原代卵巢顆粒細(xì)胞培養(yǎng)體系-上海撫生實(shí)業(yè)有限公司

產(chǎn)地	國產(chǎn)	加工定制	是
適用領(lǐng)域	科研	貨號(hào)	FS-01X9973

細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程：

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：

1）準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號(hào)21875-091)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。

2）培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲(chǔ)存。

二．細(xì)胞處理：

1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。

2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

對(duì)于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：

方法一：收集細(xì)胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

產(chǎn)品屬于：

產(chǎn)品名稱：原代卵巢顆粒細(xì)胞培養(yǎng)體系

產(chǎn)品規(guī)格：100ml/500ml

貨號(hào)：FS-01X9973

保存溫度（℃）：2-8℃/-20℃

運(yùn)輸溫度（℃）：2-8℃/-20℃

細(xì)胞培養(yǎng)的優(yōu)點(diǎn)：

1.研究的對(duì)象是活細(xì)胞

在實(shí)驗(yàn)過程中，根據(jù)要求可始終保持細(xì)胞活力，并可長時(shí)間監(jiān)控、檢測甚至定量評(píng)估一部分活細(xì)胞的情況，包括活細(xì)胞的形態(tài)、結(jié)構(gòu)、生命活動(dòng)等。

2.研究條件可以人為控制

pH、溫度、氧氣、二氧化碳、張力等物理化學(xué)的條件，可以根據(jù)實(shí)際需要進(jìn)行人為的控制，同時(shí)，可以施加化學(xué)、物理、生物等因素作為條件而進(jìn)行實(shí)驗(yàn)觀察，這些因素同樣可以處于嚴(yán)格控制之下。

3.研究的樣本可以達(dá)到比較均一性

通過細(xì)胞培養(yǎng)一定代數(shù)后，所得到的細(xì)胞系則可以達(dá)到均一性而屬于同一類型的細(xì)胞，需要時(shí)，可采用克隆化等方法使細(xì)胞達(dá)到純化。

4.研究內(nèi)容便于觀察、檢測和記錄

采用各種研究技術(shù)：如倒置生物顯微鏡、熒光顯微鏡、電子顯微鏡、流式細(xì)胞術(shù)、激光共焦顯微鏡、免疫組織化學(xué)、原位雜交、同位素標(biāo)記等各種儀器設(shè)備。

注意事項(xiàng)：

1. 接收到細(xì)胞，肉眼觀察細(xì)胞培養(yǎng)基顏色，顯微鏡觀察細(xì)胞生長情況，并對(duì)細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照（建議收到時(shí)的培養(yǎng)瓶拍一張照片，顯微鏡拍收到時(shí)的細(xì)胞100X,200X各一張）。

2.用75%的酒精消毒（建議配置75%的酒精的水是滅菌過的）。

3.嚴(yán)格無菌操作，打開細(xì)胞培養(yǎng)瓶。

4.將細(xì)胞培養(yǎng)瓶內(nèi)的培養(yǎng)基用吸管*吸出（嚴(yán)禁直接傾倒），放入另一無菌容器中（建議換新的培養(yǎng)基培養(yǎng)細(xì)胞）。

5.用PBS 2-3ml/次輕輕洗細(xì)胞表面，洗3-4次遍，加入0.05%-EDTA1-1.5ml,顯微鏡下觀察細(xì)胞變圓，輕輕拍打培養(yǎng)瓶直到細(xì)胞脫落，加入終止液終止。

6.1000rpm，5min離心，重懸細(xì)胞。

7.換新的細(xì)胞培養(yǎng)瓶，37℃，5%CO2培養(yǎng)。

Forkhead Box Protein M1 (FOXM1)叉頭框蛋白M1(FOXM1)檢測試劑盒(聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)規(guī)格：48T/96T

Epidermal Growth Factor Receptor (EGFR)表皮生長因子受體(EGFR)檢測試劑盒(聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)規(guī)格：48T/96T

Anti Mullerian Hormone (AMH)抗繆勒管(AMH)檢測試劑盒(聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)規(guī)格：48T/96T

Complement Component 7 (C7)補(bǔ)體成分7(C7)檢測試劑盒(聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)規(guī)格：48T/96T

Complement C3 Convertase (C3c)補(bǔ)體C3轉(zhuǎn)化(C3c)檢測試劑盒(聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)規(guī)格：48T/96T

Inhibin B (INHB)抑制B(INHB)檢測試劑盒(聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)規(guī)格：48T/96T

C4 Binding Protein Beta (C4BPb)C4結(jié)合蛋白β(C4BPβ)檢測試劑盒(聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)規(guī)格：48T/96T

Matrix Metalloproteinase 11 (MMP11)基質(zhì)金屬蛋白11(MMP11)檢測試劑盒(聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)規(guī)格：48T/96T

A Disintegrin And Metalloprotease 10 (ADAM10)解整合金屬蛋白10(ADAM10)檢測試劑盒(聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)規(guī)格：48T/96T

Protein Kinase, AMP Activated Alpha 1 (PRKAa1)AMP激活蛋白激α1(PRKAα1)檢測試劑盒(聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)規(guī)格：48T/96T

Forkhead Box Protein P1 (FOXP1)叉頭框蛋白P1(FOXP1)檢測試劑盒(聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)規(guī)格：48T/96T

Forkhead Box Protein O1 (FOXO1)叉頭框蛋白O1(FOXO1)檢測試劑盒(聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)規(guī)格：48T/96T

Forkhead Box Protein C1 (FOXC1)叉頭框蛋白C1(FOXC1)檢測試劑盒(聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)規(guī)格：48T/96T

Forkhead Box Protein O3 (FOXO3)叉頭框蛋白O3(FOXO3)檢測試劑盒(聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)規(guī)格：48T/96T

Cluster Of Differentiation 14 (CD14)CD14分子(CD14)檢測試劑盒(聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)規(guī)格：48T/96T

Membrane Protein, Palmitoylated 2 (MPP2)棕櫚酰化膜蛋白2(MPP2)檢測試劑盒(聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)規(guī)格：48T/96T

Alcohol Dehydrogenase 1 (ADH1)乙脫氫1(ADH1)檢測試劑盒(聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)規(guī)格：48T/96T

Granzyme K (GZMK)顆粒K(GZMK)檢測試劑盒(聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)規(guī)格：48T/96T
原代卵巢顆粒細(xì)胞培養(yǎng)體系FAM135B FAM135B蛋白抗體規(guī)格: 0.2ml

FAM166A FAM166A蛋白抗體規(guī)格: 0.2ml

HIDE1/C19orfC38 19號(hào)染色體開放閱讀框38抗體規(guī)格: 0.2ml

HIG1/HIGD1A 缺氧誘導(dǎo)基因1蛋白抗體規(guī)格: 0.2ml

HIP1R/HIP12/HIP3 亨丁頓舞蹈癥相互作用蛋白12抗體規(guī)格: 0.2ml

HMBS/PBGD 卟膽原脫抗體規(guī)格: 0.2ml

HN1/ARM2 雄調(diào)節(jié)蛋白2抗體規(guī)格: 0.2ml

HN1L 雄調(diào)節(jié)樣蛋白抗體規(guī)格: 0.2ml
實(shí)驗(yàn)報(bào)告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大??；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

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