丙酮酸脫羧酶（PDC）紫外分光光度法公司正在出售的產(chǎn)品：人橋粒芯糖蛋白-1(Dsg-1)ELISA Kit，48T/96T
豚鼠卵清蛋白特異性IgG(OVA sIgG)ELISA Kit，48T/96T
人卵清蛋白特異性IgG(OVA sIgG)ELISA Kit，48T/96T
人補(bǔ)體7(C7)ELISA Kit，48T/96T
人CCAAT增強(qiáng)子結(jié)合蛋白δ(C/EBPδ)EL
商品屬性：
產(chǎn)品名稱(chēng) | |
規(guī)格 | 50管/48樣 |
檢測(cè)方法 | 紫外分光光度法 |
貨號(hào) | GOY-01S6338 |
商品介紹：
測(cè)定意義
PDC主要存在于酵母中，是乙醇發(fā)酵的關(guān)鍵酶之一，催化丙酮酸脫羧生成乙醛。
測(cè)定原理：
PDC催化丙酮酸脫羧生成乙醛，添加乙醇脫氫酶（ADH）來(lái)進(jìn)一步催化 NADH還原乙醛生成乙醇和NAD+；NADH在340 nm有吸收峰，而NAD+沒(méi)有；通過(guò)測(cè)定340 nm光吸收下降速率，來(lái)計(jì)算PDC活性。
自備儀器和用品：
研缽、冰、臺(tái)式離心機(jī)、紫外分光光度計(jì)、1ml石英比色皿、可調(diào)式移液槍和雙蒸水。
實(shí)驗(yàn)方法學(xué)：
一、肝素的配制： 市售肝素凍干粉140單位/mg，1克瓶裝，每瓶140，000單位，稱(chēng)取0.1克肝素凍干粉，加生理鹽水5ml，配成2800單位/ml。取50～100μl濕潤(rùn)管壁，可抗凝人血3～5ml，血液不會(huì)凝固。老鼠血易凝固，所以最好更濃一些。可以取0.1克肝素凍干粉，加3ml生理鹽水溶解后，取50～100μl,可抗凝鼠血2～4ml。 肝素抗凝管的制備：取0.1克肝素凍干粉，加2.5ml生理鹽水。取100μl～150μl滴入塑料或玻璃管中，濕潤(rùn)管壁，低于80℃小烤箱中（可以用烤面包的小烤箱），橫向轉(zhuǎn)動(dòng)，每隔5～10分鐘轉(zhuǎn)動(dòng)一次，直至干燥后放入4℃保存，可使2～5ml血液不凝固。 | 二、血液樣本的收集： 全血根據(jù)收集的條件，分成不抗凝和抗凝兩種。同時(shí)，不抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱(chēng)之為血清；抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱(chēng)之為血漿。 1、不抗凝收集血清:將收集好的全血,靜置1～2小時(shí)，直接低速離心分離出血清待用或保存。 2、抗凝收集血漿: 收集抗凝全血，輕輕顛倒充分抗凝后，可直接低速離心分離血漿(也可靜置半小時(shí)左右再低速離心分離血漿)待用或保存。根據(jù)不同抗凝劑的性能特征，選擇合適的抗凝劑。實(shí)驗(yàn)室常用的抗凝劑有肝素的各種鹽、EDTA。 |
選擇抗凝的注意點(diǎn)：
①、每一份樣本所加的抗凝劑的量要一致，同時(shí)所取的全血的量也要盡量一致;
②、收集抗凝全血后一定要輕輕顛倒，充分抗凝，防止部分血液未接觸到抗凝劑而導(dǎo)致凝固;
③、抗凝全血收集的血漿相對(duì)較多（1ml抗凝全血能分離出0.4～0.5ml血漿）;
④、抗凝收集的血漿冷凍保存后，解凍時(shí)可能會(huì)出現(xiàn)絮狀渾濁，如有則需要離心去掉渾濁后
用于測(cè)定。
2-溴-3-十二烷基噻吩 95%2,6-二氯苯肼鹽酸鹽 98%Anti-CK18/FITC 熒光素標(biāo)記角蛋白18抗體IgG
三苯基膦醋酸鈀 Pd 14.2%2,6-二氟吡-3-酸 95%Anti-CK19/FITC 熒光素標(biāo)記角蛋白19抗體IgG
1,4-雙(二苯基膦丁烷)二氯化鈀 98%3,4-二氯苯肼鹽酸鹽 97%Anti-CK19/Gold 膠體金離子標(biāo)記角蛋白19抗體IgG
雙(乙)氯化鈀(II) Pd 41.0%2-氟苯肼鹽酸鹽 97%Anti-CK19/FITC 熒光素標(biāo)記角蛋白19抗體IgG
雙(二苯基膦) 98%3-氟苯肼鹽酸鹽 97%Anti-CK19/RBITC 紅色熒光素羅丹明標(biāo)記角蛋白19抗體IgG
1,2-雙(二苯基膦)乙烷 98%6-氟吡-3-酸 96%Anti-CK20/FITC 熒光素標(biāo)記角蛋白20抗體IgG
1,5-雙(二苯基膦)戊烷 97%2-氟吡-3-酸 97%Anti-CK34 BetaE12/FITC 熒光素標(biāo)記高分子量角蛋白CK34βE12抗體IgG
1,6-雙(二苯基膦基)己烷 97%2-羥基-5-氟吡 97%Anti-CK-HMW/FITC 熒光素標(biāo)記高分子量角蛋白抗體IgG
丙酮酸脫羧酶（PDC）紫外分光光度法D-3-氨 98%CCR-4(C-C chemokine receptor 4) 表面趨化因子受體4抗原猴組織蛋白B(CTSB)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒
L-2-氨 97%CCR-6/CD196 peptide 表面趨化因子受體6抗原猴胰島素樣生長(zhǎng)因子2-mRNA結(jié)合蛋白3(IGF2BP3)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒
三氟磺釹 98%CXCR6(CXC-chemokine receptor 6) peptide 表面趨化因子受體6抗原猴重去素(NEB)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒
三氟磺鎳(II) 96%CCR-7(CC chemokine receptor 7) CC趨化因子受體7（多肽）猴Apelin蛋白(APLN)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒
三氟磺鐠 98%CXCL10/IP-10 CXCL10趨化因子10/干擾素誘導(dǎo)蛋白10抗原猴B分化因子(BCDF)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒
三氟磺 98%VEGF(Vascular endothelial growth factor) 血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子（多肽抗原）猴Bcl2關(guān)聯(lián)永生因3(BAG3)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒
DL-4-溴氨 99%CD10/CALLA (Neutral Endopeptidase) CD10抗原猴原鈣黏素1(PCDH1)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒
BOC-D-炔甘氨 95%ZCWCC1(Zinc finger CW-type coiled-coil domain protein 1) ZCWCC1抗原猴谷氨脫羧(GAD)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒
BOC-D-3-(2-吡)-氨 99%CD105/Endoglin/TGF- Beta receptor CD105/轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β受體抗原猴間隙連接蛋白31(CX31)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒
FMOC-D-4-溴氨 95%CD138/Syndecan-1 多配體蛋白聚糖1抗原猴色素P450家族成員7A1(CYP7A1)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒
L-烯甘氨 95%CD146/MCAM 黑色素瘤粘附分子CD146抗原猴蛋白17(Sp17)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒
三氟磺鈉 98%ANPEN/CD13(Aminopeptidase N) 氨肽N抗原猴半糖6硫酯(Gal-6S)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒
三氟磺銀(Ⅰ) 97%CD14(cluster of differentiation antigen 14) CD14/內(nèi)素受體抗原猴胱天蛋白12(Casp12)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒
三氟磺釤 98%CD28 CD28抗原猴GATA結(jié)合蛋白3(GATA3)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒
三銀 98%CD166/ALCAM(activated leukocyte celladhesion molecule) 活化白粘附分子抗原猴血管生成素樣蛋白3(ANGPTL3)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒
操作步驟:
實(shí)驗(yàn)開(kāi)始前，各試劑均應(yīng)平衡至室溫（試劑不能直接在37℃溶解）；試劑或樣品稀釋時(shí)，均需混勻，混勻時(shí)盡量避免起泡。實(shí)驗(yàn)前應(yīng)預(yù)測(cè)樣品含量，如樣品濃度過(guò)高時(shí)，應(yīng)對(duì)樣品進(jìn)行稀釋?zhuān)允瓜♂尯蟮臉悠贩显噭┖械臋z測(cè)范圍，計(jì)算時(shí)再乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù)。
1. 加樣：分別設(shè)空白孔、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測(cè)樣品孔。空白孔加樣品稀釋液100μl，余孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品或待測(cè)樣品100μl，注意不要有氣泡，加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻，酶標(biāo)板加上蓋或覆膜，37℃反應(yīng)120分鐘。為保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果有效性，每次實(shí)驗(yàn)請(qǐng)使用新的標(biāo)準(zhǔn)品溶液。
2. 棄去液體，甩干，不用洗滌。每孔加檢測(cè)溶液A工作液 100μl（在使用前一小時(shí)內(nèi)配制），酶標(biāo)板加上覆膜, 37℃反應(yīng)60分鐘。
3. 溫育60分鐘后，棄去孔內(nèi)液體，甩干，洗板3次，每次浸泡1-2分鐘，大約400μl/每孔，甩干（也可輕拍將孔內(nèi)液體拍干）。
4. 每孔加檢測(cè)溶液B工作液（同檢測(cè)A工作液） 100μl，酶標(biāo)板加上覆膜37℃反應(yīng)60分鐘。
5. 溫育60分鐘后，棄去孔內(nèi)液體，甩干，洗板5次，每次浸泡1-2分鐘，350μl/每孔，甩干（也可輕拍將孔內(nèi)液體拍干）。
6. 依序每孔加底物溶液90μl，酶標(biāo)板加上覆膜37℃避光顯色（30分鐘內(nèi)，此時(shí)肉眼可見(jiàn)標(biāo)準(zhǔn)品的前3-4孔有明顯的梯度蘭色，后3-4孔梯度不明顯，即可終止）。
7. 依序每孔加終止溶液50μl，終止反應(yīng)，此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色。終止液的加入順序應(yīng)盡量與底物液的加入順序相同。為了保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性，底物反應(yīng)時(shí)間到后應(yīng)盡快加入終止液。
8. 用酶聯(lián)儀在450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的光密度（OD值）。
