測(cè)定步驟:
1、 酶標(biāo)儀預(yù)熱30min以上,調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至450nm。
2、 試劑三的稀釋:將試劑三用蒸餾水稀釋50倍,用多少配多少。(試劑三和蒸餾水1:49稀釋。
3、 工作液配制:在試劑一加入100μl試劑二,充分混勻。配好的試劑4℃避光可保存一周。(若一次性測(cè)定樣本較少,可按照實(shí)際用量將試劑一和試劑二按照20ml:0.1ml的比例混勻配制)
4、 將一瓶試劑四用5ml蒸餾水溶解(溶解后一周內(nèi)用完)。
5、 樣本測(cè)定(在96孔板中依次加入下列試劑)
選擇抗凝的注意點(diǎn):
①、每一份樣本所加的抗凝劑的量要一致,同時(shí)所取的全血的量也要盡量一致;
②、收集抗凝全血后一定要輕輕顛倒,充分抗凝,防止部分血液未接觸到抗凝劑而導(dǎo)致凝固;
③、抗凝全血收集的血漿相對(duì)較多(1ml抗凝全血能分離出0.4~0.5ml血漿);
④、抗凝收集的血漿冷凍保存后,解凍時(shí)可能會(huì)出現(xiàn)絮狀渾濁,如有則需要離心去掉渾濁后用于測(cè)定。
【友情提示】:本產(chǎn)品僅供科研研究使用,不得用于人體臨床直接檢測(cè)。避免給您帶來(lái)不必要的損失,請(qǐng)仔細(xì)閱讀購(gòu)買說(shuō)明!
產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 檢測(cè)方法 | 貨號(hào) |
100管/96樣 | 微量法 | GOY-01S6359 |
商品介紹
測(cè)定意義 ME廣泛存在于微生物、培養(yǎng)細(xì)胞、動(dòng)物和植物胞漿中,尤其在植物組織中活性較高。ME催化蘋果酸氧化脫羧的可逆反應(yīng),產(chǎn)生丙酮酸和CO2,以及伴隨NAD(P)+的還原反應(yīng),是蘋果酸代謝的關(guān)鍵酶。ME活性與生物合成和抗氧化密切相關(guān)。近年來(lái)植物ME活性測(cè)定較多,已經(jīng)成為抗氧化研究的熱點(diǎn)。根據(jù)輔酶專一性和對(duì)底物特異性的不同,可將ME分為NAD-ME(EC1.1.1.38)和NADP-ME(EC1.1.1.40)。 測(cè)定原理: NAD-ME催化NAD+還原成NADH,在340nm下測(cè)定NADH增加速率。 需自備的儀器和用品: 紫外分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、水浴鍋、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96孔板和蒸餾水。 |
試劑的組成和配制:
提取液:液體 100mL×1 瓶,4℃保存;
試劑一:液體 5mL×1 瓶,4℃保存;
試劑二:液體 200μL×1 支,4℃保存;
試劑三:液體 4mL×1 瓶,4℃保存;
試劑四:粉劑×2 瓶,4℃保存。
所需的儀器和用品:
可見分光光度計(jì)、1mL 玻璃比色皿(光徑 1cm)、低溫離心機(jī)、移液器、研缽、冰和蒸餾水
四、超氧化物歧化酶(SOD)的測(cè)定:
建議正式實(shí)驗(yàn)前選取 2 個(gè)樣本做預(yù)測(cè)定,了解本批樣品情況,熟悉實(shí)驗(yàn)流程,避免實(shí)驗(yàn)
樣本和試劑浪費(fèi)!
1、樣本制備
① 組織樣本:
取約 0.1g 組織(水分充足的樣本可取 0.25g),加入 1mL 提取液,在 4oC 或冰浴進(jìn)行
勻漿(或使用各類常見勻漿器)。4oC×12000rpm 離心 10min,取上清作為待測(cè)液。
【注】:若增加樣本量,可按照組織質(zhì)量(g):提取液體積(mL)為 1:5~10 的比例進(jìn)行提取
② 細(xì)菌/細(xì)胞樣本:
先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi),離心后棄上清;取約 500 萬(wàn)細(xì)菌或細(xì)胞加入 1mL
提取液,超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞(冰浴,功率 200W,超聲 3s,間隔 10s,重復(fù) 30 次);
12000rpm 4℃離心 10min,取上清,置冰上待測(cè)。
【注】:若增加樣本量,可按照細(xì)菌/細(xì)胞數(shù)量(10
4):提取液(mL)為 500~1000:1 的比例進(jìn)行提取。 ③ 液體樣本:直接檢測(cè);若渾濁,離心后取上清檢測(cè)。
注意事項(xiàng):
1、試劑二為酶,不可冷凍,使用時(shí)在冰上放置。
2、對(duì)照管只需要做一管。
3、若對(duì)照管吸光值大于 1,建議將試劑二用蒸餾水稀釋 7 倍后使用(10μL 試劑二原液+60μL蒸餾水)。
4、SOD為什么有的樣本測(cè)定管大于對(duì)照管,對(duì)照管數(shù)值在什么范圍?對(duì)照管的范圍是 0.4-1。對(duì)照管吸光值過(guò)低可能是(1)試劑二或試劑四沒有現(xiàn)配現(xiàn)用;
(2)沒有按順序加試劑;(3)反應(yīng)時(shí)間不夠,可以延長(zhǎng)反應(yīng)時(shí)間(反應(yīng)時(shí)間 30min可以延長(zhǎng)到 40min)。對(duì)照管吸光值過(guò)高可能是試劑二未按操作說(shuō)明書稀釋相應(yīng)倍數(shù)。
若出現(xiàn)測(cè)定管大于對(duì)照管,可能是樣本中雜質(zhì)的影響太大,為了降低雜質(zhì)的影響一般
將樣本提取上清液用蒸餾水或提取液稀釋 10倍后再測(cè),通??梢允箿y(cè)定正常。
間粘附分子-2抗原Anti-GRM4 Antibody小鼠過(guò)氧化氫(CAT)elisa定量檢測(cè)試劑盒
白介素1α/IL-1αAnti-GRK7 Antibody大鼠塔塔結(jié)合蛋白(TBP)elisa定量檢測(cè)試劑盒
血藍(lán)蛋白Anti-GRK6 Antibody大鼠TATA盒結(jié)合蛋白相關(guān)因子1(TAF1)elisa定量檢測(cè)試劑盒
Ki-67Anti-GRM3 Antibody大鼠干因子受體(SCFR)elisa定量檢測(cè)試劑盒
脂質(zhì)運(yùn)載蛋白Anti-GRM6 Antibody小鼠載脂蛋白A2(ApoA2)elisa定量檢測(cè)試劑盒
瘦素Anti-GRM6 Antibody大鼠白介素2可溶性受體β鏈(IL-2SRβ)elisa定量檢測(cè)試劑盒
偶聯(lián)牛血清白蛋白Anti-GSC Antibody小鼠成纖維生長(zhǎng)因子受體1(FGFR1)elisa定量檢測(cè)試劑盒
與血藍(lán)蛋白偶聯(lián)物Anti-GSC2 Antibody小鼠鋅結(jié)合α2-糖蛋白1(AZGP1)elisa定量檢測(cè)試劑盒
NAD蘋果酸酶(NADME)微量法檢測(cè)試劑盒烯唑 分析標(biāo)準(zhǔn)品,99.5%大鼠C反應(yīng)蛋白(CRP)免疫試劑盒HEATR4蛋白抗體Goat Anti-human IgM/Bio 標(biāo)記的羊抗人IgM
標(biāo)準(zhǔn)溶液 100μg/ml,u=4%大鼠CXC趨化因子受體5(CXCR5)免疫試劑盒透明質(zhì)及粘蛋白1抗體Goat Anti-human IgM/APC APC標(biāo)記的羊抗人IgM
標(biāo)準(zhǔn)溶液 10μg/ml,u=6%(劇品)大鼠CXC趨化因子受體4(CXCR4)免疫試劑盒轉(zhuǎn)錄因子HES7抗體Goat Anti-human IgM/AP 堿性(AP)標(biāo)記的羊抗人IgM
分析標(biāo)準(zhǔn)品,99%(劇品)大鼠CXC趨化因子配體16(CXCL16)免疫試劑盒宮頸黏液蛋白相關(guān)蛋白抗體Goat Anti-human IgM/Alexa Fluor 647 Alexa Fluor 647標(biāo)記的羊抗人IgM
標(biāo)準(zhǔn)溶液 100μg/ml,u=3%大鼠c-ros致癌因1,受體酪氨激(ROS1)免疫試劑盒流感病H3N8血凝素抗體Goat Anti-human IgM/Alexa Fluor 555 Alexa Fluor 555標(biāo)記的羊抗人IgM
標(biāo)準(zhǔn)溶液 10μg/ml,u=6%大鼠Coronin-1A(Coro1a/Coro1)免疫試劑盒流感病H3N7血凝素抗體Goat Anti-human IgM/Alexa Fluor 488 Alexa Fluor 488標(biāo)記的羊抗人IgM
乙拌標(biāo)準(zhǔn)溶液 100μg/ml,u=3%大鼠c-jun 免疫試劑盒流感病H3N1血凝素抗體Goat Anti-human IgM/Alexa Fluor 350 Alexa Fluor 350標(biāo)記的羊抗人IgM
乙拌標(biāo)準(zhǔn)溶液 10μg/ml,u=7% (劇品)大鼠c-fos 免疫試劑盒同源盒蛋白HoxB3抗體Goat anti-human IgM whole serum 羊抗人IgM抗血清
溴菊酯 分析標(biāo)準(zhǔn)品,99.5%(劇品)大鼠CDP-甘油二酯--甘油-3-3脂酰轉(zhuǎn)移,線粒體(PGS1)免疫試劑盒遺傳性血色病蛋白相關(guān)蛋白1抗體Goat Anti-human IgM 羊抗人IgM
溴菊酯標(biāo)準(zhǔn)溶液 100μg/ml,u=3%大鼠CDCP1 免疫試劑盒甘油吸收/轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白GUP1抗體Goat Anti-human IgG/RBITC 羅丹明標(biāo)記的羊抗人IgG
溴菊酯標(biāo)準(zhǔn)溶液 10μg/ml,u=6% 大鼠CD8分子(CD8)免疫試劑盒HHIP蛋白抗體Goat Anti-human IgG/PE-Cy7 PE-Cy7標(biāo)記的羊抗人IgG
吡氟酰草 分析標(biāo)準(zhǔn)品,99.5%大鼠CD68分子(CD68)免疫試劑盒亞鐵氧化抗體Goat Anti-human IgG/PE-Cy5.5 PE-Cy5.5標(biāo)記的羊抗人IgG
草萘 分析標(biāo)準(zhǔn)品,95%大鼠CD63分子(CD63)免疫試劑盒鳥苷釋放因子p532蛋白抗體Goat Anti-human IgG/PE-CY5 PE-CY5標(biāo)記的羊抗人IgG
除蟲脲標(biāo)準(zhǔn)溶液 100μg/ml,u=2%大鼠CD4分子(CD4)免疫試劑盒HERC2 E3泛素蛋白連接抗體Goat Anti-human IgG/PE-Cy3 PE-Cy3標(biāo)記的羊抗人IgG
除蟲脲標(biāo)準(zhǔn)溶液 10μg/ml,u=3%大鼠CD45分子(CD45)免疫試劑盒HERC3 E3泛素蛋白連接抗體Goat Anti-human IgG/PE PE標(biāo)記的羊抗人IgG