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當(dāng)前位置:上海撫生實(shí)業(yè)有限公司>>生化檢測(cè)試劑盒>>輔酶Ⅰ系列>> MDHAR單脫氫抗壞血酸還原酶微量法
貨號(hào) | FS-01S63232 |
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公司產(chǎn)品僅用于科研提供的生化試劑盒,質(zhì)量信得過(guò)產(chǎn)品,售后完善。服務(wù)于高校及免疫學(xué)科研單位,竭誠(chéng)為您提供更周到的服務(wù)更優(yōu)質(zhì)的產(chǎn)品。
產(chǎn)品名稱:MDHAR單脫氫抗壞血酸還原酶微量法
規(guī)格:100管/96樣
檢測(cè)方法:微量法
貨號(hào):FS-01S63232
商品介紹:
測(cè)定意義 MDHAR催化MDHA還原生成AsA,在抗壞血酸氧化還原代謝中具有重要作用。 測(cè)定原理: MDHAR 催化 NADH 還原MDHA 生成 AsA和NAD+,NADH在340 nm有特征吸收峰,但是NAD+沒(méi)有。通過(guò)測(cè)定340 nm光吸收下降速率,來(lái)計(jì)算出MDHAR活性。 實(shí)驗(yàn)中所需儀器及設(shè)備: 研缽、冰、臺(tái)式離心機(jī)、紫外分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、微量石英比色皿/96孔板、可調(diào)式移液槍和雙蒸水 |
操作步驟:
實(shí)驗(yàn)開始前,各試劑均應(yīng)平衡至室溫(試劑不能直接在37℃溶解);試劑或樣品稀釋時(shí),均需混勻,混勻時(shí)盡量避免起泡。實(shí)驗(yàn)前應(yīng)預(yù)測(cè)樣品含量,如樣品濃度過(guò)高時(shí),應(yīng)對(duì)樣品進(jìn)行稀釋,以使稀釋后的樣品符合試劑盒的檢測(cè)范圍,計(jì)算時(shí)再乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù)。 1. 加樣:分別設(shè)空白孔、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測(cè)樣品孔??瞻卓准訕悠废♂屢?00μl,余孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品或待測(cè)樣品100μl,注意不要有氣泡,加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動(dòng)混勻,酶標(biāo)板加上蓋或覆膜,37℃反應(yīng)120分鐘。為保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果有效性,每次實(shí)驗(yàn)請(qǐng)使用新的標(biāo)準(zhǔn)品溶液。 2. 棄去液體,甩干,不用洗滌。每孔加檢測(cè)溶液A工作液 100μl(在使用前一小時(shí)內(nèi)配制),酶標(biāo)板加上覆膜, 37℃反應(yīng)60分鐘。 3. 溫育60分鐘后,棄去孔內(nèi)液體,甩干,洗板3次,每次浸泡1-2分鐘,大約400μl/每孔,甩干(也可輕拍將孔內(nèi)液體拍干)。 4. 每孔加檢測(cè)溶液B工作液(同檢測(cè)A工作液) 100μl,酶標(biāo)板加上覆膜37℃反應(yīng)60分鐘。 5. 溫育60分鐘后,棄去孔內(nèi)液體,甩干,洗板5次,每次浸泡1-2分鐘,350μl/每孔,甩干(也可輕拍將孔內(nèi)液體拍干)。 6. 依序每孔加底物溶液90μl,酶標(biāo)板加上覆膜37℃避光顯色(30分鐘內(nèi),此時(shí)肉眼可見(jiàn)標(biāo)準(zhǔn)品的前3-4孔有明顯的梯度蘭色,后3-4孔梯度不明顯,即可終止)。 7. 依序每孔加終止溶液50μl,終止反應(yīng),此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色。終止液的加入順序應(yīng)盡量與底物液的加入順序相同。為了保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性,底物反應(yīng)時(shí)間到后應(yīng)盡快加入終止液。 8. 用酶聯(lián)儀在450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的光密度(OD值)。在加終止液后立即進(jìn)行檢測(cè)。 |
粗酶液提?。?/span>
1、細(xì)胞或組織樣品的制備: 培養(yǎng)細(xì)胞:先收集細(xì)胞到離心管內(nèi),離心后棄上清;按照細(xì)胞數(shù)量(104個(gè)):提取液體積(ml)為500~1000:1的比例(建議500萬(wàn)細(xì)胞加入1ml提取液),超聲波破碎細(xì)胞(冰浴,功率20%或200W,超聲3s,間隔10s,重復(fù)30次);8000g 4℃離心10min,取上清,置冰上待測(cè)。組織:按照組織質(zhì)量(g):提取液體積(ml)為1:5~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1ml提取液),進(jìn)行冰浴勻漿。8000g 4℃離心10min,取上清,置冰上待測(cè)。 2、血清(漿)樣品:直接檢測(cè)。 |
試劑的組成和配制:
提取液:液體 100mL×1 瓶,4℃保存;
試劑一:液體 5mL×1 瓶,4℃保存;
試劑二:液體 200μL×1 支,4℃保存;
試劑三:液體 4mL×1 瓶,4℃保存;
試劑四:粉劑×2 瓶,4℃保存。
豬去精加壓(dDAVP)試劑盒 Human Appbp2(Amyloid protein-binding protein 2) ELISA Kit胚胎干相關(guān)蛋白FOPNL抗體
豬衰變加速因子(DAF)試劑盒 Human ANAPC2 (Anaphase-promoting complex subunit 2) ELISA KIT磷化癌基因FOS蛋白B抗體
豬芳基硫酯A(ARSA)試劑盒 Human ANK1(Ankyrin-1) ELISA Kit叉頭蛋白D2抗體
豬趨化因子CX3C受體1(CX3XR1)試劑盒Human ANLN (Actin-binding protein anillin) ELISA KIT叉頭蛋白E3抗體
豬鳥苷激1(GUK1)試劑盒 Human ANKFY1 (Rabankyrin-5) ELISA KIT叉頭蛋白F2抗體
豬脂肪分化相關(guān)蛋白(ADRP)試劑盒 Human Appbp2(Amyloid protein-binding protein 2) ELISA Kit叉頭蛋白H1抗體
豬熱休克蛋白27(HSP-27/HSPB1)試劑盒 Human ANAPC2 (Anaphase-promoting complex subunit 2) ELISA KIT叉頭蛋白I1抗體
豬磷肌-3-激2α肽(PI3K2α)試劑盒Human AIF1L (Allograft inflammatory factor 1-like) ELISA KIT磷化叉頭蛋白4抗體
豬甲狀旁腺受體2(PTHR2)試劑盒Human AAGAB (Alpha- and gamma-adaptin-binding protein p34) ELISA KIT單跨膜蛋白FOXRED1抗體
豬顆粒體蛋白(GRN)試劑盒Human AGPS (Alkyldihydroxyacetonephosphate synthase, peroxisomal) ELISA KITFOXRED2蛋白抗體
豬GATA結(jié)合蛋白5(GATA5)試劑盒Human ADRB2 (Beta-2 adrenergic receptor) ELISA KIT巖藻糖1磷鳥苷酰轉(zhuǎn)移抗體
豬酪羥化(TH)試劑盒 Human ALMS1 (Alstrom syndrome protein 1) ELISA KIT外基質(zhì)蛋白FREM1抗體
豬血漿α顆粒膜蛋白(GMP-140)試劑盒 Human ADRA1D (Alpha-1D adrenergic receptor) ELISA KIT原癌基因FRAT1抗體
豬胚外胚層發(fā)育蛋白(EED)試劑盒Human AMER1 (APC membrane recruitment protein 1) ELISA KIT叉頭蛋白D1抗體
豬著絲粒蛋白F(CENPF)試劑盒 Human AMBN (Ameloblastin) ELISA KIT11重鏈抗體
MDHAR單脫氫抗壞血酸還原酶微量法乙型肝炎e抗原Anti-LPAR5 Antibody小鼠肝癌衍生生長(zhǎng)因子(HDGF)elisa定量檢測(cè)試劑盒
乙型肝炎e抗體Anti-LRG1 Antibody小鼠胰島樣生長(zhǎng)因子結(jié)合蛋白4(IGFBP-4)elisa定量檢測(cè)試劑盒
乙型肝炎核心抗體Anti-LPCAT2 Antibody小鼠巨噬移動(dòng)抑制因子(MIF)elisa定量檢測(cè)試劑盒
乙型肝炎核心抗體 IgMAnti-LRP10 Antibody小鼠神經(jīng)絲蛋白(NF)elisa定量檢測(cè)試劑盒
促黃體生成Anti-LRP10 Antibody小鼠基質(zhì)金屬蛋白原-9(Pro-MMP-9)elisa定量檢測(cè)試劑盒
促卵泡生成Anti-LRP3 Antibody小鼠核因子κB受體活化因子配基(RANκL)elisa定量檢測(cè)試劑盒
催乳Anti-LRP11 Antibody小鼠白介12(IL-12)elisa定量檢測(cè)試劑盒
孕酮Anti-LRRC41 Antibody小鼠白介13(IL-13)elisa定量檢測(cè)試劑盒
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