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測(cè)定意義

輔酶ⅡNADP(H)廣泛存在于動(dòng)物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中，NADP+和NADPH含量測(cè)定可以計(jì)算NADP（NADPH + NADP+ )含量和NADPH/NADP+比值，其變化與磷酸戊糖途徑和生物合成以及抗氧化反應(yīng)密切相關(guān)。NADPH/NADP+比值不僅是細(xì)胞氧化還原態(tài)的主要標(biāo)志之一，而且在PPP途徑、生物合成和抗氧化代謝中具有重要調(diào)控作用。

測(cè)定原理

分別用酸性和堿性提取液提取樣品中NADP+和NADPH。NADPH通過PMS的遞氫作用，使氧化型噻唑藍(lán)（MTT）還原為甲瓚，570nm下檢測(cè)吸光值，從而測(cè)定NADPH含量。利用6-磷酸葡萄糖脫氫酶還原NADP+為NADPH，從而檢測(cè)NADP+含量。

所需的儀器和用品

可見分光光度計(jì)、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、1 mL玻璃比色皿、研缽、冰和蒸餾水。

實(shí)驗(yàn)方法學(xué)：

選擇抗凝的注意點(diǎn)：

①、每一份樣本所加的抗凝劑的量要一致，同時(shí)所取的全血的量也要盡量一致;

②、收集抗凝全血后一定要輕輕顛倒，充分抗凝，防止部分血液未接觸到抗凝劑而導(dǎo)致凝固;

③、抗凝全血收集的血漿相對(duì)較多（1ml抗凝全血能分離出0.4～0.5ml血漿）;

④、抗凝收集的血漿冷凍保存后，解凍時(shí)可能會(huì)出現(xiàn)絮狀渾濁，如有則需要離心去掉渾濁后

用于測(cè)定。

蕈堿型乙酰受體（抗原）Anti-ARMCX1 Antibody陳皮炭Chen Pitan

C-肽（C肽）Anti-ARL2BP Antibody人工虎骨Artificial?bones

鈣結(jié)合蛋白（抗原）Anti-ARMCX2 Antibody白薇Bai Wei

腺苷受體A3抗原Anti-ARMCX3 Antibody全葉青蘭All Ye Qinglan

巨噬來源的趨化因子αV多肽Anti-ARNT2 Antibody土鱉蟲（冀地鱉）Woodlouse?（Hebei?Eupolyphaga sinensis）

化腺苷單活化蛋白激α1抗原Anti-ARPP21 Antibody紫草（新疆紫草）Gromwell?（Lithospermum?Xinjiang）

環(huán)腺苷酸應(yīng)答元件結(jié)合蛋白（抗原）Anti-ARPP21 Antibody黃根Huang Gen

化環(huán)腺苷酸應(yīng)答元件結(jié)合蛋白（多肽）Anti-ARRDC2 Antibody猴棗Hou Zao

輔酶ⅡNADP(H)含量可見分光光度法檢測(cè)試劑盒氟化鉻 AROAT-3(Organic anion transporter 3)  陰離子轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白-3(抗原)猴嗜環(huán)蛋白/親環(huán)素B(CYPB)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒  

氟化鎂 AR，97.5% galectin 9   半糖凝集素9（抗原）猴白介素12 p40(IL-12 p40)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒

氟鋅 CPOct-4  胚胎干關(guān)鍵蛋白(多肽)猴載脂蛋白A2(ApoA2)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒

氟化鋅,無水 AR,99%OPN(osteopontin)  骨橋蛋白（抗原）猴β干擾素(IFN-β)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒

氟化鋅,四水  98%P16/CDKN2A (Cyclin-dependent kinase inhibitor-2A)  抑癌因p16（抗原）猴DNA結(jié)合蛋白(DBP)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒

并咪唑 AR,98.5%p21/WAF1/CIP1   p21 核分裂抑制因子之一（抗原）猴核糖核T2(RNASET2)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒

2-巰吡-1-氧化鈉鹽 96%p27 (cyclin-dependent kinase inhibitor 1B)  p27(抗原)猴軟骨寡聚質(zhì)蛋白(COMP)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒  

2-巰吡-1-氧化鈉鹽 40%水溶液P63 protein  P63 腫瘤抑制因（抗原）猴絨毛蛋白(CVL/EZR)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒

角鯊?fù)?/span> 99%OPG(Osteoprotegerin)  護(hù)骨素(多肽抗原)猴破骨相關(guān)受體(OSCAR)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒

N-乙-2-氨吡咯烷  98%OPGL (Osteoprotegerin ligand)  骨保護(hù)蛋白配體(抗原)猴半凝集素14(GAL14)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒

1-(2-二氨乙)-1H-5-巰-四氮唑 98%P311 protein  增生性瘢痕相關(guān)蛋白（抗原）猴過氧化物體增殖物激活受體α(PPAR-α)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒

1-乙-2-吡咯烷酮 99%PARP(poly ADP-ribose polymerase)  多腺苷二多聚抗原猴T急性淋巴母白血病相關(guān)抗原(TALLA-1/CD231)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒

5-四唑 98%Visfatin-1 (PBEF1)(NT) Human  內(nèi)脂素/內(nèi)臟脂肪素（人：N端多肽）、內(nèi)臟脂肪素、 又稱：前B克隆增強(qiáng)因子、內(nèi)肥素、腹脂素猴腸三葉肽因子3(TFF3)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒

2-氧-5-磺酰酯 98%Visfatin-1 (PBEF1)(NT) hu、 mo、 rat、MK  內(nèi)脂素/內(nèi)臟脂肪素（人、大、小鼠、猴同源：N端多肽）、內(nèi)臟脂肪素、前B克隆增強(qiáng)因子、內(nèi)肥素、腹脂素猴八聚體結(jié)合轉(zhuǎn)錄因子2(OBTF2)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒

疊氮鈉 AR,99%（劇品）Visfatin-2(CT)hu、mo、rat、MK  內(nèi)脂素/內(nèi)臟脂肪素（抗人、大、小鼠、猴：N端多肽）前B克隆增強(qiáng)因子、內(nèi)肥素、腹脂素猴纖維連接素相關(guān)抗原(FRA)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒  

操作步驟:

實(shí)驗(yàn)開始前，各試劑均應(yīng)平衡至室溫（試劑不能直接在37℃溶解）；試劑或樣品稀釋時(shí)，均需混勻，混勻時(shí)盡量避免起泡。實(shí)驗(yàn)前應(yīng)預(yù)測(cè)樣品含量，如樣品濃度過高時(shí)，應(yīng)對(duì)樣品進(jìn)行稀釋，以使稀釋后的樣品符合試劑盒的檢測(cè)范圍，計(jì)算時(shí)再乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù)。

1.        加樣：分別設(shè)空白孔、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測(cè)樣品孔。空白孔加樣品稀釋液100μl，余孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品或待測(cè)樣品100μl，注意不要有氣泡，加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻，酶標(biāo)板加上蓋或覆膜，37℃反應(yīng)120分鐘。為保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果有效性，每次實(shí)驗(yàn)請(qǐng)使用新的標(biāo)準(zhǔn)品溶液。

2.        棄去液體，甩干，不用洗滌。每孔加檢測(cè)溶液A工作液 100μl（在使用前一小時(shí)內(nèi)配制），酶標(biāo)板加上覆膜, 37℃反應(yīng)60分鐘。

3.        溫育60分鐘后，棄去孔內(nèi)液體，甩干，洗板3次，每次浸泡1-2分鐘，大約400μl/每孔，甩干（也可輕拍將孔內(nèi)液體拍干）。

4.        每孔加檢測(cè)溶液B工作液（同檢測(cè)A工作液） 100μl，酶標(biāo)板加上覆膜37℃反應(yīng)60分鐘。

5.        溫育60分鐘后，棄去孔內(nèi)液體，甩干，洗板5次，每次浸泡1-2分鐘，350μl/每孔，甩干（也可輕拍將孔內(nèi)液體拍干）。

6.        依序每孔加底物溶液90μl，酶標(biāo)板加上覆膜37℃避光顯色（30分鐘內(nèi)，此時(shí)肉眼可見標(biāo)準(zhǔn)品的前3-4孔有明顯的梯度蘭色，后3-4孔梯度不明顯，即可終止）。

7.       依序每孔加終止溶液50μl，終止反應(yīng)，此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色。終止液的加入順序應(yīng)盡量與底物液的加入順序相同。為了保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性，底物反應(yīng)時(shí)間到后應(yīng)盡快加入終止液。

8.       用酶聯(lián)儀在450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的光密度（OD值）。