戴安高效液相色譜儀的正確使用指南可以歸納為以下幾個步驟：
一、開機前準(zhǔn)備
1.溶劑和樣品處理：
使用HPLC前，須采用專用過濾系統(tǒng)對溶劑和樣品進(jìn)行過濾和脫氣。所用溶劑等級應(yīng)為色譜純，水應(yīng)為超純水。
密封圈清洗溶液為1:9甲醇/水，每次使用前更換。
樣品必須經(jīng)過0.45μm的濾膜過濾，流動相也必須經(jīng)過0.45μm過濾（色譜純除外）并脫氣。
2.檢查儀器狀態(tài)：
確保儀器各部件連接緊密，無松動或漏液現(xiàn)象。
檢查蠕動泵清洗瓶中的甲醇是否充足，如不足需及時更換。
二、開機與聯(lián)機
1.開機順序：
按下穩(wěn)壓電源工作電源開關(guān)鍵至“ON”狀態(tài)。
依次接通P680型輸液泵、自動進(jìn)樣器（如ASI-100）、柱溫箱、檢測器（如紫外檢測器）、電腦。
先運行變色龍工作站，再打開儀器電源，并進(jìn)行聯(lián)機。
2.儀器初始化：
確認(rèn)各模塊的“connected”圖標(biāo)均為綠色，表示儀器與工作站已正確連接。
根據(jù)需要設(shè)置泵的最高壓力、低壓力和流量。
三、儀器設(shè)置與平衡
1.設(shè)置溶劑混合比例和流速：
在工作站中設(shè)置溶劑混合比例和流速，自動運行高壓泵。
2.排氣泡與清洗：
擰松泵右側(cè)的快速清洗閥，按下泵前面板右下方的“Purge”鍵，排泵內(nèi)氣泡。待氣泡排完后，擰緊快速清洗閥。
如有需要，可用超純水清洗進(jìn)樣閥等部件。
3.柱平衡：
在設(shè)定條件下進(jìn)行柱平衡，時間通常為30~60分鐘。
4.檢測器設(shè)置：
開啟氘燈開關(guān)進(jìn)行預(yù)熱，10分鐘后選擇波長。
根據(jù)需要設(shè)置采樣頻率、波長和波段寬度等參數(shù)。
四、建立分析方法與序列
1.建立程序文件：
在工作站中依次點擊File/New，選中“Program File”，進(jìn)入程序編輯向?qū)Ы缑妗?/div>
設(shè)置泵的工作方式（如等度分析、二元梯度分析、多元梯度分析等）、流動相通道、高/低壓極限和流速等參數(shù)。
設(shè)置自動進(jìn)樣器的參數(shù)、通道的選擇、采集時間段、紫外信號的具體設(shè)置等。
瀏覽程序參數(shù)，編輯、修改不適合處，最后單擊工具欄中的“保存”按鈕保存程序文件。
2.建立方法文件：
依次點擊File/New，選中“Method File”，進(jìn)入方法編輯向?qū)Ы缑妗?/div>
根據(jù)需要設(shè)置方法文件的參數(shù)，保存方法文件。通常將方法文件和程序文件放在同一個文件夾里。
3.建立進(jìn)樣序列：
依次點擊File/New，選中“Sequence(using Wizard)”，進(jìn)入序列編輯向?qū)Ы缑妗?/div>
設(shè)置樣品名稱、數(shù)量、進(jìn)樣次數(shù)、進(jìn)樣體積等參數(shù)。
如需要，可采用間隔進(jìn)樣的方式進(jìn)樣。
設(shè)置好后，將待測樣品溶液的信息以列表的方式顯示出來，并保存序列文件。
五、進(jìn)樣與分析
1.進(jìn)樣操作：
采用HPLC專用進(jìn)樣針進(jìn)樣，進(jìn)樣體積應(yīng)為定量環(huán)體積的2~4倍。
進(jìn)樣時先將進(jìn)樣針插入進(jìn)樣器，再右旋進(jìn)樣閥門將樣品全部打入，再將進(jìn)樣閥左旋回原位。等5~10秒后將進(jìn)樣針抽出。
2.分析過程：
點擊工作站中的“Start/stop Batch”鍵開始進(jìn)樣分析。儀器將會自動根據(jù)軟件中設(shè)定的先后順序開始進(jìn)樣，直至所有的樣品全部進(jìn)樣。
如軟件中相應(yīng)的位置上并沒有放置樣品瓶，儀器將會自動識別并跳過該樣品進(jìn)下一個樣品。
樣品分析結(jié)束后自動保存色譜圖。
六、數(shù)據(jù)處理與關(guān)機
1.數(shù)據(jù)處理：
在工作站中選擇需要處理數(shù)據(jù)的序列，點擊定量方法并選擇方法文件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理。
根據(jù)需要設(shè)置積分參數(shù)、定量方法等，進(jìn)行數(shù)據(jù)處理和結(jié)果分析。
2.關(guān)機操作：
先關(guān)閉氘燈電源。
用超純水或甲醇等溶劑清洗儀器，包括進(jìn)樣閥、色譜柱等部件。
清洗完后先停流，再關(guān)閉高壓泵和儀器電源。
如分析過程中使用緩沖液作為溶劑，則先用超純水沖洗色譜柱約30分鐘，再用甲醇沖洗色譜柱約30~50分鐘；若只用有機溶劑和水作為溶劑，則直接用甲醇沖洗色譜柱40~70分鐘。沖洗色譜柱時溶劑流量均為1ml/min。
七、注意事項
1.日常維護(hù)：定期對儀器進(jìn)行清潔和維護(hù)，包括清洗進(jìn)樣閥、更換蠕動泵清洗瓶中的甲醇等。
2.安全操作：在操作過程中注意個人防護(hù)和安全操作規(guī)范，避免溶劑濺出或觸電等危險情況發(fā)生。
3.儀器校準(zhǔn)：定期對儀器進(jìn)行校準(zhǔn)和驗證，確保儀器性能和結(jié)果的準(zhǔn)確性。
通過以上步驟的正確操作和使用指南，可以確保戴安高效液相色譜儀的正常運行和準(zhǔn)確分析。
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