【測定原理】
上海飛測嘔吐毒素免疫親和柱產(chǎn)品測定的基礎(chǔ)是抗原抗體反應(yīng)，抗嘔吐毒素(DON)的單克隆抗體連接在柱內(nèi)凝膠介質(zhì)上，樣品中的DON經(jīng)過提取、過濾、稀釋，然后將樣品提取液緩慢通過DON免疫親和柱，在免疫親和柱內(nèi)，DON與抗體結(jié)合，洗滌液通過免疫親和柱除去未被結(jié)合的雜質(zhì)。后采用甲醇洗脫DON，然后進行相關(guān)分析。
【所需材料】(不提供)
(1)設(shè)備及器皿耗材：天平、粉碎機、離心機、渦旋混勻儀或搖床(轉(zhuǎn)速≥200r/min);量筒、50mL玻璃漏斗、微量移液器(100μL~1000μL)、快速定性濾紙、玻璃微纖維濾紙(whatman934-AH，直徑11cm，孔徑1.5μm)、20mL玻璃注射器等。
(2)試劑：甲醇(色譜級)、聚乙二醇8000(PEG)、蒸餾水或去離子水。
【試劑配制】
0.1%吐溫20-PBS溶液：將0.1%吐溫20-PBS粉末(廠家提供)直接用900mL水全部溶解后，用HCl或NaOH調(diào)pH至7.4，后用水定容至1L。
5M NaOH溶液：稱取20g NaOH，溶于100mL水中。
【樣品制備】
----準確稱取25g(精確至0.01g)粉碎的樣品，加入5g聚乙二醇8000，并與125mL水混合，搖床振蕩提取15min;
----用快速定性濾紙過濾或4000r/min，離心5min;對于pH低于6.0的玉米加工副產(chǎn)物及飼料等的濾液或上清液，需要用5M NaOH調(diào)pH至7.0左右，并用玻璃微纖維濾紙過濾，至濾液澄清，備用;
----準確移取2.5mL混勻濾液(相當于0.5g樣品)過親和柱。
【親和柱凈化】
注意：整個純化過程盡量不要讓柱子干燥!
----3mL柱管取出上方堵頭，減去上堵頭螺紋下突出部分，插回柱子上，另一端與20mL針筒固定后使用;將1mL柱管上方堵頭取出后斜剪斷，然后再插回柱子上(柱管內(nèi)偶見有小氣泡屬正?，F(xiàn)象，不影響親和柱的使用);
----準確移取上述混勻濾液，注入針筒中，調(diào)節(jié)針筒壓力使其以2秒/滴的速度緩慢通過免疫親和柱;
----用20mL 水沖洗柱子(對于飼料及玉米加工副產(chǎn)品等顏色較深的樣液，先用10mL 0.1%吐溫20-PBS清洗，再用10 mL 10%甲醇-水沖洗柱子，后用10mL水沖洗柱子。)，流速1秒/滴，棄去流出液，直至2~3mL空氣通過柱體，保證柱子內(nèi)沒有殘余液體;
----準確加入1.5mL甲醇(色譜級)洗脫，流速自然重力，直至2~3mL空氣通過柱體，保證柱子內(nèi)沒有殘余液體。收集全部洗脫液，進行相關(guān)測定。
【檢測方法】
IAC-HPLC法檢測
----過有機濾膜(孔徑0.22μm)后，直接HPLC測定;或在50℃下用氮氣緩緩地吹至近干，加入流動相混勻，過有機濾膜(孔徑0.22μm)后，參照GB 5009.111-2016或GB/T 30956-2014條件進行HPLC測定。
【保質(zhì)期】
有效期為12個月。
生產(chǎn)日期見包裝盒。
