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產(chǎn)地	國(guó)產(chǎn)	加工定制	是
適用領(lǐng)域	科研	貨號(hào)	FS-01X9632

產(chǎn)品屬于：

產(chǎn)品名稱：結(jié)腸癌細(xì)胞

產(chǎn)品英文：cx-1

貨號(hào)：FS-01X9632

細(xì)胞培養(yǎng)條件：DMEM+10%FBS+1%P/S

生長(zhǎng)狀態(tài)：貼壁生長(zhǎng)

產(chǎn)品規(guī)格：1×106

單位：T25/瓶

是否提供細(xì)胞STR鑒定：提供STR鑒定報(bào)告

保存培養(yǎng)溫度（℃）37

運(yùn)輸溫度（℃）：常溫

細(xì)胞培養(yǎng)的優(yōu)點(diǎn)：

1.研究的對(duì)象是活細(xì)胞

在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，根據(jù)要求可始終保持細(xì)胞活力，并可長(zhǎng)時(shí)間監(jiān)控、檢測(cè)甚至定量評(píng)估一部分活細(xì)胞的情況，包括活細(xì)胞的形態(tài)、結(jié)構(gòu)、生命活動(dòng)等。

2.研究條件可以人為控制

pH、溫度、氧氣、二氧化碳、張力等物理化學(xué)的條件，可以根據(jù)實(shí)際需要進(jìn)行人為的控制，同時(shí)，可以施加化學(xué)、物理、生物等因素作為條件而進(jìn)行實(shí)驗(yàn)觀察，這些因素同樣可以處于嚴(yán)格控制之下。

3.研究的樣本可以達(dá)到比較均一性

通過(guò)細(xì)胞培養(yǎng)一定代數(shù)后，所得到的細(xì)胞系則可以達(dá)到均一性而屬于同一類型的細(xì)胞，需要時(shí)，可采用克隆化等方法使細(xì)胞達(dá)到純化。

4.研究?jī)?nèi)容便于觀察、檢測(cè)和記錄

采用各種研究技術(shù)：如倒置生物顯微鏡、熒光顯微鏡、電子顯微鏡、流式細(xì)胞術(shù)、激光共焦顯微鏡、免疫組織化學(xué)、原位雜交、同位素標(biāo)記等各種儀器設(shè)備。

細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程：

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：

1）準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號(hào)21875-091)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。

2）培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲(chǔ)存。

二．細(xì)胞處理：

1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。

2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

對(duì)于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：

方法一：收集細(xì)胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

注意事項(xiàng)：

1. 接收到細(xì)胞，肉眼觀察細(xì)胞培養(yǎng)基顏色，顯微鏡觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況，并對(duì)細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照（建議收到時(shí)的培養(yǎng)瓶拍一張照片，顯微鏡拍收到時(shí)的細(xì)胞100X,200X各一張）。

2.用75%的酒精消毒（建議配置75%的酒精的水是滅菌過(guò)的）。

3.嚴(yán)格無(wú)菌操作，打開(kāi)細(xì)胞培養(yǎng)瓶。

4.將細(xì)胞培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)的培養(yǎng)基用吸管*吸出（嚴(yán)禁直接傾倒），放入另一無(wú)菌容器中（建議換新的培養(yǎng)基培養(yǎng)細(xì)胞）。

5.用PBS 2-3ml/次輕輕洗細(xì)胞表面，洗3-4次遍，加入0.05%-EDTA1-1.5ml,顯微鏡下觀察細(xì)胞變圓，輕輕拍打培養(yǎng)瓶直到細(xì)胞脫落，加入終止液終止。

6.1000rpm，5min離心，重懸細(xì)胞。

7.換新的細(xì)胞培養(yǎng)瓶，37℃，5%CO2培養(yǎng)。

實(shí)驗(yàn)報(bào)告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無(wú)菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大??；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗（Abbioscience公司），然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗（嘉美生物公司）， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡(Leica公司)下觀察圖像并拍照。

N-乙酰β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAGase)重組蛋白 Recombinant N-Acetyl Beta-D-Glucosaminidase (NAGase)

Pim-2原癌基因(PIM2)重組蛋白 Recombinant Pim-2 Oncogene (PIM2)

Pim-3原癌基因(PIM3)重組蛋白 Recombinant Pim-3 Oncogene (PIM3)

POTE錨蛋白域家族成員G(POTEG)重組蛋白 Recombinant POTE Ankyrin Domain Family, Member G (POTEG)

P選擇素(SELP)重組蛋白 Recombinant Selectin, Platelet (SELP)

P-選擇素糖蛋白配體1(PSGL1)重組蛋白 Recombinant P-Selectin Glycoprotein Ligand 1 (PSGL1)

RAD23同源物B(RAD23B)重組蛋白 Recombinant RAD23 Homolog B (RAD23B)

RAD51同源物(RAD51)重組蛋白 Recombinant RAD51 Homolog (RAD51)

RAS癌基因家族成員RAB37(RAB37)重組蛋白 Recombinant RAB37, Member RAS Oncogene Family (RAB37)

Ras相關(guān)C3肉毒菌毒素底物1(Rac1)重組蛋白 Recombinant Ras Related C3 Botulinum Toxin Substrate 1 (Rac1)

RNA結(jié)合基元蛋白20(RBM20)重組蛋白 Recombinant RNA Binding Motif Protein 20 (RBM20)

RNA結(jié)合基元蛋白24(RBM24)重組蛋白 Recombinant RNA Binding Motif Protein 24 (RBM24)

Runt相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子2(RUNX2)重組蛋白 Recombinant Runt Related Transcription Factor 2 (RUNX2)

R-脊椎蛋白1(RSPO1)重組蛋白 Recombinant R-Spondin 1 (RSPO1)

R-脊椎蛋白3(RSPO3)重組蛋白 Recombinant R-Spondin 3 (RSPO3)

S100鈣結(jié)合蛋白(S100)重組蛋白 Recombinant S100 Calcium Binding Protein (S100)

S100鈣結(jié)合蛋白A11(S100A11)重組蛋白 Recombinant S100 Calcium Binding Protein A11 (S100A11)

S100鈣結(jié)合蛋白A12(S100A12)重組蛋白 Recombinant S100 Calcium Binding Protein A12 (S100A12)

S100鈣結(jié)合蛋白A13(S100A13)重組蛋白 Recombinant S100 Calcium Binding Protein A13 (S100A13)

S100鈣結(jié)合蛋白B(S100B)重組蛋白 Recombinant S100 Calcium Binding Protein B (S100B)

Smad同源物7(Smad7)重組蛋白 Recombinant Mothers Against Decapentaplegic Homolog 7 (Smad7)

ADAMTS8 整合素樣金屬蛋白酶與8型抗體細(xì)黃鏈霉菌

ADAMTS9 整合素樣金屬蛋白酶與9型抗體藤黃色鏈霉菌

ARP4 血管生成素樣蛋白4抗體黃色長(zhǎng)孢鏈霉菌

ADAMTS10 整合素樣金屬蛋白酶10型抗體吸水鏈霉菌

APEX2 嘌呤嘧啶核酸內(nèi)切酶2抗體灰色鏈霉菌

AD7C-NTP 神經(jīng)絲蛋白抗體淺灰鏈霉菌

beta Amyloid 1-28 β淀粉樣肽（1-28）抗體球孢鏈霉菌

Aurora B 有絲分裂激酶B抗體青色鏈霉菌

Aggrecanase-2 軟骨蛋白聚糖抗體鏈霉菌

ADAM10 去整合素樣金屬蛋白酶10抗體滅蚊鏈霉菌

ASB9 含錨蛋白重復(fù)序列-細(xì)胞因子信號(hào)抑制物盒蛋白家族9抗體燼灰鏈霉菌

結(jié)腸癌細(xì)胞ASB8 含錨蛋白重復(fù)序列-細(xì)胞因子信號(hào)抑制物盒蛋白家族8抗體產(chǎn)色鏈霉菌

ABP1 植物生長(zhǎng)激素ABP1抗體雙重輪絲鏈霉菌

ACTR1A 肌動(dòng)蛋白相關(guān)蛋白1抗體鏈霉菌

AHSP α紅細(xì)胞分化相關(guān)因子抗體白色鏈霉菌

ATP1 血管緊張素激活蛋白1抗體白黃鏈霉菌

AFM Alpha清蛋白抗體紫色小單孢菌(絳紅小單孢菌)

AFAP1L2 AFAP1L2抗體嗜熱乳酸鏈球菌

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