Ad5DNA轉化的胚腎細胞 , 293細胞5×10^5以上/1ml
對于大多數細胞研究工作者來說，Ad5DNA轉化的胚腎細胞 , 293細胞污染那可是個糟糕的事情，也是比較容易出現的情況，我們如何防范，如何避免，是我們要學習和掌握的。
肌原纖蛋白1（FBN1）檢測試劑盒（化學發(fā)光免疫分析法） CLIA Kit for Fibrillin 1 （FBN1） Homo sapiens （Human）
粘蛋白5B（MUC5B）檢測試劑盒（化學發(fā)光免疫分析法） CLIA Kit for Mucin 5 Subtype B （MUC5B） Homo sapiens （Human）
Ad5DNA轉化的胚腎細胞 , 293細胞Toll樣受體4（TLR4）檢測試劑盒（化學發(fā)光免疫分析法） CLIA Kit for Toll Like Receptor 4 （TLR4） Mus musculus （Mouse）
血清淀粉樣P物質（SAP）檢測試劑盒（化學發(fā)光免疫分析法） CLIA Kit for Serum Amyloid P Component （SAP） Homo sapiens （Human）
巨噬細胞清道夫受體1（MSR1）檢測試劑盒（化學發(fā)光免疫分析法） CLIA Kit for Macrophage Scavenger Receptor 1 （MSR1） Homo sapiens （Human）
下面我們對細胞培養(yǎng)中常見的污染情況，做個總結：
1）原蟲：培養(yǎng)液可輕微渾濁，顯微鏡下那些細小的點狀物數量非常多，輕微活動，細胞雖然可以生長但繁殖速度卻明顯減慢，而且細胞狀態(tài)不好，邊緣不清楚，細胞不透亮。他們與細胞可共生但會與細胞爭奪營養(yǎng)。這種共生是非常普遍的，但他們的數量小，細胞站優(yōu)勢所以不會影響到細胞的正常生長，只有當他們到達一定的數量時就會影響到細胞的生長，zui終形成惡性循環(huán)。
2）霉菌：培養(yǎng)液是清亮的，倒置顯微鏡下無雜質，37度孵箱培養(yǎng)2-3天，仍清亮，但出現絮狀雜質，鏡下可見呈細絲狀的團狀漂浮物，可看到明顯的菌絲，細胞仍可生長，但時間長之后，細胞的活力狀態(tài)變差，用硫酸銅溶液擦拭CO2孵箱內，再把水盤里也加上飽和量的硫酸銅?；蛘咴谂囵B(yǎng)箱的托盤加入飽和的消毒*高鹽液體,可以防止霉菌污染。CO2孵箱被霉菌污染后，可把所有細胞暫時轉移，采用過氧乙酸擦洗孵箱（包括隔板，箱壁）。并把過氧乙酸放置在孵箱內一個小時，使其蒸汽彌漫。待過氧乙酸的氣味消散后，再移入細胞。孵箱應定期清潔（2月左右），尤其在多雨的季節(jié)。其它培養(yǎng)箱清洗方法是：用84液擦洗－清水擦洗－75%酒精擦洗－紫外燈照。預防霉菌污染，可在培養(yǎng)基里加3u/ml的兩性霉素或*或*或雙抗；但細胞一旦污染，很難挽救，*或*或雙抗都于事無補，建議舍棄該污染細胞。，將環(huán)境*消毒，如果所有細胞都污染，可能是系統(tǒng)污染，檢查一下培養(yǎng)基和器材，如果只是個別污染，可能是操作問題，就要注意操作。
3）細菌：細菌在普通倒置顯微鏡下為黑色細沙狀，根據感染細菌的不同，可有不同的外形，培養(yǎng)液一般會渾濁變黃，對細胞生長影響明顯。仔細檢查一下器皿的滅菌情況，是否在高壓滅菌時放氣時間足夠，壓力足夠！尤其是和儲存培養(yǎng)液接觸的移液管等物品，連續(xù)兩次污染的話有可能造成儲存液污染，一定要注意！下次使用前檢查一下培養(yǎng)液是否存在渾濁的現象！ 可在培養(yǎng)液中加相應的抗生素處理
4）黑蛟蟲：可以穿透濾膜，也可以通過空氣傳播，低倍下為黑色點狀，高倍下可看見黑色的小蟲游來游去，培養(yǎng)液也是不渾的，一般不會太影響，細胞還是可以用的。常常是細胞生長狀態(tài)良好，且觀測到的運動物無明顯增多，且培養(yǎng)液顏色、透明度無明顯變化，可在同一批號的血清養(yǎng)的細胞中發(fā)現類似現象。對細胞生長狀態(tài)不會有明顯影響，在細胞增殖旺盛之后會自然消失，除更換血清外無須特殊處理。建議如果細胞有可能是此種污染的話，可以增加細胞的種板密度，以提高細胞的生存率。
5）真菌：一般培養(yǎng)液清亮，不變色，鏡下有絲狀物，有些真菌開始很像死細胞碎片，只是它很多很多的小塊很清楚，象珊瑚狀，不象細胞碎片分不清，慢慢的會長出很細的黑色絲狀物。真菌生長的比較慢，不象細菌那么容易被發(fā)現，但是一旦發(fā)現有它的存在細胞就被污染了，也很難救活了。
6）支原體：黑色的，好象多為多形，培養(yǎng)液一般培養(yǎng)液一般會渾濁，原體感染，國內血清很多都沒有做支原體陰性檢測，而支原體是牛血清中zui常見的微生物之一。而且它不能用過濾的辦法除去。支原體感染細胞以后，細胞病變不很明顯，只是慢慢死去。用泰樂菌素，獸用支原體病的藥，但可用于細胞培養(yǎng)，無任何不良反應。Sigma公司的使用時用50ug/ml Tylosin培養(yǎng)液培養(yǎng)6天或連續(xù)傳兩代即可清除支原體污染。如果作為常用的抗生素的話, 建議用8ug/ml的濃度。
污染的可能原因：可能原因很多比如配液消毒問題、操作問題、環(huán)境問題等等關于培養(yǎng)基的無菌狀況，取培養(yǎng)基至培養(yǎng)瓶中（不加細胞），37度試培養(yǎng)一段時間后觀察。如果沒有細菌生長就是操作的問題。 也可以在培養(yǎng)基中事先加入雙抗（*和氨芐*）。但雙抗有時會影響細胞的狀態(tài)，所以在做轉染、檢測細胞某項指標前一定要撤去雙抗，以避免影響實驗結果。1、孵箱應定期用三氧機消毒或者 紫外光照射，并用酒精和新潔爾滅試擦孵箱同時孵箱內的水應是三蒸水2、超凈臺\取材\器材\培養(yǎng)液\培養(yǎng)瓶\操作等因素3、超凈臺的風機不能過大，風機到6-8格。否則也可能能致霉菌污染4、無菌室經甲醛熏蒸消毒后，可用同等量的氨水噴灑中和，約幾小時即可進入操作。
主要堿性蛋白（MBP）檢測試劑盒（化學發(fā)光免疫分析法） CLIA Kit for Major Basic Protein （MBP） Mus musculus （Mouse）
黑素瘤細胞黏附分子（MCAM）檢測試劑盒（化學發(fā)光免疫分析法） CLIA Kit for Melanoma Cell Adhesion Molecule （MCAM） Mus musculus （Mouse）
載脂蛋白A4（APOA4）檢測試劑盒（化學發(fā)光免疫分析法） CLIA Kit for Apolipoprotein A4 （APOA4） Homo sapiens （Human）
上皮型脂肪酸結合蛋白（FABP5）檢測試劑盒（化學發(fā)光免疫分析法） CLIA Kit for Fatty Acid Binding Protein 5, Epidermal （FABP5） Homo sapiens （Human）
整合素β6（ITGβ6）檢測試劑盒（化學發(fā)光免疫分析法） CLIA Kit for Integrin Beta 6 （ITGb6） Homo sapiens （Human）
膜聯蛋白A1（ANXA1）檢測試劑盒（化學發(fā)光免疫分析法） CLIA Kit for Annexin A1 （ANXA1） Homo sapiens （Human）
嘌呤能受體P2X7（P2RX7）檢測試劑盒（化學發(fā)光免疫分析法） CLIA Kit for Purinergic Receptor P2X, Ligand Gated Ion Channel 7 （P2RX7） Homo sapiens （Human）
絲聚蛋白（FLG）檢測試劑盒（化學發(fā)光免疫分析法） CLIA Kit for Filaggrin （FLG） Homo sapiens （Human）
HtrA*肽酶1（HTRA1）檢測試劑盒（化學發(fā)光免疫分析法） CLIA Kit for HtrA Serine Peptidase 1 （HTRA1） Homo sapiens （Human）
胰島素樣生長因子1（IGF1）檢測試劑盒（化學發(fā)光免疫分析法） CLIA Kit for Insulin Like Growth Factor 1 （IGF1） Bos taurus; Bovine （Cattle）
谷丙轉氨酶（ALT）檢測試劑盒（化學發(fā)光免疫分析法） CLIA Kit for Alanine Aminotransferase （ALT） Rattus norvegicus （Rat）
乳過氧化物酶（LPO）檢測試劑盒（化學發(fā)光免疫分析法） CLIA Kit for Lactoperoxidase （LPO） Bos taurus; Bovine （Cattle）
β-血小板球蛋白（βTG）檢測試劑盒（化學發(fā)光免疫分析法） CLIA Kit for Beta-Thromboglobulin （bTG） Rattus norvegicus （Rat）
紅細胞分化去核相關因子1（EDDF1）檢測試劑盒（化學發(fā)光免疫分析法） CLIA Kit for Erythroid Differentiation And Denucleation Factor 1 （EDDF1） Homo sapiens （Human）