空氣食品接觸面微生物的檢驗方法與標準！

空氣食品接觸面微生物的檢驗方法與標準！

1.目的

檢測生產(chǎn)車間空氣、操作人員手部、與食品有直接接觸面的機械設備的微生物指標，生產(chǎn)區(qū)域環(huán)境當中病原微生物的監(jiān)控，達到規(guī)定標準，以控制食品成品的質量。

2.參照標準

中華人民共和國國家標準《一次性使用衛(wèi)生用品衛(wèi)生標準》GB15979－2002、《HACCP原理與實施》、中華人民共和國國家標準《公告場所空氣微生物檢驗方法細菌總數(shù)測定》GB/T 18201.1-2013、*二000四年《出入食品微生物檢驗培訓教材》中《出入食品生產(chǎn)廠衛(wèi)生細菌檢驗方法》、日本東京冷凍食品檢驗方法。

3.采樣與檢測方法

3.1空氣的采樣與測試方法：

3.1.1樣品采集：

(1)取樣頻率：

a)車間轉換不同衛(wèi)生要求的產(chǎn)品時，在加工前進行采樣，以便了解車間衛(wèi)生清掃消毒情況。

b)全廠統(tǒng)一放長假后，車間生產(chǎn)前，進行采樣。

c)產(chǎn)品檢驗結果超內控標準時，應及時對車間進行采樣，如有檢驗不合格點，整改后再進行采樣檢驗。

d)實驗性新產(chǎn)品，按客戶規(guī)定頻率采樣檢驗。

e)正常生產(chǎn)狀態(tài)的采樣，每周一次。

（2）采樣方法

在動態(tài)下進行，室內面積不超過30m2，在對角線上設里、中、外三點，里、外點位置距墻1m；室內面積超過30m2，設東、西、南、北、中五點，周圍4點距墻1m。采樣時，將含平板計數(shù)瓊脂培養(yǎng)基的平板(直徑9cm)置采樣點(約桌面高度)，并避開空調、門窗等空氣流通處，打開平皿蓋，使平板在空氣中暴露5 min。采樣后必須盡快對樣品進行相應指標的檢測，送檢時間不得超過4h，若樣品保存于0～4℃條件時，送檢時間不得超過24h。

3.1.2菌落培養(yǎng)：

（1）在采樣前將準備好的平板計數(shù)瓊脂培養(yǎng)基平板置37℃±1℃ 培養(yǎng)24 h，取出檢查有無污染，將污染培養(yǎng)基剔除。

（2）將已采集樣品的培養(yǎng)基在4h內送實驗室，細菌總數(shù)于37℃±1℃培養(yǎng)48h觀察結果，計數(shù)平板上細菌菌落數(shù)。

（3）菌落計算：

a) 記錄平均菌落數(shù)，用“個/皿”來報告結果。用肉眼直接計數(shù)，標記或在菌落計數(shù)器上點計，然后用5～10倍放大鏡檢查，不可遺漏。

b) 若培養(yǎng)皿上有2個或2個以上的菌落重疊，可分辨時仍以2個或2個以上菌落計數(shù)。

3.2工作臺（機械器具）表面與工人手表面采樣與測試方法：

3.2.1樣品采集：

(1)取樣頻率：

a)車間轉換不同衛(wèi)生要求的產(chǎn)品時，在加工前進行擦拭檢驗，以便了解車間衛(wèi)生清掃消毒情況。

b)全廠統(tǒng)一放長假后，車間生產(chǎn)前，進行全面擦拭檢驗。

c)產(chǎn)品檢驗結果超內控標準時，應及時對車間可疑處進行擦拭，如有檢驗不合格點，整改后再進行擦拭檢驗。

d)實驗新產(chǎn)品，按客戶規(guī)定擦拭頻率擦拭檢驗。

e)對工作表面消毒產(chǎn)生懷疑時，進行擦拭檢驗。

f)正常生產(chǎn)狀態(tài)的擦拭，每周一次。

（2） 采樣方法：

a) 工作臺（機械器具）：用浸有滅菌生理鹽水的棉簽在被檢物體表面（取與食品直接接觸或有一定影響的表面）取25cm2 的面積，在其內涂抹10次，然后剪去手接觸部分棉棒，將棉簽放入含10mL滅菌生理鹽水的采樣管內送檢。

b) 工人手：被檢人五指并攏，用浸濕生理鹽水的棉簽在右手指曲面，從指尖到指端來回涂擦10次，然后剪去手接觸部分棉棒，將棉簽放入含10mL滅菌生理鹽水的采樣管內送檢。

（3）采樣注意事項：

擦拭時棉簽要隨時轉動，保證擦拭的準確性。對每個擦拭點應詳細記錄所在分場的具體位置、擦拭時間及所擦拭環(huán)節(jié)的消毒時間。

3.2.2 細菌·大腸菌群的檢測培養(yǎng):

樣液稀釋：將放有棉棒的試管充分振搖。此液為1：10稀釋液。如污染嚴重，可十倍遞增稀釋，吸取1ml 1：10樣液加9ml無菌生理鹽水中，混勻，此液為1：100稀釋液。

3.2.2.1 細菌總數(shù)：

（1）以無菌操作，選擇1～2個稀釋度各取1ml樣液分別注入到無菌平皿內，每個稀釋度做兩個平皿（平行樣），將已融化冷至45℃左右的平板計數(shù)瓊脂培養(yǎng)基傾入平皿，每皿約15~20ml，充分混合。

（2）待瓊脂凝固后，將平皿翻轉，置36℃±1℃ 培養(yǎng)48 h后計數(shù)。

（3）結果報告：報告每25cm2食品接觸面中或每只手的菌落數(shù)。

3.2.2.2大腸菌群：

（1）平板法：

a) 以無菌操作，選擇1～2個稀釋度各取1ml樣液分別注入到無菌平皿內，每個稀釋度做兩個平皿（平行樣），將VRBA培養(yǎng)基傾入平皿，每皿約15~20ml，充分混合。待瓊脂凝固后,再覆蓋一層培養(yǎng)基，約3-5 ml。

b) 待瓊脂凝固后，將平皿翻轉，置36℃±1℃ 培養(yǎng)24h后計數(shù)。

c)證實實驗：從VRBA平板上挑取典型和可疑菌落接種BGLB進行證實實驗。

d)結果計算：經(jīng)后證實為大腸菌群陽性的試管比例乘以平板上出現(xiàn)的典型和可疑菌落個數(shù)乘以稀釋倍數(shù)得出。

e）結果報告：報告每25cm2食品接觸面中或每只手的菌落數(shù)。

（2）MPN法：

a)以無菌操作，選擇3個稀釋度各取1ml樣液分別接種到LST肉湯培養(yǎng)基中，每個稀釋度接種三管。

b) 置LST肉湯管于36℃±1℃培養(yǎng)48±2h。記錄所有LST肉湯管的產(chǎn)氣管數(shù)。

c) 選擇產(chǎn)氣渾濁的發(fā)酵管接種BGLB進行復發(fā)酵實驗。

d）結果報告：按BGLB肉湯管產(chǎn)氣管數(shù)，查MPN表報告每25cm2食品接觸面中或每只手的大腸菌群值。

3.2.3 *檢測

（1）定性檢測

a)取1ml 稀釋液注入滅菌的平皿內，傾注15-20ml的B-P培養(yǎng)基，（或是吸取0.1稀釋液，用L棒涂布于表面干燥的B-P瓊脂平板），放進36±1℃的恒溫箱內培養(yǎng)48±2小時。

b)從每個平板上至少挑取1個可疑*的菌落作血漿凝固酶實驗。

c)結果報告：B-P瓊脂平板的可疑菌落作血漿凝固酶實驗為陽性，即報告手（工器具）上有*存在。

（2）定量檢測

a)以無菌操作，選擇3個稀釋度各取1ml樣液分別接種到含10﹪胰蛋白胨大豆肉湯培養(yǎng)基中，每個稀釋度接種三管。

b)置肉湯管于36±1℃的恒溫箱內培養(yǎng)48小時。劃線接種于表面干燥的B-P瓊脂平板，置36℃±1℃ 培養(yǎng)45～48小時。

c)從B-P瓊脂平板上，挑取典型或可疑*菌落接種肉湯培養(yǎng)基，36℃±1℃培養(yǎng)20～24小時。

d)取肉湯培養(yǎng)物做血漿凝固酶試驗，記錄試驗結果。

e)報告結果：根據(jù)凝固酶試驗結果，查MPN表報告每25 cm2食品接觸面中或每只手的*值。

3.3工廠環(huán)境中病原體的檢測計劃與方法：

檢測計劃：為了保證食品安全，工廠應該對生產(chǎn)環(huán)境中的病原微生物進行檢測和評估，檢測項目包括李斯特菌，沙門氏菌等病原體微生物，化驗室應該按照一定的計劃對生產(chǎn)場所環(huán)境中的病原體進行檢測，其中包括地面、下水道、 排水溝、墻壁、天花板、設備框架、運輸?shù)闹Ъ?，冷藏裝置、速凍機、傳送帶、設備的螺絲、維修工具等部位。當某個點檢測到病員微生物時，應該對環(huán)境中的相似點加大檢測頻率；在把所有的預定點檢測完后，應該對環(huán)境中的病原微生物的存在狀況進行全面評估，在下一次環(huán)境檢測循環(huán)過程中加強檢測容易出現(xiàn)病原體的環(huán)境點，達到持續(xù)改進的目的。

檢測頻率: 每月兩次,每次每個區(qū)域至少選取5個檢測點,分別進行檢測。

3.3.1 環(huán)境李斯特菌的檢測方法（3MTM  PetrifilmTM 環(huán)境李斯特菌的測試片）

3.3.1.1 用涂抹棒，海綿或者其他采樣設備收集環(huán)境樣本。

3.3.1.2 將收集的樣本添加10毫升滅菌的緩沖蛋白胨水，將樣本與緩沖蛋白胨混合1分鐘，將樣品置于室溫（20-30℃）1小時，久不超過1.5小時，以修復損傷的李斯特菌。

3.3.1.3 將測試片放在平坦處，掀起上層膜。

3.3.1.4 用移液器垂直滴加3毫升樣品到下層膜*，將上層膜緩慢蓋下，以免產(chǎn)生氣泡。

3.3.1.5 輕輕將塑料壓板放在位于接種區(qū)上層膜上，不要壓，扭轉或者滑動壓板。提起壓板等至少十分鐘，以使膠體凝固。

3.3.1.6 將測試片透明面朝上，可疊放至十片，在37℃±1℃培養(yǎng)26-30小時，可以用標準菌落記數(shù)器或者其他光學放大器判讀，不要記數(shù)圓形輪廓上的菌落，因為他們不受選擇性培養(yǎng)基的影響。

3.3.1.7 對于定性檢測，根據(jù)紫紅色菌落是否存在，結果記為檢出或者未檢出。

3.3.2 環(huán)境中沙門氏菌的檢測方法

3.3.2.1采樣地點: 選取采樣點時因盡量選取微生物容易滋生的地方。

3.3.2.2 操作步驟

3.3.2.2.1采樣應在生產(chǎn)開始后進行，用已浸潤過的棉拭在選定的被測表面旋轉涂抹約100cm2的面積，然后將棉拭放回涂抹試管并蓋緊。        

3.3.2.2.2將樣品帶回實驗室，每5個點混合成一個樣品, 登記編號,按照SN0170-92標準及時檢測，若有陽性結果出現(xiàn)，應逐步對所混合的每個點分別檢測。

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