追求高速和的分離功能
為提高實(shí)驗(yàn)室的效率,我們需要告訴的HPLC,而且也需要高速HPLC分析得到的分析數(shù)據(jù)必須像傳統(tǒng)HPLC系統(tǒng)中得出的數(shù)據(jù)一樣可靠。例如,在高速LC中進(jìn)行的1000個(gè)分析中,其分離度必須保持一個(gè)很高的水平;對(duì)于小體積樣品進(jìn)樣,保留時(shí)間和峰面積重復(fù)性需保持到一個(gè)較好的水平;而且能夠限度地減低零部件的替換并保持儀器良好的穩(wěn)定性。
我們目前已可不依賴高壓運(yùn)行的進(jìn)行良好的高速分離,同時(shí)有能提供之前的快速LC系統(tǒng)未能提供的高精度及可擴(kuò)展性。
特點(diǎn)一:
超快的速度及高分離效能
Prominence UFLC系統(tǒng)和新型的反向色譜柱的結(jié)合與傳統(tǒng)的HPLC系統(tǒng)相比,速率是其十倍。而且高速的樣品進(jìn)樣機(jī)制可顯著降低總的分析循環(huán)時(shí)間。Prominence UFLC的分離度是傳統(tǒng)HPLC的三倍,因此在傳統(tǒng)HPLC中不易分離的樣品在新型的系統(tǒng)中充分分離。
毋庸置疑的高精確度—重復(fù)性及速率
高速LC中的高精確度的和自動(dòng)進(jìn)樣器可改善小體積樣品的重復(fù)率,在長(zhǎng)期穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)中可取得并保持高重復(fù)性。Prominence UFLC擁有超高基本性能。
高速及高分離柱Shim-pack XR-ODS
基于分離、耐久因素以及應(yīng)用壓力的考量,開發(fā)出Shim-pack XR-ODS柱。
LC工作站 Labsolutions
島津Labsolution軟件提供高通量、儀器控制、多元數(shù)據(jù)處理以及法規(guī)應(yīng)對(duì)等功能,可提供一個(gè)直觀的、可操作性強(qiáng)的運(yùn)行環(huán)境。
超快速及高分離性能
液相色譜分離速率通過應(yīng)用超細(xì)粒徑的分析柱以及增加流動(dòng)相的流速進(jìn)而得到增加。當(dāng)實(shí)際檢測(cè)時(shí)間減少時(shí),分離循環(huán)時(shí)間所需的其他因素變的極為重要:例如:自動(dòng)進(jìn)樣器進(jìn)樣所需時(shí)間,梯度延遲時(shí)間以及系統(tǒng)調(diào)節(jié)時(shí)間。
Prominence UFLC可提供對(duì)于這些因素的解決方式,可大大降低總分析時(shí)間,由此最終可提高實(shí)驗(yàn)室的效率。
高速LC分析—10倍于傳統(tǒng)LC
以下是對(duì)一個(gè)新的反相柱—配置了Shim-pack XR-ODS的Prominence UFLC以及配置傳統(tǒng)柱(150mmL. x 4.6mm i.d., 5um)的傳統(tǒng)LC的比較。在傳統(tǒng)LC中,分離度為1.2的苯并熒異構(gòu)體(峰7與8)的洗脫時(shí)間為35分鐘,而在配置了Shim-pack XR-ODS的Prominence UFLC中的洗脫時(shí)間則為3.5分鐘,同時(shí)還可保持同樣的優(yōu)質(zhì)分辨率。苯并苝(峰9)的保留時(shí)間從傳統(tǒng)中的50.4分鐘減少到另一個(gè)中的5.07分鐘,同時(shí)其理論板數(shù)有輕微變化,從10,600 到 11,900。
Prominence UFLC的分析時(shí)間減少至傳統(tǒng)LC的1/10,同時(shí)還保持了分離效率。
(根據(jù)分離環(huán)境不同,分析時(shí)間的減少也會(huì)有所不同。)
總分析循環(huán)時(shí)間減少
在利用高速柱進(jìn)行分析,分析時(shí)間減少時(shí),其他影響分析周期的因素變得十分重要,比如自動(dòng)進(jìn)樣器進(jìn)樣所需時(shí)間,梯度延遲時(shí)間以及系統(tǒng)調(diào)整時(shí)間。如果自動(dòng)進(jìn)樣樣器進(jìn)樣時(shí)間比較緩慢,則它將占據(jù)了總分析循環(huán)時(shí)間的大部分時(shí)長(zhǎng)。Prominence UFLC內(nèi)配置了一個(gè)快速的自動(dòng)進(jìn)樣器(10秒鐘10uL進(jìn)樣),提供了極快的分析周期。
就總分析時(shí)間的例子進(jìn)行的連續(xù)三個(gè)周期的快速分析對(duì)比
(假定分析時(shí)間:30秒;其他快速LC自動(dòng)進(jìn)樣器進(jìn)樣活動(dòng)時(shí)間:30秒)
一系列自動(dòng)特征:諸如自動(dòng)排液,通過手動(dòng)操作縮短啟動(dòng)時(shí)間。在梯度操作時(shí)減少色譜柱入口濃度變化的延遲時(shí)間;系統(tǒng)調(diào)控時(shí)間的初始化,UFLC內(nèi)更小的系統(tǒng)體積的應(yīng)用。
超快速梯度分析
以上的Prominence UFLC展示了優(yōu)良的梯度分析。下圖所示數(shù)據(jù)為一個(gè)分析周期的30秒左右的高速梯度分析。
Prominence UFLC在未應(yīng)用高壓的情況下,通過優(yōu)化系統(tǒng)及柱體效率提供超高速和高分離。
柱體特征:Shim-pack XR-ODS (30mmL. x 3mm i.d.) 溫度:80°C, 流動(dòng)相:水/乙腈梯度洗脫液
流速:3.0mL/min
檢測(cè)波長(zhǎng):245nm
樣品:
高分離分析—比一般分離高出三倍
盡管Shim-pack XR-ODS擁有較小的粒徑填料,但壓降(備壓)較小,而且可以使用長(zhǎng)柱子。因此,在未使分析時(shí)間變長(zhǎng)的基礎(chǔ)上,可取得高分離的具有高理論板數(shù)色譜圖,這在以前是從未實(shí)現(xiàn)過的。下圖的色譜圖對(duì)比了以應(yīng)用配置了Shim-pack XR-ODS的Prominence UFLC和傳統(tǒng)LC分別進(jìn)行的苯并熒蒽異構(gòu)體的分離。Prominence UFLC可提供較短的分析時(shí)間以及超高的分離率(Rs),同時(shí)3倍的理論板數(shù)。
特點(diǎn)二:
高準(zhǔn)確度,穩(wěn)定性及耐久性
*重復(fù)性是HPLC的重要性能,此性能并不以犧牲高速率為代價(jià)。Prominence UFLC配置了一個(gè)成熟的程溶劑輸送組件(流速分辨率為3.7nL/分., 10uL/沖程),擁有改良的硬件由此可帶來超快的梯度。Prominence自動(dòng)進(jìn)樣器,擁有高度密封的測(cè)量設(shè)備和高精密閥,對(duì)于快速LC可實(shí)現(xiàn)高重復(fù)性。
小體積進(jìn)樣和超快速分析的重復(fù)性
對(duì)普通超快速LC來說,通常小體積進(jìn)樣的重復(fù)性不太好。下圖和表為Prominence UFLC就2uL進(jìn)樣量的色譜圖,一分鐘的梯度分析重復(fù)性RSD小于0.2%。
柱體特征:Shim-pack XR-ODS (30mmL. x 3mm i.d.) 溫度:80°C, 流動(dòng)相:水/乙腈梯度洗脫液
流速:1.5mL/分
檢測(cè)波長(zhǎng):245nm
樣品:
峰 | 保留時(shí)間 | 峰面積 | |||
平均 | %RSD | 平均 | %RSD | ||
1. | 苯乙酮 | 0.377 | 0.076 | 49018 | 0.193 |
2. | 丙酮 | 0.493 | 0.072 | 47260 | 0.167 |
3. | 苯丁酮 | 0.587 | 0.070 | 49199 | 0.055 |
4. | 苯戊酮 | 0.677 | 0.065 | 45277 | 0.138 |
5. | 苯己酮 | 0.763 | 0.082 | 46613 | 0.186 |
6. | 苯庚酮 | 0.842 | 0.087 | 43975 | 0.205 |
7. | 辛基酰苯 | 0.914 | 0.080 | 48978 | 0.200 |
(2uL injection, n=6)
對(duì)于儀器控制的精確度,是基于分析驗(yàn)證過程和質(zhì)量控制測(cè)試要求下進(jìn)行的。同時(shí)為了減少系統(tǒng)故障對(duì)分析的影響,重要的控制因素是自動(dòng)進(jìn)樣器上的高壓閥。Prominence UFLC應(yīng)用島津自身研發(fā)的高精度的6通閥,在100,000例耐久測(cè)試中可達(dá)到小于0.1%或極小的面積重復(fù)性(RSD)。
除此之外,LC-MS檢測(cè)中,樣品殘留量受到極大的關(guān)注。Prominence UFLC通過抑制樣品吸附,成功的實(shí)現(xiàn)極小殘留。
島津6通閥耐久性實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)
在完成100,000次循環(huán)耐久測(cè)試后的樣品重復(fù)性。
峰 | 保留時(shí)間 | 峰面積 | |||
平均值 | %RSD | 平均值 | %RSD | ||
1. | 苯乙酮 | 0.916 | 0.089 | 312670 | 0.059 |
2. | 丙酮 | 1.398 | 0.058 | 315739 | 0.045 |
3. | 苯丁酮 | 2.111 | 0.030 | 336428 | 0.063 |
4. | 苯戊酮 | 3.341 | 0.031 | 296609 | 0.040 |
(5uL injection, n=6)
Shim-pack XR-ODS
Shim-pack XR-ODS使用2.2um粒徑填料,極為巧秒地平衡著分離效率和壓力。
Shim-pack XR-ODS柱可以使得高速和高分離分析在低于30MPa下實(shí)現(xiàn),它是島津在常規(guī)柱壓條件下實(shí)現(xiàn)高速和高分離的解決方案。
每一個(gè)Shim-pack XR-ODS柱擁有三個(gè)質(zhì)量證書。島津嚴(yán)格控制著每一個(gè)色譜柱的質(zhì)量,依據(jù)證書標(biāo)準(zhǔn)生產(chǎn)確保色譜柱的一致性。
Shim-pack XR-ODS規(guī)格
(mm)內(nèi)徑 | (mm)長(zhǎng)度 |
2.0 | 30 / 50 / 75 /100 |
3.0 | 30 / 50 / 75 /100 |
4.6 | 30 / 50 / 75 /100 |
對(duì)于常規(guī)的分析,建議使用3.0mm i.d. 50mm長(zhǎng)的色譜柱。2.0mm的色譜柱常用于半微量高速分析。
PTC氨基酸的應(yīng)用
柱前衍生方式用于氨基酸的分析--通過使用PITC(苯基異硫氰酸)試劑使氨基酸衍生成PTC(苯氨基硫代甲酰基),并通過UV檢測(cè)器檢測(cè)。下圖為PTC衍生17種種氨基酸中的在4分鐘內(nèi)分離分析圖。
柱:Shim-pack XR-ODS (75mmL. x 3mm i.d.)
溫度:40℃
流動(dòng)相:磷酸鹽緩沖液/乙腈溶液,梯度洗脫
流速:1.2 mL/min
檢測(cè)波長(zhǎng):254nm
黃豆中大豆異黃酮的分析
大豆異黃酮為黃豆中富含的物質(zhì),尤其是大豆胚芽中。由于其類似雌激素的作用,大豆異黃酮引起了廣泛的關(guān)注。通過梯度洗脫可分析黃豆中的大豆異黃酮。
柱:Shim-pack XR-ODS (75mmL. x 3mm i.d.)
溫度:40℃
流動(dòng)相:甲酸水溶液/甲酸乙腈溶液,梯度洗脫
流速:1.2 mL/min
檢測(cè)波長(zhǎng):275nm