ROS線粒體活性氧產(chǎn)生速率檢測(cè)試劑盒熒光法-上海撫生實(shí)業(yè)有限公司

貨號(hào)	FS-01S63297

產(chǎn)品屬性：

產(chǎn)品名稱	規(guī)格	檢測(cè)方法	貨號(hào)
ROS線粒體活性氧產(chǎn)生速率檢測(cè)試劑盒熒光法	100管/96樣	熒光法	FS-01S63297

商品介紹：

測(cè)定意義

活性氧(Reactive oxygen species, ROS)包括超氧自由基、過氧化氫、及其下游產(chǎn)物過氧化物和羥化物等，研究表明，機(jī)體95％以上的活性氧（ROS）都來自于線粒體，其失衡所致的氧化應(yīng)激與細(xì)胞生長(zhǎng)增殖、發(fā)育分化、衰老和凋亡以及許多生理和病理過程有關(guān)。

正常情況下，細(xì)胞內(nèi)抗氧化防御系統(tǒng)與氧自由基處于平衡狀態(tài)，細(xì)胞內(nèi)活性氧（ROS）水平維持在較低的生理范圍；在病理情況下，細(xì)胞內(nèi)抗氧化系統(tǒng)與氧自由基的平衡被打破，細(xì)胞內(nèi)活性氧水平過多，就可破壞線粒體酶類、脂類和核酸，使機(jī)體出現(xiàn)氧化應(yīng)激，同時(shí)，活性氧還可攻擊線粒體DNA產(chǎn)生氧化損傷，導(dǎo)致線粒體ATP合成減少、線粒體膜電位破壞等結(jié)構(gòu)和功能變化。

因此，通過檢測(cè)活性氧的變化來判斷線粒體的功能是否正常具有重要意義。

測(cè)定原理：

熒光探針-還原型二氯熒光素 (2', 7'-dichlorodihy drofluorescin diacetate, DCFH-DA)可擴(kuò)散通過線粒體膜，在線粒體內(nèi)被酯酶水解，形成無熒光的DCFH，DCFH迅速與ROS反應(yīng)生成熒光物—氧化型二氯熒光素(2', 7'-dichlo rofluorescin, DCF)。根據(jù)上述原理設(shè)計(jì)了利用熒光法直接定量檢測(cè)線粒體ROS產(chǎn)生速率的方法。將熒光強(qiáng)度隨時(shí)間變化的數(shù)據(jù)點(diǎn)擬合，線性回歸直線斜率與ROS產(chǎn)生的速率呈正比。

需自備的儀器和用品：

多功能酶標(biāo)儀、恒溫培養(yǎng)箱、分析天平、可調(diào)式移液器、冰、蒸餾水。

樣本前處理步驟：
樣本處理前須知

處理任何樣本時(shí),都必須注意:

(1) 實(shí)驗(yàn)中必須使用一次性吸頭,在吸取不同的試劑時(shí)要更換吸頭(2)實(shí)驗(yàn)前須檢查各種實(shí)驗(yàn)器具是否干凈,必要時(shí)對(duì)實(shí)驗(yàn)器具進(jìn) 行清潔,避免污染干擾實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

(a)組織樣品處理方法:

1、稱取5±0.05g組織樣品于50ml離心管中,先加入3ml已稀釋好的樣品提取液震蕩2min;再加入10ml乙腈,充分震蕩5min,

2、加入2g中性氧化鋁;震蕩2min ,室溫4000r/min以上,離心10min;;

3、取6ml上清液于干凈離心管中,加入5ml二氯甲烷震蕩3min ,室溫4000r/min以上,離心10min;;

4、取下層清澈液體于玻璃管中,加入20ul氧化劑混勻,在56℃條件下氮?dú)饣蚩諝饬鞔抵?干燥;

5、加入1ml復(fù)溶液,充分溶解干燥殘留物。

6、取100ul 上清液與100ul 已稀釋好的復(fù)溶液充分混合30s,

7、取50ul進(jìn)行分析。

樣本稀釋倍數(shù): 1倍

(b)水樣品處理方法:

1、取50ul 上清液與450ul 已稀釋好的復(fù)溶液充分混合30s,

2、取50ul進(jìn)行分析。

樣本稀釋倍數(shù):10倍

下列是公司正在出售的產(chǎn)品：

小鼠趨化樣因子超家族成員7(CKLFSF7)聯(lián)免疫試劑盒灰色筍殼LRRC8A/SWELL1 Antibody

小鼠趨化樣因子超家族成員8(CKLFSF8)聯(lián)免疫試劑盒疣梗青霉FoxO3a (75D8) Rabbit mAb

小鼠膽囊收縮/縮膽囊A受體(CCKAR)聯(lián)免疫試劑盒分散泛eIF4G Antibody

小鼠膽囊收縮/縮膽囊B受體(CCKBR)聯(lián)免疫試劑盒島籃狀FoxO4 (55D4) Rabbit mAb

小鼠膽酯轉(zhuǎn)移蛋白(CETP)聯(lián)免疫試劑盒球毛殼Phospho-SF3B1 (Thr313) (D8D8V) Rabbit mAb

小鼠膽磷甘油酯(PC/CPG)聯(lián)免疫試劑盒小孢根霉VE-Cadherin (D87F2) XP® Rabbit mAb

小鼠生長(zhǎng)停滯特異性蛋白6(Gas6)聯(lián)免疫試劑盒參土成對(duì)桿VE-Cadherin (D87F2) XP® Rabbit mAb

小鼠硫軟骨(CS)聯(lián)免疫試劑盒假單胞屬TORC1/CRTC1 Antibody

小鼠絨毛膜促性腺(CG)聯(lián)免疫試劑盒更新世肉桿Vav1 Antibody

小鼠染色盒同源物3(CBX3)聯(lián)免疫試劑盒淋病奈瑟Stargazin Antibody

小鼠染色質(zhì)區(qū)解旋DNA結(jié)合蛋白3(CHD3)聯(lián)免疫試劑盒海南油脂酵母PD-L1 (Extracellular Domain Specific) (D8T4X) Rabbit mAb (Alexa Fluor® 488 Conjugate)

小鼠染色質(zhì)區(qū)解旋DNA結(jié)合蛋白5(CHD5)聯(lián)免疫試劑盒大腸埃希氏APC Antibody

小鼠睫狀神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子(CNTF)聯(lián)免疫試劑盒哈茨木霉TrkA Antibody

小鼠耐性相關(guān)過表達(dá)蛋白(CROP)聯(lián)免疫試劑盒熱脫氮地芽孢桿熱脫氮亞種CDK5 Antibody

小鼠C-jun 聯(lián)免疫試劑盒茯苓PSD95 Antibody
ROS線粒體活性氧產(chǎn)生速率檢測(cè)試劑盒熒光法溴代正壬烷 97%二二甲酯 98%ELAVL1/HuR peptide ELAVL1/HuR多肽抗原

溴代正癸烷 AR，98%二二乙酯 99%Emp1 (epithelial membrane protein 1) 表皮膜蛋白1抗原

溴代十二烷 98%二二異酯 99%sFRP-4(Secreted frizzled-related protein 4; Frizzled protein, human endometrium) 抗內(nèi)膜抗原

1-溴十八烷 97%雙酮烯酰 99%Endostatin 內(nèi)皮抑/內(nèi)皮他丁抗原

2- 98%三乙酯 97%EpCAM(Epithelial cell adhesion molecule) 上皮粘附分子/表皮粘附分子（多肽）

1-溴-2-氯乙烷 98%乙酯 CP,98% EpCAM/CD326(Epithelial cell adhesion molecule) 上皮粘附分子/表皮粘附分子抗原

溴乙 AR,98.5%(GC)乙乙酯 99%E.coli O6 (Escherichia coli O6) E.coli O6大腸桿菌菌體蛋白

溴代十六烷 97%甲酯 AR,99.0%EPEC/E.coli(enteropathogenic E．coli，EPEC) 普通大腸埃希菌菌體蛋白（非致病性）
實(shí)驗(yàn)通用規(guī)則:
1、將液體加到酶標(biāo)孔中時(shí)，避免槍頭和孔內(nèi)液體接觸，可使槍頭上的液滴和孔壁接觸，液滴會(huì)自然流下去。

2、用槍吸取液體時(shí)速度不能太快，以免產(chǎn)生氣泡而使吸取量不準(zhǔn)確。

3、溫浴時(shí)，要用不干膠或膠帶紙封好酶標(biāo)板，防止水分的蒸發(fā)。

4、洗液不夠時(shí)，可用蒸餾水自行配制PH7.4，0.02M的磷酸緩沖液，加入0.1%的吐溫20作為洗液。加入1/1000的疊氮鈉后可長(zhǎng)期保存。

5、實(shí)驗(yàn)時(shí)，要使底物避光保存。

6、洗板時(shí)，每次洗液加入后，應(yīng)靜置1分鐘，使清洗更加*。沒有洗板機(jī)時(shí)，倒去液體后，要將酶標(biāo)板在報(bào)紙或毛紙上用力拍干。

7、要在實(shí)驗(yàn)前1小時(shí)將試劑盒從冰箱中取出，使各種試劑都恢復(fù)到室溫，以使結(jié)果更穩(wěn)定。

8、吸取液體時(shí)，要用量程和需要量接近的槍去吸，減少誤差。

9、要配備20ul、50ul、100ul、1000ul和排槍各一支。吸取不同的液體后，要更換槍頭。即使是吸取標(biāo)準(zhǔn)品時(shí)。

10、液體全部加完后，可將酶標(biāo)板在桌子上平行輕輕晃動(dòng)30秒，混勻液體。也可以用酶標(biāo)儀的晃動(dòng)功能。