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當(dāng)前位置：上海撫生實業(yè)有限公司>>科研細(xì)胞>>原代細(xì)胞培養(yǎng)>> 復(fù)蘇專用因子
| 產(chǎn)地 | 國產(chǎn) | 加工定制 | 是 |
|---|---|---|---|
| 適用領(lǐng)域 | 科研 | 貨號 | FS-02X0023 |
細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲存。
二．細(xì)胞處理：
1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細(xì)胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
產(chǎn)品屬于：
產(chǎn)品名稱：復(fù)蘇專用因子
英文名稱：Y27632
貨號：FS-02X0023
規(guī)格：1mg
細(xì)胞培養(yǎng)的優(yōu)點：
1.研究的對象是活細(xì)胞 在實驗過程中，根據(jù)要求可始終保持細(xì)胞活力，并可長時間監(jiān)控、檢測甚至定量評估一部分活細(xì)胞的情況，包括活細(xì)胞的形態(tài)、結(jié)構(gòu)、生命活動等。 2.研究條件可以人為控制 pH、溫度、氧氣、二氧化碳、張力等物理化學(xué)的條件，可以根據(jù)實際需要進(jìn)行人為的控制，同時，可以施加化學(xué)、物理、生物等因素作為條件而進(jìn)行實驗觀察，這些因素同樣可以處于嚴(yán)格控制之下。 3.研究的樣本可以達(dá)到比較均一性 通過細(xì)胞培養(yǎng)一定代數(shù)后，所得到的細(xì)胞系則可以達(dá)到均一性而屬于同一類型的細(xì)胞，需要時，可采用克隆化等方法使細(xì)胞達(dá)到純化。 4.研究內(nèi)容便于觀察、檢測和記錄 采用各種研究技術(shù)：如倒置生物顯微鏡、熒光顯微鏡、電子顯微鏡、流式細(xì)胞術(shù)、激光共焦顯微鏡、免疫組織化學(xué)、原位雜交、同位素標(biāo)記等各種儀器設(shè)備。 |
注意事項：
1. 接收到細(xì)胞，肉眼觀察細(xì)胞培養(yǎng)基顏色，顯微鏡觀察細(xì)胞生長情況，并對細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照（建議收到時的培養(yǎng)瓶拍一張照片，顯微鏡拍收到時的細(xì)胞100X,200X各一張）。 2.用75%的酒精消毒（建議配置75%的酒精的水是滅菌過的）。 3.嚴(yán)格無菌操作，打開細(xì)胞培養(yǎng)瓶。 4.將細(xì)胞培養(yǎng)瓶內(nèi)的培養(yǎng)基用吸管*吸出（嚴(yán)禁直接傾倒），放入另一無菌容器中（建議換新的培養(yǎng)基培養(yǎng)細(xì)胞）。 5.用PBS 2-3ml/次輕輕洗細(xì)胞表面，洗3-4次遍，加入0.05%-EDTA1-1.5ml,顯微鏡下觀察細(xì)胞變圓，輕輕拍打培養(yǎng)瓶直到細(xì)胞脫落，加入終止液終止。 6.1000rpm，5min離心，重懸細(xì)胞。 7.換新的細(xì)胞培養(yǎng)瓶，37℃，5%CO2培養(yǎng)。 |
Cytovillin (CVL)細(xì)胞絨毛蛋白(CVL)檢測試劑盒(聯(lián)免疫吸附試驗法)規(guī)格：48T/96T
Large Neutral Amino Acid Transporter 1 (LAT1)大型中性基轉(zhuǎn)運蛋白1(LAT1)檢測試劑盒(聯(lián)免疫吸附試驗法)規(guī)格：48T/96T
Interleukin 8 Receptor Beta (IL8Rb)白介8受體β(IL8Rβ)檢測試劑盒(聯(lián)免疫吸附試驗法)規(guī)格：48T/96T
Interleukin 34 (IL34)白介34(IL34)檢測試劑盒(聯(lián)免疫吸附試驗法)規(guī)格：48T/96T
Interleukin 34 (IL34)白介34(IL34)檢測試劑盒(聯(lián)免疫吸附試驗法)規(guī)格：48T/96T
Big Dynorphin (Dyn)強啡(Dyn)檢測試劑盒(聯(lián)免疫吸附試驗法)規(guī)格：48T/96T
Enkephalin (ENK)腦啡(ENK)檢測試劑盒(聯(lián)免疫吸附試驗法)規(guī)格：48T/96T
Fibroblast Growth Factor Receptor Substrate 2 (FRS2)成纖維生長因子受體底物2(FRS2)檢測試劑盒(聯(lián)免疫吸附試驗法)規(guī)格：48T/96T
Interleukin 24 (IL24)白細(xì)胞介24(IL24)檢測試劑盒(聯(lián)免疫吸附試驗法)規(guī)格：48T/96T
Metallothionein 1 (MT1)金屬硫蛋白1(MT1)檢測試劑盒(聯(lián)免疫吸附試驗法)規(guī)格：48T/96T
Myostatin (MSTN)肌肉生長抑制(MSTN)檢測試劑盒(聯(lián)免疫吸附試驗法)規(guī)格：48T/96T
Carbonic Anhydrase II (CA2)碳酐Ⅱ(CA2)檢測試劑盒(聯(lián)免疫吸附試驗法)規(guī)格：48T/96T
Ceruletide (INN)雨蛙(INN)檢測試劑盒(聯(lián)免疫吸附試驗法)規(guī)格：48T/96T
Alpha-2-Heremans Schmid Glycoprotein (aHSG)α2-HS糖蛋白(αHSG)檢測試劑盒(聯(lián)免疫吸附試驗法)規(guī)格：48T/96T
Receptor Activator Of Nuclear Factor Kappa B Ligand (RANkL)核因子κB受體激活因子配基(RANκL)檢測試劑盒(聯(lián)免疫吸附試驗法)規(guī)格：48T/96T
Early Growth Response Protein 4 (EGR4)早期生長應(yīng)答因子4(EGR4)檢測試劑盒(聯(lián)免疫吸附試驗法)規(guī)格：48T/96T
Glucose 6 Phosphate Dehydrogenase (G6PD)葡萄糖6磷脫氫(G6PD)檢測試劑盒(聯(lián)免疫吸附試驗法)規(guī)格：48T/96T
Glucose 6 Phosphate Dehydrogenase (G6PD)葡萄糖6磷脫氫(G6PD)檢測試劑盒(聯(lián)免疫吸附試驗法)規(guī)格：48T/96T
復(fù)蘇專用因子IRX5 Iroquois同源蛋白5抗體規(guī)格: 0.2ml
MEF2B 肌細(xì)胞增強因子2B抗體規(guī)格: 0.2ml
MESP1 心血管發(fā)育中胚層相關(guān)蛋白1抗體規(guī)格: 0.2ml
Myocardin 促血管平滑肌細(xì)胞分化因子抗體規(guī)格: 0.2ml
NFAT5 活化T細(xì)胞核因子5蛋白抗體規(guī)格: 0.2ml
phospho-NFAT5 (Ser1197) 磷化活化T細(xì)胞核因子5蛋白抗體規(guī)格: 0.1ml
CNN2 平滑肌鈣調(diào)蛋白CNN2抗體規(guī)格: 0.2ml
Wnt16 信號通路Wnt16抗體規(guī)格: 0.2ml
實驗報告：
一、分離與培養(yǎng)：
1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大?。?/span>
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；
3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；
5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；
二、免疫熒光鑒定：
1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；
2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；
3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜；
5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；
6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
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