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當(dāng)前位置:上海谷研實(shí)業(yè)有限公司>>生化檢測(cè)試劑盒>>氧化磷酸化系列>> 葉綠體分離和葉綠體酶提取差速離心法
貨號(hào) | GOY-01S6569 |
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商品介紹
測(cè)定意義 線粒體是半自主性細(xì)胞器,不僅是細(xì)胞內(nèi)氧化磷酸化和合成三磷酸腺苷(ATP)的主要場(chǎng)所,為細(xì)胞的活動(dòng)提供能量,而且在許多生命活動(dòng)中具有重要調(diào)控作用。因此,準(zhǔn)確和全面分離保持正?;钚缘木€粒體已經(jīng)成為許多研究的前提。 測(cè)定原理: 利用專門試劑溫和勻漿組織和細(xì)胞,再采用差速離心法從勻漿中分離完整線粒體;利用專門試劑,配合超聲波破碎線粒體,可以得到保持活性的線粒體酶。 需自備的儀器和用品: 超聲波破碎儀、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、研缽、冰和蒸餾水。 |
試劑的組成和配制:
提取液:液體 100mL×1 瓶,4℃保存;
試劑一:液體 5mL×1 瓶,4℃保存;
試劑二:液體 200μL×1 支,4℃保存;
試劑三:液體 4mL×1 瓶,4℃保存;
試劑四:粉劑×2 瓶,4℃保存。
【友情提示】:本產(chǎn)品僅供科研研究使用,不得用于人體臨床直接檢測(cè)。避免給您帶來(lái)不必要的損失,請(qǐng)仔細(xì)閱讀購(gòu)買說(shuō)明!
產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 檢測(cè)方法 | 貨號(hào) |
50管/48樣 | 差速離心法 | GOY-01S6569 |
所需的儀器和用品:
可見(jiàn)分光光度計(jì)、1mL 玻璃比色皿(光徑 1cm)、低溫離心機(jī)、移液器、研缽、冰和蒸餾水
四、超氧化物歧化酶(SOD)的測(cè)定:
建議正式實(shí)驗(yàn)前選取 2 個(gè)樣本做預(yù)測(cè)定,了解本批樣品情況,熟悉實(shí)驗(yàn)流程,避免實(shí)驗(yàn)
樣本和試劑浪費(fèi)!
1、樣本制備
① 組織樣本:
取約 0.1g 組織(水分充足的樣本可取 0.25g),加入 1mL 提取液,在 4oC 或冰浴進(jìn)行
勻漿(或使用各類常見(jiàn)勻漿器)。4oC×12000rpm 離心 10min,取上清作為待測(cè)液。
【注】:若增加樣本量,可按照組織質(zhì)量(g):提取液體積(mL)為 1:5~10 的比例進(jìn)行提取
② 細(xì)菌/細(xì)胞樣本:
先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi),離心后棄上清;取約 500 萬(wàn)細(xì)菌或細(xì)胞加入 1mL
提取液,超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞(冰浴,功率 200W,超聲 3s,間隔 10s,重復(fù) 30 次);
12000rpm 4℃離心 10min,取上清,置冰上待測(cè)。
【注】:若增加樣本量,可按照細(xì)菌/細(xì)胞數(shù)量(10
4):提取液(mL)為 500~1000:1 的比例進(jìn)行提取。 ③ 液體樣本:直接檢測(cè);若渾濁,離心后取上清檢測(cè)。
注意事項(xiàng):
1、試劑二為酶,不可冷凍,使用時(shí)在冰上放置。
2、對(duì)照管只需要做一管。
3、若對(duì)照管吸光值大于 1,建議將試劑二用蒸餾水稀釋 7 倍后使用(10μL 試劑二原液+60μL蒸餾水)。
4、SOD為什么有的樣本測(cè)定管大于對(duì)照管,對(duì)照管數(shù)值在什么范圍?對(duì)照管的范圍是 0.4-1。對(duì)照管吸光值過(guò)低可能是(1)試劑二或試劑四沒(méi)有現(xiàn)配現(xiàn)用;
(2)沒(méi)有按順序加試劑;(3)反應(yīng)時(shí)間不夠,可以延長(zhǎng)反應(yīng)時(shí)間(反應(yīng)時(shí)間 30min可以延長(zhǎng)到 40min)。對(duì)照管吸光值過(guò)高可能是試劑二未按操作說(shuō)明書(shū)稀釋相應(yīng)倍數(shù)。
若出現(xiàn)測(cè)定管大于對(duì)照管,可能是樣本中雜質(zhì)的影響太大,為了降低雜質(zhì)的影響一般
將樣本提取上清液用蒸餾水或提取液稀釋 10倍后再測(cè),通??梢允箿y(cè)定正常。
測(cè)定步驟:
1、 酶標(biāo)儀預(yù)熱30min以上,調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至450nm。
2、 試劑三的稀釋:將試劑三用蒸餾水稀釋50倍,用多少配多少。(試劑三和蒸餾水1:49稀釋。
3、 工作液配制:在試劑一加入100μl試劑二,充分混勻。配好的試劑4℃避光可保存一周。(若一次性測(cè)定樣本較少,可按照實(shí)際用量將試劑一和試劑二按照20ml:0.1ml的比例混勻配制)
4、 將一瓶試劑四用5ml蒸餾水溶解(溶解后一周內(nèi)用完)。
5、 樣本測(cè)定(在96孔板中依次加入下列試劑)
選擇抗凝的注意點(diǎn):
①、每一份樣本所加的抗凝劑的量要一致,同時(shí)所取的全血的量也要盡量一致;
②、收集抗凝全血后一定要輕輕顛倒,充分抗凝,防止部分血液未接觸到抗凝劑而導(dǎo)致凝固;
③、抗凝全血收集的血漿相對(duì)較多(1ml抗凝全血能分離出0.4~0.5ml血漿);
④、抗凝收集的血漿冷凍保存后,解凍時(shí)可能會(huì)出現(xiàn)絮狀渾濁,如有則需要離心去掉渾濁后用于測(cè)定。
Anti-Tubulin- Beta/FITC 熒光素標(biāo)記微管蛋白抗體IgG
Anti-Tubulin- Gamma/FITC 熒光素標(biāo)記微管蛋白-γ抗體IgG
Anti- Beta-Actin/HRP 辣根過(guò)氧化物標(biāo)記β-肌動(dòng)蛋白(抗體)
Anti-Tuberin/TSC2/FITC 熒光素標(biāo)記馬鈴薯球蛋白(結(jié)節(jié)性硬化)抗體IgG
Anti-Phospho-Tuberin/TSC2 (Tyr320) /FITC 熒光素標(biāo)記化馬鈴薯球蛋白(結(jié)節(jié)性硬化)抗體IgG
Anti-Phospho-Tuberin/TSC2 (Ser1387)/FITC 熒光素標(biāo)記化馬鈴薯球蛋白(結(jié)節(jié)性硬化)抗體IgG
Anti-Phospho-Tuberin/TSC2 (Ser939) /FITC 熒光素標(biāo)記化馬鈴薯球蛋白(結(jié)節(jié)性硬化)抗體IgG
Anti-Phospho-Tuberin/TSC2 (Tyr1571)/FITC 熒光素標(biāo)記化馬鈴薯球蛋白(結(jié)節(jié)性硬化)抗體IgG
葉綠體分離和葉綠體酶提取差速離心法對(duì)硝標(biāo)準(zhǔn)溶液 1.02mg/ml,體:人抗中性粒胞漿抗體(cANCA)IgM 免疫試劑盒C-藻藍(lán)素/藻藍(lán)蛋白/藻青蛋白抗體Phospho-MYPT1/MBS(Ser507) 化肌球蛋白抗體
對(duì)硝 GR,99.5%人抗中性粒/中心體抗體(ACA)免疫試劑盒色素P450 1A1抗體Phospho-MYPT1(Thr696) 化肌球蛋白抗體
對(duì)硝 分析標(biāo)準(zhǔn)品,用于環(huán)境分析人抗增殖核抗原(PCNA)抗體免疫試劑盒絲/蘇氨蛋白質(zhì)激II α抗體Phospho-MYPT1 (Thr853) 化肌球蛋白抗體
2,4-二硝 GR,99%(劇品)人抗硬皮病抗體70(SCL70/topoⅠ)免疫試劑盒2號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框66抗體Phospho-MYPT1 (Ser668) 化肌球蛋白抗體
愈創(chuàng)木酚 >99.0%(GC)人抗抑制素B抗體(IgG)免疫試劑盒CULLIN抗體phospho-Myosin light chain(Ser20) 化肌球蛋白輕鏈抗體
鄰二 AR,98%人抗異質(zhì)型核糖核蛋白抗體/抗RA33抗體(anti-hnRNP-ab/anti-RA33-ab)免疫試劑盒小牛胸腺DNA抗體phospho-MyoD1(Ser200) 化肌原調(diào)節(jié)蛋白抗體
鄰二 99%,用于生化研究人抗異亮氨氨酰tRNA連接,質(zhì)(IARS)抗體免疫試劑盒1號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框226抗體phospho-MYL9(Thr19) 化肌球蛋白輕鏈9抗體
香草 AR,99%人抗異亮氨tRNA連接,線粒體(IARS2)抗體免疫試劑盒組織蛋白L抗體phospho-MYL6(Tyr29+Ser30) 化肌球蛋白輕鏈6抗體
1,4-二(反式+順式) 97%人抗胰島素受體抗體(AIRA)免疫試劑盒絲/蘇氨蛋白激II β抗體(casein kinase IIβ)Phospho-MYL(Ser19) 化肌球蛋白輕鏈2抗體
順-2--1,4-二 98%人抗胰蛋白(AT)免疫試劑盒角蛋白18抗體phospho-MYF5 (phospho Ser49) 化生肌決定因子Myf5抗體
辛酰 99%人抗眼肌抗體(EMAb)免疫試劑盒轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β1結(jié)合蛋白抗體Phospho-mu Opioid Receptor (Ser375) 化µ-型阿片受體抗體
反,反-2,4-壬二烯 >85.0%(GC)人抗血小板抗體IgM(PA-IgM)免疫試劑盒22號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框45抗體Phospho-mTOR (Tyr144) 化雷帕霉素靶蛋白抗體
間酰 97%人抗血小板抗體IgG(PA-IgG)免疫試劑盒22號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框32抗體Phospho-mTOR (Thr2446) 化雷帕霉素靶蛋白抗體
間二酰 99%人抗血小板抗體IgA(PA-IgA)免疫試劑盒CD5L抗體Phospho-mTOR (Ser2481) 化雷帕霉素靶蛋白抗體
對(duì)二酰 99%人抗血小板抗體(anti-PA Ab)免疫試劑盒(半定量)CD6抗體Phospho-Mst2(Thr180) 化蛋白激MST2抗體
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