H輔酶ⅠNAD測試劑盒微量法-上海撫生實(shí)業(yè)有限公司

貨號(hào)	FS-01S63210

公司提供的生化試劑盒，質(zhì)量信得過產(chǎn)品，售后完善。服務(wù)于高校及免疫學(xué)科研單位，竭誠為您提供更周到的服務(wù)更優(yōu)質(zhì)的產(chǎn)品。

規(guī)格：100管/48樣

檢測方法：微量法

貨號(hào)：FS-01S63210

商品介紹：

測定意義

輔酶ⅠNAD(H)廣泛存在于動(dòng)物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中，NAD+是糖酵解（EMP）和三羧酸循環(huán)（TCA）的主要?dú)涫荏w，生成的NADH經(jīng)呼吸電子鏈（ETC）傳遞把電子交給氧，在合成ATP的同時(shí)，形成大量的ROS，同時(shí)NADH再生為NAD+。糖、脂、蛋白質(zhì)三大代謝物質(zhì)分解中的氧化反應(yīng)絕大部分通過這一體系完成。NAD(H)含量和NADH/NAD+比值的高低可用于評(píng)價(jià)糖酵解和TCA循環(huán)的強(qiáng)弱。較高的NAD(H)及NADH/NAD+比值說明細(xì)胞呼吸耗氧量較高，處于過氧化狀態(tài)。此外，NADH/NAD+比值升高也可抑制糖酵解和TCA循環(huán)。另外，NAD+降解產(chǎn)物對(duì)細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)、代謝和基因表達(dá)等具有重要的調(diào)控作用。

測定原理

分別用酸性和堿性提取液提取樣品中NAD+和NADH，NADH通過PMS的遞氫作用，還原氧化型噻唑藍(lán)（MTT）為甲瓚，在570nm下檢測吸光值；而NAD+可被乙醇脫氫酶還原為NADH，進(jìn)一步采用MTT還原法檢測。

需自備的儀器和用品

可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、臺(tái)式離心機(jī)、移液器、微量石英比色皿/96孔板、研缽、冰和蒸餾水。

試劑的組成和配制：

提取液：液體 100mL×1 瓶，4℃保存；

試劑一：液體 5mL×1 瓶，4℃保存；

試劑二：液體 200μL×1 支，4℃保存；

試劑三：液體 4mL×1 瓶，4℃保存；

試劑四：粉劑×2 瓶，4℃保存。
QQ截圖20220307153604.png

粗酶液提取：

1、細(xì)胞或組織樣品的制備：

培養(yǎng)細(xì)胞：先收集細(xì)胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清；按照細(xì)胞數(shù)量（104個(gè)）：提取液體積（ml）為500~1000：1的比例（建議500萬細(xì)胞加入1ml提取液），超聲波破碎細(xì)胞（冰浴，功率20％或200W，超聲3s，間隔10s，重復(fù)30次）；8000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測。組織：按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(ml)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1ml提取液），進(jìn)行冰浴勻漿。8000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測。

2、血清（漿）樣品：直接檢測。

操作步驟:

實(shí)驗(yàn)開始前，各試劑均應(yīng)平衡至室溫（試劑不能直接在37℃溶解）；試劑或樣品稀釋時(shí)，均需混勻，混勻時(shí)盡量避免起泡。實(shí)驗(yàn)前應(yīng)預(yù)測樣品含量，如樣品濃度過高時(shí)，應(yīng)對(duì)樣品進(jìn)行稀釋，以使稀釋后的樣品符合試劑盒的檢測范圍，計(jì)算時(shí)再乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù)。

1. 加樣：分別設(shè)空白孔、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測樣品孔?？瞻卓准訕悠废♂屢?00μl，余孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品或待測樣品100μl，注意不要有氣泡，加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻，酶標(biāo)板加上蓋或覆膜，37℃反應(yīng)120分鐘。為保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果有效性，每次實(shí)驗(yàn)請使用新的標(biāo)準(zhǔn)品溶液。

2. 棄去液體，甩干，不用洗滌。每孔加檢測溶液A工作液 100μl（在使用前一小時(shí)內(nèi)配制），酶標(biāo)板加上覆膜, 37℃反應(yīng)60分鐘。

3. 溫育60分鐘后，棄去孔內(nèi)液體，甩干，洗板3次，每次浸泡1-2分鐘，大約400μl/每孔，甩干（也可輕拍將孔內(nèi)液體拍干）。

4. 每孔加檢測溶液B工作液（同檢測A工作液） 100μl，酶標(biāo)板加上覆膜37℃反應(yīng)60分鐘。

5. 溫育60分鐘后，棄去孔內(nèi)液體，甩干，洗板5次，每次浸泡1-2分鐘，350μl/每孔，甩干（也可輕拍將孔內(nèi)液體拍干）。

6. 依序每孔加底物溶液90μl，酶標(biāo)板加上覆膜37℃避光顯色（30分鐘內(nèi)，此時(shí)肉眼可見標(biāo)準(zhǔn)品的前3-4孔有明顯的梯度蘭色，后3-4孔梯度不明顯，即可終止）。

7. 依序每孔加終止溶液50μl，終止反應(yīng)，此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色。終止液的加入順序應(yīng)盡量與底物液的加入順序相同。為了保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性，底物反應(yīng)時(shí)間到后應(yīng)盡快加入終止液。

8. 用酶聯(lián)儀在450nm波長依序測量各孔的光密度（OD值）。在加終止液后立即進(jìn)行檢測。

Anti-2,4-D2，4-二氯苯氧乙酸 /除草劑/激素型除草劑抗體 0.1ml

Anti-5-HT5-羥色胺抗體 0.1ml

Anti-5-HTR1A5-羥色胺受體1A抗體 0.1ml

Anti-5-HT1B5-羥色胺受體1B抗體 0.1ml

Anti-5-HTR2A5-羥色胺受體2A抗體 0.1ml

Anti-5-LOX5-脂氧合酶抗體 0.1ml

anti-8-OHdG8-羥基脫氧鳥苷 0.2ml

Anti-AACT-α1α-1抗胰抗體 0.1ml

Anti-AATα-1抗抗體 0.2ml

Anti-AATF拮抗凋亡轉(zhuǎn)錄因子抗體 0.2ml

Anti-ABCB6ABCB6抗體 0.2ml

Anti-ABCG1三磷酸腺苷結(jié)合盒G1抗體 0.2ml

Anti-ABCG2三磷酸腺苷結(jié)合盒G2抗體 0.2ml

Anti-ABL1ABL1抗體 0.1ml

Anti-ABL2ABL2抗體 0.2ml

Anti-ACE1血管緊張素轉(zhuǎn)換酶抗體 0.1ml

Anti-ACEI血管緊張素1轉(zhuǎn)換酶抑制劑抗體 0.1ml

Anti-Acinus腺泡Acinus抗體 0.1ml

Anti-Ack1Ack1抗體 0.2ml

Anti-β-Actinβ-肌動(dòng)蛋白抗體 0.1ml

Anti-ACTH促腎上腺皮質(zhì)激素抗體 0.1ml

Anti-Actin α /α-SMA 肌動(dòng)蛋白α抗體 0.1ml

Anti-AD7C-NTP/NTP/AF 神經(jīng)絲蛋白抗體 0.1ml

Anti-ADAM-TS1/METH1 整合素樣金屬蛋白酶與型 0.2ml

Anti-ADAM-TS7 整合素樣金屬蛋白酶與l

Anti-Adducin protein內(nèi)收蛋白抗體 0.2ml

Anti-ADFP/ADRP/adipophilin 脂肪組織分化相關(guān)蛋白抗體 0.2ml

Anti-Adipo R1 脂聯(lián)素受體-1抗體 0.1ml

Anti-Adipo R2 脂聯(lián)素受體-2抗體 0.1ml

接觸蛋白1(CNTN1)檢測試劑盒(化學(xué)發(fā)光免疫分析法)CLIA Kit for Contactin 1 (CNTN1)96TMus musculus (Mouse)

多效生長因子(PTN)檢測試劑盒(化學(xué)發(fā)光免疫分析法)CLIA Kit for Pleiotrophin (PTN)96THomo sapiens (Human)

雙調(diào)蛋白(AREG)檢測試劑盒(化學(xué)發(fā)光免疫分析法)CLIA Kit for Amphiregulin (AREG)96TMus musculus (Mouse)

雙調(diào)蛋白(AREG)檢測試劑盒(化學(xué)發(fā)光免疫分析法)CLIA Kit for Amphiregulin (AREG)96TRattus norvegicus (Rat)

雙調(diào)蛋白(AREG)檢測試劑盒(化學(xué)發(fā)光免疫分析法)CLIA Kit for Amphiregulin (AREG)96TOryctolagus cuniculus (Rabbit)

雙調(diào)蛋白(AREG)檢測試劑盒(化學(xué)發(fā)光免疫分析法)CLIA Kit for Amphiregulin (AREG)96TBos taurus; Bovine (Cattle)

雙調(diào)蛋白(AREG)檢測試劑盒(化學(xué)發(fā)光免疫分析法)CLIA Kit for Amphiregulin (AREG)96TEquus caballus; Equine (Horse)

雙調(diào)蛋白(AREG)檢測試劑盒(化學(xué)發(fā)光免疫分析法)CLIA Kit for Amphiregulin (AREG)96TChicken (Gallus)

雙調(diào)蛋白(AREG)檢測試劑盒(化學(xué)發(fā)光免疫分析法)CLIA Kit for Amphiregulin (AREG)96TSus scrofa; Porcine (Pig)

Atonal同源物1(ATOH1)檢測試劑盒(化學(xué)發(fā)光免疫分析法)CLIA Kit for Atonal Homolog 1 (ATOH1)96THomo sapiens (Human)

Atonal同源物1(ATOH1)檢測試劑盒(化學(xué)發(fā)光免疫分析法)CLIA Kit for Atonal Homolog 1 (ATOH1)96TMus musculus (Mouse)

Atonal同源物1(ATOH1)檢測試劑盒(化學(xué)發(fā)光免疫分析法)CLIA Kit for Atonal Homolog 1 (ATOH1)96TRattus norvegicus (Rat)

骨成型蛋白2(BMP2)檢測試劑盒(化學(xué)發(fā)光免疫分析法)CLIA Kit for Bone Morphogenetic Protein 2 (BMP2)96TOryctolagus cuniculus (Rabbit)

結(jié)締組織生長因子(CTGF)檢測試劑盒(化學(xué)發(fā)光免疫分析法)CLIA Kit for Connective Tissue Growth Factor (CTGF)96THomo sapiens (Human)

結(jié)締組織生長因子(CTGF)檢測試劑盒(化學(xué)發(fā)光免疫分析法)CLIA Kit for Connective Tissue Growth Factor (CTGF)96TMus musculus (Mouse)

結(jié)締組織生長因子(CTGF)檢測試劑盒(化學(xué)發(fā)光免疫分析法)CLIA Kit for Connective Tissue Growth Factor (CTGF)96TRattus norvegicus (Rat)

結(jié)締組織生長因子(CTGF)檢測試劑盒(化學(xué)發(fā)光免疫分析法)CLIA Kit for Connective Tissue Growth Factor (CTGF)96TOryctolagus cuniculus (Rabbit)

結(jié)締組織生長因子(CTGF)檢測試劑盒(化學(xué)發(fā)光免疫分析法)CLIA Kit for Connective Tissue Growth Factor (CTGF)96TBos taurus; Bovine (Cattle)

結(jié)締組織生長因子(CTGF)檢測試劑盒(化學(xué)發(fā)光免疫分析法)CLIA Kit for Connective Tissue Growth Factor (CTGF)96TCapra hircus; Caprine (Goat)

結(jié)締組織生長因子(CTGF)檢測試劑盒(化學(xué)發(fā)光免疫分析法)CLIA Kit for Connective Tissue Growth Factor (CTGF)96TChicken (Gallus)

結(jié)締組織生長因子(CTGF)檢測試劑盒(化學(xué)發(fā)光免疫分析法)CLIA Kit for Connective Tissue Growth Factor (CTGF)96TSus scrofa; Porcine (Pig)

骨成型蛋白2(BMP2)檢測試劑盒(化學(xué)發(fā)光免疫分析法)CLIA Kit for Bone Morphogenetic Protein 2 (BMP2)96THomo sapiens (Human)

骨成型蛋白2(BMP2)檢測試劑盒(化學(xué)發(fā)光免疫分析法)CLIA Kit for Bone Morphogenetic Protein 2 (BMP2)96TMus musculus (Mouse)

骨成型蛋白2(BMP2)檢測試劑盒(化學(xué)發(fā)光免疫分析法)CLIA Kit for Bone Morphogenetic Protein 2 (BMP2)96TSus scrofa; Porcine (Pig)

骨成型蛋白2(BMP2)檢測試劑盒(化學(xué)發(fā)光免疫分析法)CLIA Kit for Bone Morphogenetic Protein 2 (BMP2)96TRattus norvegicus (Rat)

骨成型蛋白2(BMP2)檢測試劑盒(化學(xué)發(fā)光免疫分析法)CLIA Kit for Bone Morphogenetic Protein 2 (BMP2)96TCapra hircus; Caprine (Goat)

H輔酶ⅠNAD測試劑盒微量法骨成型蛋白2(BMP2)檢測試劑盒(化學(xué)發(fā)光免疫分析法)CLIA Kit for Bone Morphogenetic Protein 2 (BMP2)96TChicken (Gallus)

轉(zhuǎn)化生長因子β誘導(dǎo)蛋白(TGFβI)檢測試劑盒(化學(xué)發(fā)光免疫分析法)CLIA Kit for Transforming Growth Factor Beta Induced Protein (TGFbI)96TBos taurus; Bovine (Cattle)

轉(zhuǎn)化生長因子β誘導(dǎo)蛋白(TGFβI)檢測試劑盒(化學(xué)發(fā)光免疫分析法)CLIA Kit for Transforming Growth Factor Beta Induced Protein (TGFbI)96TDanio rerio (Zebrafish)

轉(zhuǎn)化生長因子β誘導(dǎo)蛋白(TGFβI)檢測試劑盒(化學(xué)發(fā)光免疫分析法)CLIA Kit for Transforming Growth Factor Beta Induced Protein (TGFbI)96THomo sapiens (Human)