服務(wù)流程：
公司產(chǎn)品僅用于科研接受訂單及樣品——RNA提取——RNA質(zhì)量檢測——樣品cDNA合成——定量試驗——數(shù)據(jù)分析——結(jié)果交付——售后服務(wù)。
產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 貨號 |
可調(diào)式易錯PCR試劑盒 | 100次 | YS-P013268 |
PCR反應(yīng)鑒定——PCR反應(yīng)條件:
循環(huán)步驟 | 溫度 | 時間 | 循環(huán)數(shù) |
預(yù)變性 | 94℃ | 5 min | 1 |
變性 | 94℃ | 10 sec | 30-40 |
退火 | 50-65℃ | 20 sec | 30-40 |
延伸 | 72℃ | 30 sec/kb | 30-40 |
終延伸 | 72℃ | 5 min | 1 |
組成及試劑配制:
1、酶標(biāo)板：一塊（96孔）
2、 標(biāo)準(zhǔn)品（凍干品）： 2瓶，請臨用前15分鐘內(nèi)配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml，蓋好后室溫靜置大約10分鐘，同時反復(fù)顛倒/搓動以助溶解，其濃度為200 U/L，然后做系列倍比稀釋（注：不要直接在板中進行倍比稀釋），分別配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標(biāo)準(zhǔn)品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述標(biāo)準(zhǔn)品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中，混勻即可，其余濃度以此類推。
3、 樣品稀釋液：1×20ml。
4、 檢測稀釋液A：1×10ml。
5、 檢測稀釋液B：1×10ml。
PCR反應(yīng)的特異性決定因素為：
①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合；
②堿基配對原則；
③Taq DNA聚合酶合成反應(yīng)的忠實性；
④靶基因的特異性與保守性。
其中引物與模板的正確結(jié)合是關(guān)鍵。引物與模板的結(jié)合及引物鏈的延伸是遵循堿基配對原則的。聚合酶合成反應(yīng)的忠實性及Taq DNA聚合酶耐高溫性，使反應(yīng)中模板與引物的結(jié)合(復(fù)性)可以在較高的溫度下進行，結(jié)合的特異性大大增加，被擴增的靶基因片段也就能保持很高的正確度。再通過選擇特異性和保守性高的靶基因區(qū)，其特異性程度就更高。
(2) 靈敏度高
PCR產(chǎn)物的生成量是以指數(shù)方式增加的，能將皮克(pg=10-12g)量級的起始待測模板擴增到微克(ug=10-6g)水平。能從100萬個細胞中檢出一個靶細胞；在病毒的檢測中，PCR的靈敏度可達3個RFU(空斑形成單位)；在細菌學(xué)中zui小檢出率為3個細菌。
(3) 簡便、快速
PCR反應(yīng)用耐高溫的Taq DNA聚合酶，一次性地將反應(yīng)液加好后，即在DNA擴增液和水浴鍋上進行變性-退火-延伸反應(yīng)，一般在2～4 小時完成擴增反應(yīng)。擴增產(chǎn)物一般用電泳分析，不一定要用同位素，無放射性污染、易推廣。
(4) 對標(biāo)本的純度要求低
不需要分離病毒或細菌及培養(yǎng)細胞，DNA 粗制品及總RNA均可作為擴增模板?？芍苯佑门R床標(biāo)本如血液、體腔液、洗嗽液、毛發(fā)、細胞、活PCR技術(shù)概論。
人白介素2受體β(IL-2Rβ)卡比多巴（標(biāo)準(zhǔn)品）ATP結(jié)合蛋白家族5抗體
人白介素3介導(dǎo)核因子(NFIL3)醋酸氯地孕酮（標(biāo)準(zhǔn)品）N-甲基嘌呤DNA糖基化酶
人白三烯C4(LTC4)醋酸氯地孕酮AU5 tag標(biāo)簽抗體
人白三烯D4(LTD4)鹽酸環(huán)沙星鈣離子ATP酶通道蛋白抗體
人白三烯E4(LTE4) 鹽酸環(huán)沙星（標(biāo)準(zhǔn)品）果桃α-L-阿拉伯呋喃糖苷酶抗體
人白彈性蛋白酶(HLE) 順苯磺阿曲庫銨脂肪炎癥因子Apelin抗體
人白調(diào)節(jié)素(LR) 醋酸可氫ATP酶通道蛋白抗體
人白共同抗原(LCA/CD45)醋酸可(標(biāo)準(zhǔn)品)ATP5A抗體
人白免疫球蛋白樣受體亞家族B成員4(LILRB4)丹曲林鈉即刻早期基因ARC抗體
人白血病抑制因子受體(LIFR)丹曲林鈉(標(biāo)準(zhǔn)品)ADP核糖基化因子6抗體
人甘氨酰tRNA合成酶(GARS) D-泛酸鈣,維生素B5芳香化酶抗體
人肝配蛋白A受體1 (EPHA1)脫羧氯雷他定/地氯雷他定Artemin抗體
人斑型POZ蛋白(SPOP)脫羧氯雷他定/地氯雷他定(標(biāo)準(zhǔn)品)alpha 1腎上腺素能受體A抗體
人血小板膜糖蛋白IV (GP4/CD36)地塞米松磷酸鈉血管緊張素Ⅱ-1型受體抗體
人神經(jīng)特異性烯化酶(NSE)地塞米松磷酸鈉（標(biāo)準(zhǔn)品）活化轉(zhuǎn)錄因子3抗體
人IV D組磷脂酶A2(PLA2G4D)磷酸奧司他韋血管緊縮素樣蛋白1抗體
可調(diào)式易錯PCR試劑盒CCL1/TCA3/I-309 嗜酸粒趨化蛋白CCL1抗體聚（甲基乙烯基共聚馬來酸） Mw ~216,000 to ~80,000, powder
CCL3/MIP-1 Alpha 巨噬炎性蛋白1α抗體四苯 99%
CCL4/MIP-1 Beta 巨噬炎性蛋白1β抗體軟脂酸 分析標(biāo)準(zhǔn)品，>99%(GC)
CCL5/RANTES T特異性趨化因子抗體苯基三氯化錫 分析標(biāo)準(zhǔn)品
CCL6/C10 嗜酸粒趨化蛋白CCL6抗體苯基三氯化錫 98%
CCL11/Eotaxin 1 嗜酸粒趨化蛋白抗體二甲基二烯基氯化銨/烯酰共聚物 10 wt. % in H2O
CCL12/MCP5 單核趨化蛋白5抗體對位紅 分析標(biāo)準(zhǔn)品,用于食品分析
CCL13/MCP-4 單核趨化蛋白4抗體巖芹酸 分析標(biāo)準(zhǔn)品,>99%(GC)
反應(yīng)五要素：
參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物：引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵，PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補的程度。理論上，只要知道任何一段模板DNA序列， 就能按其設(shè)計互補的寡核苷酸鏈做引物，利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴增。設(shè)計引物應(yīng)遵循以下原則：
①引物長度： 15-30bp，常用為20bp左右。
②引物擴增跨度： 以200-500bp為宜，特定條件下可擴增長至10kb的片段。
③引物堿基：G+C含量以40-60%為宜，G+C太少擴增效果不佳，G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC最好隨機分布，避免5個以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級結(jié)構(gòu)，避免兩條引物間互補，特別是3'端的互補，否則會形成引物二聚體，產(chǎn)生非特異的擴增條帶。
⑤引物3'端的堿基，特別是最末及倒數(shù)第二個堿基，應(yīng)嚴(yán)格要求配對，以避免因末端堿基不配對而導(dǎo)致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點， 被擴增的靶序列最好有適宜的酶切位點， 這對酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性：引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫的其它序列無明顯同源性。
引物量：每條引物的濃度0.1～1umol或10～100pmol，以引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好，引物濃度偏高會引起錯配和非特異性擴增，且可增加引物之間形成二聚體的機會。
