【產品用途】
脫氧雪腐鐮刀菌烯醇(又稱嘔吐毒素,簡稱DON)免疫親和柱適合于和HPLC、LC-MS及DON酶免分析試劑盒結合使用,定量檢測DON。適用于谷物、飼料等樣本中的DON凈化處理,提高了樣品的純度,純化后的提取液可用不同的分析方法測定。
【測定原理】
上海飛測嘔吐毒素免疫親和柱測定的基礎是抗原抗體反應,抗嘔吐毒素(DON)的單克隆抗體連接在柱內凝膠介質上,樣品中的DON經過提取、過濾、稀釋,然后將樣品提取液緩慢通過DON免疫親和柱,在免疫親和柱內,DON與抗體結合,洗滌液通過免疫親和柱除去未被結合的雜質。后采用甲醇洗脫DON,然后進行相關分析。
【所需材料】(不提供)
(1)設備及器皿耗材:天平、粉碎機、離心機、渦旋混勻儀或搖床(轉速≥200r/min);量筒、50mL玻璃漏斗、微量移液器(100μL~1000μL)、快速定性濾紙、玻璃微纖維濾紙(whatman934-AH,直徑11cm,孔徑1.5μm)、20mL玻璃注射器等。
(2)試劑:甲醇(色譜級)、聚乙二醇8000(PEG)、蒸餾水或去離子水。
【試劑配制】
0.1%吐溫20-PBS溶液:將0.1%吐溫20-PBS粉末(廠家提供)直接用900mL水全部溶解后,用HCl或NaOH調pH至7.4,后用水定容至1L。
5M NaOH溶液:稱取20g NaOH,溶于100mL水中。
【樣品制備】
----準確稱取25g(精確至0.01g)粉碎的樣品,加入5g聚乙二醇8000,并與125mL水混合,搖床振蕩提取15min;
----用快速定性濾紙過濾或4000r/min,離心5min;對于pH低于6.0的玉米加工副產物及飼料等的濾液或上清液,需要用5M NaOH調pH至7.0左右,并用玻璃微纖維濾紙過濾,至濾液澄清,備用;
----準確移取2.5mL混勻濾液(相當于0.5g樣品)過親和柱。
【親和柱凈化】
注意:整個純化過程盡量不要讓柱子干燥!
----3mL柱管取出上方堵頭,減去上堵頭螺紋下突出部分,插回柱子上,另一端與20mL針筒固定后使用;將1mL柱管上方堵頭取出后斜剪斷,然后再插回柱子上(柱管內偶見有小氣泡屬正?,F(xiàn)象,不影響親和柱的使用);
----準確移取上述混勻濾液,注入針筒中,調節(jié)針筒壓力使其以2秒/滴的速度緩慢通過免疫親和柱;
----用20mL 水沖洗柱子(對于飼料及玉米加工副產品等顏色較深的樣液,先用10mL 0.1%吐溫20-PBS清洗,再用10 mL 10%甲醇-水沖洗柱子,后用10mL水沖洗柱子。),流速1秒/滴,棄去流出液,直至2~3mL空氣通過柱體,保證柱子內沒有殘余液體;
----準確加入1.5mL甲醇(色譜級)洗脫,流速自然重力,直至2~3mL空氣通過柱體,保證柱子內沒有殘余液體。收集全部洗脫液,進行相關測定。
【檢測方法】
IAC-HPLC法檢測
----過有機濾膜(孔徑0.22μm)后,直接HPLC測定;或在50℃下用氮氣緩緩地吹至近干,加入流動相混勻,過有機濾膜(孔徑0.22μm)后,參照GB 5009.111-2016或GB/T 30956-2014條件進行HPLC測定。
【注意事項】
(1)嘔吐毒素對人體有害,應戴手套操作。凡接觸到標樣的玻璃器皿都要用5%次氯酸鈉浸泡過夜。
(2)不要使用過有效期的免疫親和柱。
(3)免疫親和柱應在2~8℃保存。不要冷凍。
(4)使用前,免疫親和柱需至少提前半小時回溫至室溫(25℃左右)。
(5)HPLC液相測定值、試劑盒計算值接近zui高檢出值時,樣本的實際含量可能大于柱容量而造成流穿,建議減少上樣體積重新過柱。
(6)稱取的樣品量以及提取液的體積可根據實際情況按比例調整,建議低不少于10g樣。
【保質期】
有效期為12個月。
生產日期見包裝盒。