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商品介紹
測(cè)定意義 LDH(EC 1.1.1.27)廣泛存在于動(dòng)物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中,是糖酵解途徑的末端酶,催化丙酮酸與乳酸之間的可逆反應(yīng),伴隨著NAD+/NADH之間互變。 測(cè)定原理: LDH催化NAD+氧化乳酸生成丙酮酸,丙酮酸進(jìn)一步與2, 4 - 二硝基苯肼作用生成丙酮酸二硝基苯腙,在堿性溶液中顯棕紅色,顏色深淺與丙酮酸濃度成正比。 需自備的儀器和用品: 可見(jiàn)分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、恒溫水浴鍋、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研缽、冰和蒸餾水。 |
試劑的組成和配制:
提取液:液體 100mL×1 瓶,4℃保存;
試劑一:液體 5mL×1 瓶,4℃保存;
試劑二:液體 200μL×1 支,4℃保存;
試劑三:液體 4mL×1 瓶,4℃保存;
試劑四:粉劑×2 瓶,4℃保存。
所需的儀器和用品:
可見(jiàn)分光光度計(jì)、1mL 玻璃比色皿(光徑 1cm)、低溫離心機(jī)、移液器、研缽、冰和蒸餾水
四、超氧化物歧化酶(SOD)的測(cè)定:
建議正式實(shí)驗(yàn)前選取 2 個(gè)樣本做預(yù)測(cè)定,了解本批樣品情況,熟悉實(shí)驗(yàn)流程,避免實(shí)驗(yàn)
樣本和試劑浪費(fèi)!
1、樣本制備
① 組織樣本:
取約 0.1g 組織(水分充足的樣本可取 0.25g),加入 1mL 提取液,在 4oC 或冰浴進(jìn)行
勻漿(或使用各類(lèi)常見(jiàn)勻漿器)。4oC×12000rpm 離心 10min,取上清作為待測(cè)液。
【注】:若增加樣本量,可按照組織質(zhì)量(g):提取液體積(mL)為 1:5~10 的比例進(jìn)行提取
② 細(xì)菌/細(xì)胞樣本:
先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi),離心后棄上清;取約 500 萬(wàn)細(xì)菌或細(xì)胞加入 1mL
提取液,超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞(冰浴,功率 200W,超聲 3s,間隔 10s,重復(fù) 30 次);
12000rpm 4℃離心 10min,取上清,置冰上待測(cè)。
【注】:若增加樣本量,可按照細(xì)菌/細(xì)胞數(shù)量(10
4):提取液(mL)為 500~1000:1 的比例進(jìn)行提取。 ③ 液體樣本:直接檢測(cè);若渾濁,離心后取上清檢測(cè)。
注意事項(xiàng):
1、試劑二為酶,不可冷凍,使用時(shí)在冰上放置。
2、對(duì)照管只需要做一管。
3、若對(duì)照管吸光值大于 1,建議將試劑二用蒸餾水稀釋 7 倍后使用(10μL 試劑二原液+60μL蒸餾水)。
4、SOD為什么有的樣本測(cè)定管大于對(duì)照管,對(duì)照管數(shù)值在什么范圍?對(duì)照管的范圍是 0.4-1。對(duì)照管吸光值過(guò)低可能是(1)試劑二或試劑四沒(méi)有現(xiàn)配現(xiàn)用;
(2)沒(méi)有按順序加試劑;(3)反應(yīng)時(shí)間不夠,可以延長(zhǎng)反應(yīng)時(shí)間(反應(yīng)時(shí)間 30min可以延長(zhǎng)到 40min)。對(duì)照管吸光值過(guò)高可能是試劑二未按操作說(shuō)明書(shū)稀釋相應(yīng)倍數(shù)。
若出現(xiàn)測(cè)定管大于對(duì)照管,可能是樣本中雜質(zhì)的影響太大,為了降低雜質(zhì)的影響一般
將樣本提取上清液用蒸餾水或提取液稀釋 10倍后再測(cè),通??梢允箿y(cè)定正常。
Rhizobium galegaeJOE因子檢測(cè)試劑盒
Rhizobium galegaeCD47蛋白檢測(cè)試劑盒
Rhizobium galegae帶3蛋白檢測(cè)試劑盒
Rhizobium galegae抗角蛋白抗體檢測(cè)試劑盒
Rhizobium galegae促泌素檢測(cè)試劑盒
Rhizobium galegae硫代嘌呤S-甲基轉(zhuǎn)移檢測(cè)試劑盒
Rhizobium galegae早期分泌抗原靶6檢測(cè)試劑盒
Rhizobium galegae血管性血友病因子裂解檢測(cè)試劑盒
核酸提取及純化試劑盒草 Standard for GC,≥99.6% 大鼠金屬轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白1(MTP1)免疫試劑盒DNA復(fù)制抑制因子抗體HPR 結(jié)合珠蛋白相關(guān)蛋白抗體
草 ≥99.998% (metals basis)大鼠金屬硫蛋白2(MT-2)免疫試劑盒G蛋白α抑制蛋白2抗體HPL/PL 人胎盤(pán)泌素抗體
草 ≥99.9999% (metals basis)大鼠金屬硫蛋白(MT)免疫試劑盒G蛋白偶聯(lián)受體γ4抗體HPGD/PGDH1/Prostaglandin dehydrogenase 1 前列腺素脫氫1抗體
4-溴磺酰 98%大鼠解整合素樣金屬蛋白9(ADAM9)免疫試劑盒G氨丁B型受體2抗體HPCL2 植烷酰輔A羥化2抗體
3-環(huán)己 99%大鼠解整合素樣金屬蛋白8(ADAM8)免疫試劑盒葡萄糖調(diào)節(jié)蛋白78抗體(熱休克蛋白70蛋白5)HP1 gamma 異染色質(zhì)蛋白1-γ抗體
上光油鐵罐(直徑127mm*250mm)大鼠解整合素樣金屬蛋白19(ADAM19)免疫試劑盒葡萄糖調(diào)節(jié)蛋白94抗體HP1 alpha 異染色質(zhì)蛋白1-α(HP1α)抗體
上光油鐵罐 直徑73mm*高度150mm大鼠睫狀神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子(CNTF)免疫試劑盒糖原合激-3β抗體HOXD10 同源盒蛋白HOXD10抗體
天然黃蜂蠟 醫(yī)藥級(jí)(CP2005版)大鼠結(jié)合珠蛋白/觸珠蛋白(Hpt/HP)免疫試劑盒糖原合激-3β抗體HOXC9 同源盒蛋白HOXC9抗體
蜂蠟 46-60°C大鼠結(jié)締組織生長(zhǎng)因子(CTGF)免疫試劑盒三鳥(niǎo)苷環(huán)水解抗體HOXc8 HOXc8抗體
蜂蠟 62-67°C大鼠結(jié)蛋白(Des)免疫試劑盒促代謝型谷氨受體5抗體HOXB8 同源盒蛋白B8抗體
天然白蜂蠟 醫(yī)藥級(jí)(CP2005版)大鼠窖蛋白Caveolin1(Cav-1)免疫試劑盒生長(zhǎng)調(diào)節(jié)致癌因-1抗體GROaHOXB5 同源盒蛋白HOXB5抗體
3,5-二溴 98%大鼠角化生長(zhǎng)因子(KGF)免疫試劑盒G蛋白偶合受體激1抗體HOXB4 HOXB4抗體
5--4,6-二羥嘧 97%大鼠角化內(nèi)分泌因子(KAF)/雙調(diào)蛋白(AR)免疫試劑盒促胃泌素釋放肽抗體HOXB2 同源盒蛋白B2抗體
4,6-二-5-嘧 98%大鼠膠質(zhì)系來(lái)源的神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子(GDNF)免疫試劑盒化G蛋白通路抑制蛋白1抗體HOXA9 同源盒蛋白HOXA9抗體
二聚環(huán)戊二烯 97%,Endo大鼠膠原吡交聯(lián)(PYD)免疫試劑盒腦糖原化抗體HOXA5 同源異型盒因HOXA5蛋白抗體
測(cè)定步驟:
1、 酶標(biāo)儀預(yù)熱30min以上,調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至450nm。
2、 試劑三的稀釋?zhuān)簩⒃噭┤谜麴s水稀釋50倍,用多少配多少。(試劑三和蒸餾水1:49稀釋。
3、 工作液配制:在試劑一加入100μl試劑二,充分混勻。配好的試劑4℃避光可保存一周。(若一次性測(cè)定樣本較少,可按照實(shí)際用量將試劑一和試劑二按照20ml:0.1ml的比例混勻配制)
4、 將一瓶試劑四用5ml蒸餾水溶解(溶解后一周內(nèi)用完)。
5、 樣本測(cè)定(在96孔板中依次加入下列試劑)
選擇抗凝的注意點(diǎn):
①、每一份樣本所加的抗凝劑的量要一致,同時(shí)所取的全血的量也要盡量一致;
②、收集抗凝全血后一定要輕輕顛倒,充分抗凝,防止部分血液未接觸到抗凝劑而導(dǎo)致凝固;
③、抗凝全血收集的血漿相對(duì)較多(1ml抗凝全血能分離出0.4~0.5ml血漿);
④、抗凝收集的血漿冷凍保存后,解凍時(shí)可能會(huì)出現(xiàn)絮狀渾濁,如有則需要離心去掉渾濁后用于測(cè)定。