肝癌亞力山大細胞 , PLC/PRF/5細胞5×10^5以上/1ml
對于大多數(shù)細胞研究工作者來說,肝癌亞力山大細胞 , PLC/PRF/5細胞污染那可是個糟糕的事情,也是比較容易出現(xiàn)的情況,我們?nèi)绾畏婪?,如何避免,是我們要學(xué)習和掌握的。
腎近曲管狀上皮細胞 5 × 105次方(1ml)
腎皮層上皮細胞 5 × 105次方(1ml)
腎上皮細胞 5 × 105次方(1ml)
輸尿管上皮細胞 5 × 105次方(1ml)
腎實質(zhì)細胞 5 × 105次方(1ml)
肝癌亞力山大細胞 , PLC/PRF/5細胞腎系膜細胞 5 × 105次方(1ml)
膀胱上皮細胞 5 × 105次方(1ml)
膀胱平滑肌細胞 5 × 105次方(1ml)
腎動脈內(nèi)皮細胞 5 × 105次方(1ml)
腎動脈平滑肌細胞 5 × 105次方(1ml)
腎成纖維細胞 5 × 105次方(1ml)
膀胱成纖維細胞 5 × 105次方(1ml)
尿道上皮細胞 5 × 105次方(1ml)
下面我們對細胞培養(yǎng)中常見的污染情況,做個總結(jié):
1)原蟲:培養(yǎng)液可輕微渾濁,顯微鏡下那些細小的點狀物數(shù)量非常多,輕微活動,細胞雖然可以生長但繁殖速度卻明顯減慢,而且細胞狀態(tài)不好,邊緣不清楚,細胞不透亮。他們與細胞可共生但會與細胞爭奪營養(yǎng)。這種共生是非常普遍的,但他們的數(shù)量小,細胞站優(yōu)勢所以不會影響到細胞的正常生長,只有當他們到達一定的數(shù)量時就會影響到細胞的生長,zui終形成惡性循環(huán)。
2)霉菌:培養(yǎng)液是清亮的,倒置顯微鏡下無雜質(zhì),37度孵箱培養(yǎng)2-3天,仍清亮,但出現(xiàn)絮狀雜質(zhì),鏡下可見呈細絲狀的團狀漂浮物,可看到明顯的菌絲,細胞仍可生長,但時間長之后,細胞的活力狀態(tài)變差,用硫酸銅溶液擦拭CO2孵箱內(nèi),再把水盤里也加上飽和量的硫酸銅。或者在培養(yǎng)箱的托盤加入飽和的消毒*高鹽液體,可以防止霉菌污染。CO2孵箱被霉菌污染后,可把所有細胞暫時轉(zhuǎn)移,采用過氧乙酸擦洗孵箱(包括隔板,箱壁)。并把過氧乙酸放置在孵箱內(nèi)一個小時,使其蒸汽彌漫。待過氧乙酸的氣味消散后,再移入細胞。孵箱應(yīng)定期清潔(2月左右),尤其在多雨的季節(jié)。其它培養(yǎng)箱清洗方法是:用84液擦洗-清水擦洗-75%酒精擦洗-紫外燈照。預(yù)防霉菌污染,可在培養(yǎng)基里加3u/ml的兩性霉素或*或*或雙抗;但細胞一旦污染,很難挽救,*或*或雙抗都于事無補,建議舍棄該污染細胞。,將環(huán)境*消毒,如果所有細胞都污染,可能是系統(tǒng)污染,檢查一下培養(yǎng)基和器材,如果只是個別污染,可能是操作問題,就要注意操作。
3)細菌:細菌在普通倒置顯微鏡下為黑色細沙狀,根據(jù)感染細菌的不同,可有不同的外形,培養(yǎng)液一般會渾濁變黃,對細胞生長影響明顯。仔細檢查一下器皿的滅菌情況,是否在高壓滅菌時放氣時間足夠,壓力足夠!尤其是和儲存培養(yǎng)液接觸的移液管等物品,連續(xù)兩次污染的話有可能造成儲存液污染,一定要注意!下次使用前檢查一下培養(yǎng)液是否存在渾濁的現(xiàn)象! 可在培養(yǎng)液中加相應(yīng)的抗生素處理
4)黑蛟蟲:可以穿透濾膜,也可以通過空氣傳播,低倍下為黑色點狀,高倍下可看見黑色的小蟲游來游去,培養(yǎng)液也是不渾的,一般不會太影響,細胞還是可以用的。常常是細胞生長狀態(tài)良好,且觀測到的運動物無明顯增多,且培養(yǎng)液顏色、透明度無明顯變化,可在同一批號的血清養(yǎng)的細胞中發(fā)現(xiàn)類似現(xiàn)象。對細胞生長狀態(tài)不會有明顯影響,在細胞增殖旺盛之后會自然消失,除更換血清外無須特殊處理。建議如果細胞有可能是此種污染的話,可以增加細胞的種板密度,以提高細胞的生存率。
5)真菌:一般培養(yǎng)液清亮,不變色,鏡下有絲狀物,有些真菌開始很像死細胞碎片,只是它很多很多的小塊很清楚,象珊瑚狀,不象細胞碎片分不清,慢慢的會長出很細的黑色絲狀物。真菌生長的比較慢,不象細菌那么容易被發(fā)現(xiàn),但是一旦發(fā)現(xiàn)有它的存在細胞就被污染了,也很難救活了。
6)支原體:黑色的,好象多為多形,培養(yǎng)液一般培養(yǎng)液一般會渾濁,原體感染,國內(nèi)血清很多都沒有做支原體陰性檢測,而支原體是牛血清中zui常見的微生物之一。而且它不能用過濾的辦法除去。支原體感染細胞以后,細胞病變不很明顯,只是慢慢死去。用泰樂菌素,獸用支原體病的藥,但可用于細胞培養(yǎng),無任何不良反應(yīng)。Sigma公司的使用時用50ug/ml Tylosin培養(yǎng)液培養(yǎng)6天或連續(xù)傳兩代即可清除支原體污染。如果作為常用的抗生素的話, 建議用8ug/ml的濃度。
污染的可能原因:可能原因很多比如配液消毒問題、操作問題、環(huán)境問題等等關(guān)于培養(yǎng)基的無菌狀況,取培養(yǎng)基至培養(yǎng)瓶中(不加細胞),37度試培養(yǎng)一段時間后觀察。如果沒有細菌生長就是操作的問題。 也可以在培養(yǎng)基中事先加入雙抗(*和氨芐*)。但雙抗有時會影響細胞的狀態(tài),所以在做轉(zhuǎn)染、檢測細胞某項指標前一定要撤去雙抗,以避免影響實驗結(jié)果。1、孵箱應(yīng)定期用三氧機消毒或者 紫外光照射,并用酒精和新潔爾滅試擦孵箱同時孵箱內(nèi)的水應(yīng)是三蒸水2、超凈臺\取材\器材\培養(yǎng)液\培養(yǎng)瓶\操作等因素3、超凈臺的風機不能過大,風機到6-8格。否則也可能能致霉菌污染4、無菌室經(jīng)甲醛熏蒸消毒后,可用同等量的氨水噴灑中和,約幾小時即可進入操作。
小腸平滑肌細胞 5 × 105次方(1ml)
結(jié)腸平滑肌細胞 5 × 105次方(1ml)
直結(jié)腸平滑肌細胞 5 × 105次方(1ml)
小腸粘膜上皮細胞 5 × 105次方(1ml)
結(jié)腸粘膜上皮細胞 5 × 105次方(1ml)
直腸粘膜上皮細胞 5 × 105次方(1ml)
肝內(nèi)膽管上皮細胞 5 × 105次方(1ml)
肝實質(zhì)細胞 5 × 105次方(1ml)
肝動脈內(nèi)皮細胞 5 × 105次方(1ml)
肝動脈平滑肌細胞 5 × 105次方(1ml)
肝星形細胞 5 × 105次方(1ml)
肝竇內(nèi)皮細胞 5 × 105次方(1ml)
胃粘膜上皮細胞 5 × 105次方(1ml)
腎小球內(nèi)皮細胞 5 × 105次方(1ml)