NADMDHNAD蘋果酸脫氫酶檢測試劑盒微量法-上海撫生實業(yè)有限公司

貨號	FS-01S63216

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規(guī)格：100管/96樣

檢測方法：微量法

貨號：FS-01S63216

商品介紹：

測定意義

MDH （EC 1.1.1.37）廣泛存在于動物、植物、微生物和培養(yǎng)細胞中，線粒體中MDH是TCA循環(huán)的關鍵酶之一，催化蘋果酸形成草酰乙酸；相反，胞漿中MDH催化草酰乙酸形成蘋果酸。草酰乙酸是重要的中間產物，連接多條重要的代謝途徑。因此，MDH在細胞多種生理活動中扮演著重要的角色，包括線粒體的能量代謝、蘋果酸-天冬氨酸穿梭系統(tǒng)、活性氧代謝和抗病性等。根據不同的輔酶特異性，MDH分為NAD-依賴的MDH和NADP-依賴的MDH，細菌中通常只含有NAD-MDH，在真核細胞中，NAD-MDH分布于細胞質和線粒體中。

測定原理：

NAD-MDH催化NADH還原草酰乙酸生成蘋果酸，導致340nm處光吸收下降。

需自備的儀器和用品：

紫外分光光度計/酶標儀、臺式離心機、水浴鍋、可調式移液器、微量石英比色皿/96孔板和蒸餾水。

操作步驟:

實驗開始前，各試劑均應平衡至室溫（試劑不能直接在37℃溶解）；試劑或樣品稀釋時，均需混勻，混勻時盡量避免起泡。實驗前應預測樣品含量，如樣品濃度過高時，應對樣品進行稀釋，以使稀釋后的樣品符合試劑盒的檢測范圍，計算時再乘以相應的稀釋倍數。

1. 加樣：分別設空白孔、標準孔、待測樣品孔。空白孔加樣品稀釋液100μl，余孔分別加標準品或待測樣品100μl，注意不要有氣泡，加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻，酶標板加上蓋或覆膜，37℃反應120分鐘。為保證實驗結果有效性，每次實驗請使用新的標準品溶液。

2. 棄去液體，甩干，不用洗滌。每孔加檢測溶液A工作液 100μl（在使用前一小時內配制），酶標板加上覆膜, 37℃反應60分鐘。

3. 溫育60分鐘后，棄去孔內液體，甩干，洗板3次，每次浸泡1-2分鐘，大約400μl/每孔，甩干（也可輕拍將孔內液體拍干）。

4. 每孔加檢測溶液B工作液（同檢測A工作液） 100μl，酶標板加上覆膜37℃反應60分鐘。

5. 溫育60分鐘后，棄去孔內液體，甩干，洗板5次，每次浸泡1-2分鐘，350μl/每孔，甩干（也可輕拍將孔內液體拍干）。

6. 依序每孔加底物溶液90μl，酶標板加上覆膜37℃避光顯色（30分鐘內，此時肉眼可見標準品的前3-4孔有明顯的梯度蘭色，后3-4孔梯度不明顯，即可終止）。

7. 依序每孔加終止溶液50μl，終止反應，此時藍色立轉黃色。終止液的加入順序應盡量與底物液的加入順序相同。為了保證實驗結果的準確性，底物反應時間到后應盡快加入終止液。

8. 用酶聯儀在450nm波長依序測量各孔的光密度（OD值）。在加終止液后立即進行檢測。

粗酶液提取：

1、細胞或組織樣品的制備：

培養(yǎng)細胞：先收集細胞到離心管內，離心后棄上清；按照細胞數量（104個）：提取液體積（ml）為500~1000：1的比例（建議500萬細胞加入1ml提取液），超聲波破碎細胞（冰浴，功率20％或200W，超聲3s，間隔10s，重復30次）；8000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測。組織：按照組織質量（g）：提取液體積(ml)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1ml提取液），進行冰浴勻漿。8000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測。

2、血清（漿）樣品：直接檢測。

試劑的組成和配制：

提取液：液體 100mL×1 瓶，4℃保存；

試劑一：液體 5mL×1 瓶，4℃保存；

試劑二：液體 200μL×1 支，4℃保存；

試劑三：液體 4mL×1 瓶，4℃保存；

試劑四：粉劑×2 瓶，4℃保存。
紫色直絲鏈霉Sheep CG (Chorionic Gonadotropin) ELISA Kit

秀珍菇Sheep IL-24 (Interleukin 24) ELISA Kit

節(jié)桿屬Sheep AP (Allopregnanolone) ELISA Kit

香菇Sheep AQP-2 (Aquaporin 2) ELISA Kit

中國漢納酵母Sheep COL3 (Collagen Type Ⅲ) ELISA Kit

黑曲霉Sheep ApoA5 (Apolipoprotein A5) ELISA Kit

干酪乳桿Sheep ACCPA (anti-cyclic citrullinated peptide antibody) ELISA Kit

鹵水糖螺Sheep Ta1 (Thymosin-α1) ELISA Kit

漢遜德巴利酵母Sheep PS1 (Presenilin 1) ELISA Kit

鐘器腐霉Sheep PACAP-38 (Pituitary Adenylate Cyclase Activating Polypeptide 38) ELISA Kit

柑橘青霉Sheep PACAP-27 (Pituitary Adenylate Cyclase Activating Polypeptide 27) ELISA Kit

北京芽孢桿Sheep NOS2/iNOS (Nitric Oxide Synthase 2, Inducible) ELISA Kit

黑根霉Sheep IL-5 (Interleukin 5) ELISA Kit

歐文氏屬GHRL (Ghrelin) ELISA Kit

固氮GHRL (Ghrelin/Obestatin Preprohormone) ELISA Kit
NADMDHNAD蘋果酸脫氫酶檢測試劑盒微量法乙 for HPLC, >99.0%(GC)，含2%乙作穩(wěn)定劑氣相納米二氧化硅 99.8%,比表面積（BET）：200m2/g;氯化物：0.01Anti-IFN- Beta/FITC 熒光標記抗人干擾-β抗IgG

二甲基黃 indicator氣相納米二氧化硅 99.8%,比表面積（BET）：300m2/g；粒徑：7-40nAnti-IFN- Gamma/FITC 熒光標記干擾-γ抗體IgG

砷試劑 AR,99.0%氣相納米二氧化硅 99.8%,比表面積（BET）：170m2/g；粒徑：7-40nAnti-IFN- Gamma/FITC(Interferon Gamma) 熒光標記抗大、小鼠IFN-γ抗IgG

1,2-二氯乙烷 standard for GC,>99.9%(GC)氣相納米二氧化硅 99.8%,比表面積（BET）：120m2/g；粒徑：7-40nAnti-IFNGR2/FITC 熒光標記干擾-gamma受體2抗體IgG

1,3-二基－4-(5-溴-2-吡偶氮) AR疏水氣相納米二氧化硅 99.8%,比表面積(BET):230m2/g;;粒徑:7-40nAnti-IFN- Gamma/HRP 辣根過氧化物標記鼠抗人干擾-γ/IFN-gamma單克隆抗體IgG

2-(3,5-二溴-2-吡偶氮)-5-二乙基 AR氣相納米二氧化硅 99.8%,比表面積（BET）：100m2/g；粒徑：7-40nAnti-IFNGR1/CD119/FITC 熒光標記干擾-gamma受體抗體IgG

二乙基乙基纖維-1 TLC二氧化硅 99.5%,30±5nmAnti-IGC/FITC 熒光標記兔抗非洲爪蟾IGC抗體IgG

二甲基黃分析標準品，≥98.0% (HPLC)二氧化硅 99.5%,15±5nmAnti-IGF-I/FITC 熒光標記標記胰島樣生長因子-I抗體IgG