細胞培養(yǎng)操作規(guī)程：

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：

1）準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。

2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲存。

二．細胞處理：

1）復(fù)蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細胞密度。

2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。

對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：

方法一：收集細胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

產(chǎn)品屬于：

產(chǎn)品名稱：原代破骨細胞培養(yǎng)體系    

產(chǎn)品規(guī)格：100ml/500ml

貨號：FS-01X9976

保存溫度（℃）：2-8℃/-20℃

運輸溫度（℃）：2-8℃/-20℃   

細胞培養(yǎng)的優(yōu)點：

注意事項：

 Prostaglandin D2 Synthase, Hematopoietic (PTGDS)前列腺D合(PTGDS)檢測試劑盒(聯(lián)免疫吸附試驗法)規(guī)格：48T/96T

 Electron Transfer Flavoprotein Beta Polypeptide (ETFb)電子轉(zhuǎn)移黃蛋白β(ETFβ)檢測試劑盒(聯(lián)免疫吸附試驗法)規(guī)格：48T/96T

 Phosphoglycerate Mutase 2, Muscle (PGAM2)磷甘油變位2(PGAM2)檢測試劑盒(聯(lián)免疫吸附試驗法)規(guī)格：48T/96T

 Melanoma Derived Leucine Zipper Extra Nuclear Factor (MLZE)黑瘤衍生亮拉鏈額外核因子(MLZE)檢測試劑盒(聯(lián)免疫吸附試驗法)規(guī)格：48T/96T

 Desmin (Des)結(jié)蛋白(Des)檢測試劑盒(聯(lián)免疫吸附試驗法)規(guī)格：48T/96T

 Cholinergic Receptor, Nicotinic, Beta 1 (CHRNb1)煙堿型受體β1(CHRNβ1)檢測試劑盒(聯(lián)免疫吸附試驗法)規(guī)格：48T/96T

 Troponin I Type 3, Cardiac (TNNI3)心肌肌鈣蛋白I(TNNI3)檢測試劑盒(聯(lián)免疫吸附試驗法)規(guī)格：48T/96T

 Hypoxia Inducible Factor 1 Alpha (HIF1a)低氧誘導(dǎo)因子1α(HIF1α)檢測試劑盒(聯(lián)免疫吸附試驗法)規(guī)格：48T/96T

 Lactoferrin (LTF)乳鐵傳遞蛋白(LTF)檢測試劑盒(聯(lián)免疫吸附試驗法)規(guī)格：48T/96T

 Potassium Chloride Cotransporters 4 (KCC4)鉀氯協(xié)同轉(zhuǎn)運蛋白4(KCC4)檢測試劑盒(聯(lián)免疫吸附試驗法)規(guī)格：48T/96T

 Potassium Chloride Cotransporters 2 (KCC2)鉀氯協(xié)同轉(zhuǎn)運蛋白2(KCC2)檢測試劑盒(聯(lián)免疫吸附試驗法)規(guī)格：48T/96T

 Potassium Chloride Cotransporters 3 (KCC3)鉀氯協(xié)同轉(zhuǎn)運蛋白3(KCC3)檢測試劑盒(聯(lián)免疫吸附試驗法)規(guī)格：48T/96T

 Chemokine C-C-Motif Receptor 7 (CCR7)趨化因子C-C-基元受體7(CCR7)檢測試劑盒(聯(lián)免疫吸附試驗法)規(guī)格：48T/96T

 Beta-2-Microglobulin (b2M)β2-微球蛋白(β2M)檢測試劑盒(聯(lián)免疫吸附試驗法)規(guī)格：48T/96T

 Trefoil Factor 3, Intestinal (TFF3)三葉因子3(TFF3)檢測試劑盒(聯(lián)免疫吸附試驗法)規(guī)格：48T/96T

 Myostatin (MSTN)肌肉生長抑制(MSTN)檢測試劑盒(聯(lián)免疫吸附試驗法)規(guī)格：48T/96T

 Immunoglobulin Superfamily, Member 16 (IGSF16)免疫球蛋白超家族成員16(IGSF16)檢測試劑盒(聯(lián)免疫吸附試驗法)規(guī)格：48T/96T

 Erythropoietin (EPO)紅細胞生成(EPO)檢測試劑盒(聯(lián)免疫吸附試驗法)規(guī)格：48T/96T
原代破骨細胞培養(yǎng)體系FBXO28  FBXO28蛋白抗體規(guī)格: 0.2ml

FBXO27  FBXO27蛋白抗體規(guī)格: 0.2ml

FBXO24  FBXO24蛋白抗體規(guī)格: 0.2ml

hnRNP A2B1  異質(zhì)核糖核蛋白hnRNPA2抗體規(guī)格: 0.2ml

hnRNP U  異質(zhì)核糖核蛋白U抗體規(guī)格: 0.2ml

AIM1L  黑色瘤缺失樣蛋白1抗體規(guī)格: 0.2ml

AHNAK2  AHNAK核蛋白2抗體規(guī)格: 0.2ml

AGXT2L2  AGXT2L2蛋白抗體規(guī)格: 0.2ml
實驗報告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大小；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；

2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；

5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。