biotium-核酸染料-eb替代染料的產(chǎn)品特點(diǎn) :

 高靈敏度
GelRed 和 GelGreen 是目前市場(chǎng)中靈敏的凝膠核酸染料
 穩(wěn)定性
可以使用微波爐加熱，染料和預(yù)制凝膠可以在室溫下長期保存 
 更安全
艾姆斯氏試驗(yàn)結(jié)果表明，該染料的誘變性遠(yuǎn)小于溴化乙錠 （ EB ） 和SYBR 系列染料
 廣泛的適應(yīng)性
適用于預(yù)制凝膠法和凝膠電泳后染色法 
 染色過程簡單
與 EB 一樣，在預(yù)制膠和電泳過程中不必?fù)?dān)心染料降解；而電泳后染色過程也只需 30 分鐘且無需脫色或沖洗
 對(duì) DNA 和 RNA 的遷移影響小
對(duì)核酸遷移的影響小于 SYBR Green I
 與標(biāo)準(zhǔn)凝膠成像系統(tǒng)以及可見光激發(fā)的凝膠觀察裝置兼容
GelRed 可以替代 EB，無需任何操作上的改變 ； GelGreen 足以替代任意一種 SYBR 染料，操作方法一樣。

  由Biotium公司研發(fā)的GelRed和GelGreen 是兩種集高靈敏、低毒性和超穩(wěn)定于一身的熒光核酸染色試劑。其水溶染色劑，廢棄物可直接倒入下水道，而不會(huì)造成任何環(huán)境污染。

        目前大多數(shù)商業(yè)化的核酸染料（凝膠染色試劑）總是在安全性、穩(wěn)定性和靈敏性等方面不令人滿意。例如，雖然 EB(溴化乙啶）作為目前使用廣泛的核酸凝膠染色試劑，能夠在多數(shù)應(yīng)用中提供可以接受的靈敏度，但它是一種高誘變性的化學(xué)物質(zhì)，對(duì)人體潛在危害較大。而且EB染色后會(huì)產(chǎn)生較高的背景熒光信號(hào)。SYBR Green I 和 SYBR Gold 也是靈敏度較高的凝膠染色試劑。但 SYBR Green I 尤其是 SYBR Gold 在常用的微堿性電泳緩沖溶液或預(yù)制凝膠中會(huì)快速降解，穩(wěn)定性差導(dǎo)致染色效果不可靠。 SYBR safe 被認(rèn)為是較為安全的核酸染料 ，但它的染色效果還遠(yuǎn)不及 SYBR Green I 。

      常用的染色方法有預(yù)制凝膠染色（前染）和凝膠電泳后染色（后染），無論采用哪一種方法，GelRed 和 GelGreen，都能表現(xiàn)出較高的靈敏度。

        為配合302/312 nm UV 凝膠成像系統(tǒng)而設(shè)計(jì)的 GelRed ，按照Biotium公司創(chuàng)新的試驗(yàn)步驟（該試驗(yàn)步驟中使用稀釋的 NaCl 溶液替代傳統(tǒng)的 TBE 緩沖溶液），在凝膠電泳后染色法中優(yōu)于或者至少相當(dāng)于 SYBR Gold 。但與 SYBR Gold 不同， GelRed 在預(yù)制凝膠法中使用時(shí)仍然有較高的靈敏度，事實(shí)上GelRed 在檢測(cè)低濃度、微量 DNA 方面比 EB 表現(xiàn)出更高的靈敏度，尤其對(duì)小分子量的 DNA 檢測(cè)較為靈敏。

        如果您使用 488 nm 激光器或者LED可見光激成像儀，可以選擇GelGreen染料。 GelGreen 無論是在預(yù)制凝膠（前染）還是凝膠電泳后染色（后染）中都與 SYBR Green I 靈敏度相當(dāng)，但不存在后者的不穩(wěn)定性問題。

        實(shí)際上， GelRed 和 GelGreen ，尤其是 GelRed 更穩(wěn)定，可以長期在室溫下保存。當(dāng)這兩種染料稀釋在 TBE 或者類似的電泳緩沖溶液中時(shí)甚至可以使用微波爐加熱，便于采用常規(guī)方法制備預(yù)制凝膠。而含有染料的預(yù)制凝膠可以成批制備，并長期保存以備用。

        重要的是， GelRed 和 GelGreen 相比 EB 或 SYBR Green I 大大提高了安全性。 獨(dú)立的測(cè)試服務(wù)公司（ Litron Laboratories, Inc. ）進(jìn)行的標(biāo)準(zhǔn)艾姆斯氏測(cè)試結(jié)果表明， 在 18.5 μ g /mL （該濃度遠(yuǎn)高于推薦用于電泳后染色的 約 4 μ g/mL 的 3X 染色液 ）濃度下， GelGreen 沒有誘變性，而 GelRed 也僅在 S9 代謝活化時(shí)有微弱的誘變性。 GelRed 和 GelGreen 的特殊化學(xué)結(jié)構(gòu)使其難以穿透細(xì)胞膜進(jìn)入細(xì)胞，正是這一特性降低了染料的細(xì)胞毒性。相反， SYBR Green I 廣泛地用于活細(xì)胞線粒體和核 DNA 染色，這正是由于它能快速的被細(xì)胞吞入。

        Biotium公司還提供另一種適合聚丙烯酰胺凝膠的核酸染料: PAGE GelRed™ 和 PAGE GelGreen™

Biotium公司的 GelRed、 GelGreen 是安全的
圖示：在37°C下，分別使用1X SYBR Safe, GelRed 和 GelGreen 對(duì)HeLa 細(xì)胞進(jìn)行孵化30分鐘。行為細(xì)胞相位圖，第二行是在紫外激發(fā)環(huán)境下激發(fā)YBR Safe、GelGreen和GelRed，使其分別發(fā)出綠色和紅色熒光。結(jié)果顯示SYBR Safe染料已經(jīng)進(jìn)入細(xì)胞并將細(xì)胞內(nèi)的核酸染成亮綠色。而 GelRed 和 GelGreen 則因?yàn)椴荒艽┩讣?xì)胞膜而沒有進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)，則看不到任何熒光（備注：熒光染料的特點(diǎn)是只有與核酸結(jié)合后才能被激發(fā)并產(chǎn)生熒光）。以上足以證明GelRed和GelGreen是安全的。

圖. GelRed （紅色）GelGreen （綠色） 在 PBS 緩沖溶液中結(jié)合 dsDNA 后的激發(fā)和發(fā)射光譜。

圖：比較GelGreen、GelRed、SYBR Green 1 和EB 的誘變性。使用+1移沙門氏菌指標(biāo)結(jié)合S9的分?jǐn)?shù)存在的TA98。 ↓↓

 

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