選擇抗凝的注意點(diǎn):
①、每一份樣本所加的抗凝劑的量要一致,同時(shí)所取的全血的量也要盡量一致;
②、收集抗凝全血后一定要輕輕顛倒,充分抗凝,防止部分血液未接觸到抗凝劑而導(dǎo)致凝固;
③、抗凝全血收集的血漿相對(duì)較多(1ml抗凝全血能分離出0.4~0.5ml血漿);
④、抗凝收集的血漿冷凍保存后,解凍時(shí)可能會(huì)出現(xiàn)絮狀渾濁,如有則需要離心去掉渾濁后
用于測(cè)定。
商品屬性:
產(chǎn)品名稱 | |
規(guī)格 | 50管/48樣 |
檢測(cè)方法 | 紫外分光光度法 |
貨號(hào) | GOY-01S6364 |
商品介紹:
測(cè)定意義
CK(EC 2.7.3.2)主要存在于心臟、肌肉以及腦等組織中,能可逆地催化肌酸與ATP之間的轉(zhuǎn)磷?;磻?yīng),在能量運(yùn)轉(zhuǎn)、肌肉收縮和ATP再生中有重要作用,是臨床診斷心腦疾病的一個(gè)重要指標(biāo)。
測(cè)定原理:
CK催化磷酸肌酸和ADP生成肌酸和ATP,己糖激酶催化ATP與葡萄糖形成6-磷酸葡萄糖,6-磷酸葡萄糖脫氫酶催化6-磷酸葡萄糖與NADP+生成NADPH,導(dǎo)致340nm光吸收值增加。
自備實(shí)驗(yàn)用品及儀器:
天平、低溫離心機(jī)、恒溫水浴鍋、紫外分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、1mL石英比色皿和蒸餾水。
實(shí)驗(yàn)方法學(xué):
一、肝素的配制: 市售肝素凍干粉140單位/mg,1克瓶裝,每瓶140,000單位,稱取0.1克肝素凍干粉,加生理鹽水5ml,配成2800單位/ml。取50~100μl濕潤(rùn)管壁,可抗凝人血3~5ml,血液不會(huì)凝固。老鼠血易凝固,所以最好更濃一些。可以取0.1克肝素凍干粉,加3ml生理鹽水溶解后,取50~100μl,可抗凝鼠血2~4ml。 肝素抗凝管的制備:取0.1克肝素凍干粉,加2.5ml生理鹽水。取100μl~150μl滴入塑料或玻璃管中,濕潤(rùn)管壁,低于80℃小烤箱中(可以用烤面包的小烤箱),橫向轉(zhuǎn)動(dòng),每隔5~10分鐘轉(zhuǎn)動(dòng)一次,直至干燥后放入4℃保存,可使2~5ml血液不凝固。 | 二、血液樣本的收集: 全血根據(jù)收集的條件,分成不抗凝和抗凝兩種。同時(shí),不抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱之為血清;抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱之為血漿。 1、不抗凝收集血清:將收集好的全血,靜置1~2小時(shí),直接低速離心分離出血清待用或保存。 2、抗凝收集血漿: 收集抗凝全血,輕輕顛倒充分抗凝后,可直接低速離心分離血漿(也可靜置半小時(shí)左右再低速離心分離血漿)待用或保存。根據(jù)不同抗凝劑的性能特征,選擇合適的抗凝劑。實(shí)驗(yàn)室常用的抗凝劑有肝素的各種鹽、EDTA。 |
操作步驟:
實(shí)驗(yàn)開始前,各試劑均應(yīng)平衡至室溫(試劑不能直接在37℃溶解);試劑或樣品稀釋時(shí),均需混勻,混勻時(shí)盡量避免起泡。實(shí)驗(yàn)前應(yīng)預(yù)測(cè)樣品含量,如樣品濃度過高時(shí),應(yīng)對(duì)樣品進(jìn)行稀釋,以使稀釋后的樣品符合試劑盒的檢測(cè)范圍,計(jì)算時(shí)再乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù)。
1. 加樣:分別設(shè)空白孔、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測(cè)樣品孔??瞻卓准訕悠废♂屢?00μl,余孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品或待測(cè)樣品100μl,注意不要有氣泡,加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動(dòng)混勻,酶標(biāo)板加上蓋或覆膜,37℃反應(yīng)120分鐘。為保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果有效性,每次實(shí)驗(yàn)請(qǐng)使用新的標(biāo)準(zhǔn)品溶液。
2. 棄去液體,甩干,不用洗滌。每孔加檢測(cè)溶液A工作液 100μl(在使用前一小時(shí)內(nèi)配制),酶標(biāo)板加上覆膜, 37℃反應(yīng)60分鐘。
3. 溫育60分鐘后,棄去孔內(nèi)液體,甩干,洗板3次,每次浸泡1-2分鐘,大約400μl/每孔,甩干(也可輕拍將孔內(nèi)液體拍干)。
4. 每孔加檢測(cè)溶液B工作液(同檢測(cè)A工作液) 100μl,酶標(biāo)板加上覆膜37℃反應(yīng)60分鐘。
5. 溫育60分鐘后,棄去孔內(nèi)液體,甩干,洗板5次,每次浸泡1-2分鐘,350μl/每孔,甩干(也可輕拍將孔內(nèi)液體拍干)。
6. 依序每孔加底物溶液90μl,酶標(biāo)板加上覆膜37℃避光顯色(30分鐘內(nèi),此時(shí)肉眼可見標(biāo)準(zhǔn)品的前3-4孔有明顯的梯度蘭色,后3-4孔梯度不明顯,即可終止)。
7. 依序每孔加終止溶液50μl,終止反應(yīng),此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色。終止液的加入順序應(yīng)盡量與底物液的加入順序相同。為了保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性,底物反應(yīng)時(shí)間到后應(yīng)盡快加入終止液。
8. 用酶聯(lián)儀在450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的光密度(OD值)。
小鼠CD30分子Anti-NKx2.2 Antibody 人前膠原C端肽(PCP)elisa定量檢測(cè)試劑盒
小鼠主要組織相容性復(fù)合體Ⅱ類Anti-NKX3-1 Antibody人B-Raf原癌基因/蛋白激(BRAF)elisa定量檢測(cè)試劑盒
人巨噬移動(dòng)抑制因子Anti-NKX2-8 Antibody人N-甲基-D-天氡離子能谷受體1(GRIN1)elisa定量檢測(cè)試劑盒
大鼠抗雙鏈DNA抗體/天然DNA抗體Anti-NKX6-3 Antibody人趨化因子(Lptn/XCL1)elisa定量檢測(cè)試劑盒
人組織因子途徑抑制物Anti-NLRX1 Antibody人乙酰輔A(A-CoA)elisa定量檢測(cè)試劑盒
小鼠可溶性血管內(nèi)皮蛋白C受體Anti-NKX6-3 Antibody人破骨相關(guān)受體(OSCAR)elisa定量檢測(cè)試劑盒
大鼠堿性Anti-NLE1 Antibody人葡萄糖-6-脫氫(G6PD)elisa定量檢測(cè)試劑盒
人干擾素誘導(dǎo)蛋白10Anti-NMBR Antibody人白介素7受體(IL7R)elisa定量檢測(cè)試劑盒
肌酸激酶(CK)紫外分光光度法檢測(cè)試劑盒2,8-雙(三氟)-4-羥喹啉 99%Anti-GRM2+GRM4 促代謝型谷氨受體2+4抗體人角膜鎖鏈蛋白(CDSN)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒
3-溴磺酰 98%Anti-GRO Alpha/GRO-1 生長(zhǎng)調(diào)節(jié)致癌因-1抗體人接觸蛋白1(CNTN1)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒
二乙膦酰乙叔丁酯 95%Anti-MIP2/GRO Beta/CXCL2 巨噬炎癥蛋白2( GROβ)抗體人接觸蛋白2(CNTN2)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒
2-溴-4-氟 98%Anti-GRO gamma/CXCL3 生長(zhǎng)調(diào)節(jié)致癌因gamma(GROγ)抗體人接觸蛋白3(CNTN3)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒
4-溴水楊 97%Anti-CXCL4/PF-4 血小板因子4抗體人接觸蛋白4(CNTN4)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒
4-溴-2-(三氟) 97%Anti-CXCL5 上皮中性?;罨?8抗體人接觸蛋白相關(guān)蛋白1(CNTNAP1)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒
3-溴 98%Anti-GRP 促胃泌素釋放肽抗體人接觸蛋白相關(guān)蛋白樣蛋白4(CNTNAP4)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒
5- 99%Anti-GRP78 葡萄糖調(diào)節(jié)蛋白78抗體(熱休克蛋白70蛋白5)人接頭蛋白2(ELMO2)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒
2-異煙 97%Anti-GRP94/gp96 葡萄糖調(diào)節(jié)蛋白94抗體人結(jié)蛋白(Des)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒
肉桂酰 97%Anti-GSK-3 alpha 葡萄糖合成激-3α抗體人結(jié)構(gòu)特異性識(shí)別蛋白1(SSRP1)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒
3-肉桂 98%Anti-Phospho GSK3 alpha (Ser21) 化葡萄糖合成激3α抗體人結(jié)合珠蛋白(HP)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒
2-芐 99%Anti-Phospho-Glycogen synthase 1(Ser641) 化葡萄糖合成1抗體人觸珠蛋白相關(guān)蛋白(HPR)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒
2--5- 99%Anti-GSK-3 Beta (CT) GSK-3β抗體葡萄糖合成激-3β抗體人骨骼肌慢肌肌鈣蛋白T(TNNT1)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒
2--5- 97%Anti-GSK-3 Beta (CT) 葡萄糖合成激-3β抗體人轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白2(TNPO2)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒
4- 98%Anti-phospho-GSK-3 Beta(Ser9) 化葡萄糖合成激3β抗體人線粒體解偶聯(lián)蛋白2(UCP-2)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒