)稱為T(mén)H-2,催化NADPH和NAD+生成NADP+和NADH。
測(cè)定原理:
NADH和NADPH均在340nm有特征吸收,因此TH催化的轉(zhuǎn)氫反應(yīng)不能導(dǎo)致340nm吸光度發(fā)生變化。用人工合成底物3-乙酰吡啶腺嘌呤二核苷酸(APAD+)替代NAD+,TH-2催化APAD+還原生成APADH,APADH在375nm有特征光吸收,測(cè)定375nm光吸收的增加速率,來(lái)計(jì)算TH-2活性。
需自備的儀器和用品:
可見(jiàn)分光光度計(jì)、臺(tái)式離心機(jī)、水浴鍋、可調(diào)式移液器、1mL玻璃比色皿、研缽、冰和蒸餾水。
實(shí)驗(yàn)方法學(xué):
一、肝素的配制: 市售肝素凍干粉140單位/mg,1克瓶裝,每瓶140,000單位,稱取0.1克肝素凍干粉,加生理鹽水5ml,配成2800單位/ml。取50~100μl濕潤(rùn)管壁,可抗凝人血3~5ml,血液不會(huì)凝固。老鼠血易凝固,所以最好更濃一些。可以取0.1克肝素凍干粉,加3ml生理鹽水溶解后,取50~100μl,可抗凝鼠血2~4ml。 肝素抗凝管的制備:取0.1克肝素凍干粉,加2.5ml生理鹽水。取100μl~150μl滴入塑料或玻璃管中,濕潤(rùn)管壁,低于80℃小烤箱中(可以用烤面包的小烤箱),橫向轉(zhuǎn)動(dòng),每隔5~10分鐘轉(zhuǎn)動(dòng)一次,直至干燥后放入4℃保存,可使2~5ml血液不凝固。 | 二、血液樣本的收集: 全血根據(jù)收集的條件,分成不抗凝和抗凝兩種。同時(shí),不抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱之為血清;抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱之為血漿。 1、不抗凝收集血清:將收集好的全血,靜置1~2小時(shí),直接低速離心分離出血清待用或保存。 2、抗凝收集血漿: 收集抗凝全血,輕輕顛倒充分抗凝后,可直接低速離心分離血漿(也可靜置半小時(shí)左右再低速離心分離血漿)待用或保存。根據(jù)不同抗凝劑的性能特征,選擇合適的抗凝劑。實(shí)驗(yàn)室常用的抗凝劑有肝素的各種鹽、EDTA。 |
選擇抗凝的注意點(diǎn):
①、每一份樣本所加的抗凝劑的量要一致,同時(shí)所取的全血的量也要盡量一致;
②、收集抗凝全血后一定要輕輕顛倒,充分抗凝,防止部分血液未接觸到抗凝劑而導(dǎo)致凝固;
③、抗凝全血收集的血漿相對(duì)較多(1ml抗凝全血能分離出0.4~0.5ml血漿);
④、抗凝收集的血漿冷凍保存后,解凍時(shí)可能會(huì)出現(xiàn)絮狀渾濁,如有則需要離心去掉渾濁后
用于測(cè)定。
1-丁基-3-甲基咪唑辛鹽 99%4-羥基苯甲酰肼 98%Anti-5-HT/RBITC 紅色羅丹明標(biāo)記5-羥色抗體IgG
1-丁基-3-甲基咪唑鹽 95%草酰乙酸 98%Anti-5-HTR1A/FITC 熒光素標(biāo)記5-羥色受體1A抗體IgG
5-溴異喹啉 98%無(wú)水草酸 anhydrous, 99.0%Anti-5-HTR1B /FITC 熒光素標(biāo)記5-羥色受體1B抗體IgG
5-溴-7-氮雜 98%無(wú)水草酸 AR,98%Anti-5-HTR2A/FITC 熒光素標(biāo)記5-羥色受體2A抗體IgG
N-(叔丁氧羰基)-1,4-丁二 97%無(wú)水草酸 99.999% metals basisAnti-5-HTR2B/FITC 熒光素標(biāo)記5-羥色受體2B(5-HT/serotonin R2B)抗體IgG
N-丁基溴化吡 99%無(wú)水草酸 99.99% metals basisAnti-5-HTR3/FITC 熒光素標(biāo)記5-羥色受體3抗體IgG
1-丁基-3-甲基咪唑溴鹽 97%1-重氮-2-萘酚-4-磺酸 98%Anti-5-HTR4/FITC 熒光素標(biāo)記5-羥色受體4抗體IgG
1-丁基-3-甲基咪唑四氟酸鹽 97%肼黃 Biological stainAnti-5-LOX/FITC 熒光素標(biāo)記5-脂氧合抗體IgG
轉(zhuǎn)氫酶1紫外分光光度法檢測(cè)試劑盒乙鋅,二水 AR,99.0%貓p27核心抗原(P27)免疫試劑盒F-box蛋白家族FBXO18抗體MIF 巨噬移動(dòng)抑制因子抗體
氧化鋅 AR,99%貓5羥色/血清素/血清(5HT/ST)免疫試劑盒FRG2B蛋白抗體MIER2 中胚層誘導(dǎo)早期反應(yīng)蛋白2抗體
硫鋅,七水 99.995% metals basis馬ELISA試劑盒FAM71A蛋白抗體Midnolin isoform Protein 1 中腦核仁蛋白1抗體
堿式碳鋅 AR,57.5%馬轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β2(TGFB2)免疫試劑盒FAM83F蛋白抗體MIDN 中腦核仁蛋白抗體
硫銅,五水 高純級(jí)馬腫瘤壞死因子α(TNF-α)免疫試劑盒FBXL17蛋白抗體Midkine 中期因子/肝素結(jié)合生長(zhǎng)因子抗體
磺 70%水溶液馬孕激素/孕酮(PROG)免疫試劑盒FCHSD1蛋白抗體MID2/RNF60/Midline-2 環(huán)指蛋白60抗體
硫鎳,七水 GR,99%馬2,3-雙加氧1(IDO1)免疫試劑盒FBXL5蛋白抗體MID1/Midline-1/RNF59 環(huán)指蛋白59抗體
溴化鎳 22.5%水溶液馬胰腺甘油三酯脂(PNLIP)免疫試劑盒FBXL12蛋白抗體MICS1 生長(zhǎng)激素誘導(dǎo)跨膜蛋白抗體(源性蛋白2)
溴化鎳 99%馬血小板衍生生長(zhǎng)因子BB(PDGF-BB)免疫試劑盒FBXL3蛋白抗體Microsporidia protien 蜜蜂微孢子蟲(chóng)蛋白抗體
化鎳,六水 AR,98%馬血纖蛋白原(Fbg)免疫試劑盒F-box蛋白相關(guān)蛋白11抗體Microcephalin 1/BRIT1 小腦癥因1/認(rèn)知相關(guān)蛋白抗體
三氧化二鈷 CP,98.5%馬血清淀粉樣蛋白A(SAA)免疫試劑盒FGFR1癌因伴侶蛋白2抗體MICB MHC I類鏈相關(guān)蛋白B
三氧化二鈷 AR,99.0%馬血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)免疫試劑盒成纖維生長(zhǎng)因子受體底物2抗體MICA/MHC I MHC I類鏈相關(guān)蛋白A/組織相容性復(fù)合物1抗體
氨磺鈷 98.5%馬血管緊張素Ⅱ(ANG-Ⅱ)免疫試劑盒FNBP1L蛋白抗體MIC1/C18orf8 結(jié)腸癌相關(guān)蛋白MIC1抗體
乙鈷,四水 AR,99.5%馬C(VC)免疫試劑盒GATA結(jié)合蛋白2伴侶蛋白抗體MIA2 黑色素瘤抑制活性蛋白2抗體
乙鈷,四水 ACS馬A(VA)免疫試劑盒CD349抗體MHC Class II/MRC OX-6 組織相容性復(fù)合體2抗體
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