細(xì)胞凋亡染色試劑盒(細(xì)胞Hoechst染色)正在熱銷的產(chǎn)品：果糖-1,6-二磷酸酶(FBP)/果糖-1,6-二磷酸酯酶測(cè)試盒 規(guī)格：100管/96樣 測(cè)試方法：微量法
半乳糖含量測(cè)試盒 規(guī)格：50管/48樣 測(cè)試方法：高效液相色譜法
乳糖含量測(cè)試盒 規(guī)格：50管/48樣 測(cè)試方法：高效液相色譜法
麥芽糖含量測(cè)試盒 規(guī)格：50管/48樣 測(cè)試方法：高效液相色譜法
葡萄糖含量測(cè)試盒 規(guī)格：5
中文名稱：細(xì)胞凋亡染色試劑盒(細(xì)胞Hoechst染色)
英文名稱：Hoechst Staining Kit
產(chǎn)品規(guī)格：100次
貨號(hào)：FS-X9523
產(chǎn)品介紹:
本試劑盒提供了一種經(jīng)典而又快速簡(jiǎn)便的細(xì)胞凋亡檢測(cè)方法。細(xì)胞發(fā)生凋亡時(shí)，染色質(zhì)會(huì)固縮。所以Hoechst 33258染色后，在熒光顯微鏡下觀察，正常細(xì)胞的細(xì)胞核呈正常的藍(lán)色，而凋亡細(xì)胞的細(xì)胞核會(huì)呈致密濃染，或呈碎塊狀致密濃染，顏色有些發(fā)白。 試劑盒特點(diǎn)： 1. 只需25分鐘即可完成細(xì)胞凋亡檢測(cè)的整個(gè)過(guò)程。 2. 本試劑盒提供了固定液，染色液，及抗熒光淬滅封片液。 3. 本試劑盒對(duì)貼壁細(xì)胞，懸浮細(xì)胞和組織切片均適用。 4. 足夠檢測(cè)100個(gè)樣品。 試劑盒組份： 固定液————————————50ml Hoechst 33258染色液 —————50ml 抗熒光淬滅封片液 —————— 5ml |
培養(yǎng)操作步驟：
1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無(wú)菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；
2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個(gè)平皿可放置2-3片）；
3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí)；
4．將經(jīng)過(guò)計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；
5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當(dāng)貼壁細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí)，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)。
實(shí)驗(yàn)報(bào)告：
一、分離與培養(yǎng)： 1、無(wú)菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大小； 2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置； 3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化； 4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)； 5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)； | 二、免疫熒光鑒定： 1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min； 2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min； 3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min； 4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜； 5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h； 6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。 |
操作規(guī)程
1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔，通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞，細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000～10000個(gè)細(xì)胞（具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目，需根據(jù)細(xì)胞的大小，細(xì)胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).
2、.加入適當(dāng)濃度的0～10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時(shí)，使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。
7、酶標(biāo)儀在570nm 波長(zhǎng)處檢測(cè)每孔的光密度（如無(wú)570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。
8、結(jié)果分析
a、細(xì)胞的存活率：將各測(cè)試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無(wú)細(xì)胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無(wú)細(xì)胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細(xì)胞的OD 值，C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =（加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD）×100
b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)
白介素12(IL-12/P40)elisa檢測(cè)試劑盒 英文名稱：IL-12/P40 ELISA Kit，IL-12/P40，
β羥丁酸(β-OHB)elisa檢測(cè)試劑盒 英文名稱：β-OHB ELISA Kit，β-OHB，
β2糖蛋白(β2-GP)elisa檢測(cè)試劑盒 英文名稱：β2-GP ELISA Kit，β2-GP，
vav3核苷酸交換因子(VAV3)elisa檢測(cè)試劑盒 英文名稱：VAV3 ELISA Kit，VAV3，
S100鈣結(jié)合蛋白A12/鈣粒蛋白C(S100A12)elisa檢測(cè)試劑盒 英文名稱：S100A12 ELISA Kit，S100A12，
人抗利尿激素/血管加壓素/加壓素(ADH/VP/AVP)elisa檢測(cè)試劑盒 英文名稱：ADH/VP/AVP ELISA Kit，ADH/VP/AVP，
巨噬細(xì)胞來(lái)源的趨化因子(MDC/CCL22)elisa檢測(cè)試劑盒 英文名稱：MDC/CCL22 ELISA Kit，MDC/CCL22，
人抗肺泡基底膜抗體(ABM-Ab)elisa檢測(cè)試劑盒 英文名稱：ABM-Ab ELISA Kit，ABM-Ab，
膠質(zhì)細(xì)胞源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子(GDNF)elisa檢測(cè)試劑盒 英文名稱：GDNF ELISA Kit，GDNF，
幾丁質(zhì)酶3樣蛋白1(YKL-40/CHI3L1)elisa檢測(cè)試劑盒 英文名稱：YKL-40/CHI3L1 ELISA Kit，YKL-40/CHI3L1，
基質(zhì)金屬蛋白酶13(MMP-13)elisa檢測(cè)試劑盒 英文名稱：MMP-13 ELISA Kit，MMP-13，
環(huán)磷酸鳥(niǎo)苷(cGMP)elisa檢測(cè)試劑盒 英文名稱：cGMP ELISA Kit，cGMP，
含patatin樣磷脂酶域3(PNPLA3/ADPN/C22orf20)elisa檢測(cè)試劑盒 英文名稱：PNPLA3/ADPN/C22orf20 ELISA Kit，PNPLA3/ADPN/C22orf20，
骨鈣素(Osteocalcin)elisa檢測(cè)試劑盒 英文名稱：Osteocalcin ELISA Kit，Osteocalcin，
高密度脂蛋白(HDL)elisa檢測(cè)試劑盒 英文名稱：HDL ELISA Kit，HDL，
鈣轉(zhuǎn)運(yùn)ATP酶2C型成員1(ATP2C1)elisa檢測(cè)試劑盒 英文名稱：ATP2C1 ELISA Kit，ATP2C1，
生長(zhǎng)激素釋放肽(Ghrelin)elisa檢測(cè)試劑盒 英文名稱：Ghrelin ELISA Kit，Ghrelin，
細(xì)胞凋亡染色試劑盒(細(xì)胞Hoechst染色)辛基三嗪酮相關(guān)物質(zhì)C標(biāo)準(zhǔn)品 規(guī)格:20mg 英文名稱：
氟替卡松丙酸酯相關(guān)物質(zhì)混合物標(biāo)準(zhǔn)品 規(guī)格:25mg 英文名稱：
氟替卡松丙酸酯分離度用混合物標(biāo)準(zhǔn)品 規(guī)格:25mg 英文名稱：
醋酸戈雜質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)品 規(guī)格:10mg 英文名稱：
重組蛋白A標(biāo)準(zhǔn)品 規(guī)格:ea 英文名稱：
卡巴拉汀酒石酸鹽K-異構(gòu)體 規(guī)格:20mg 英文名稱：
群勃龍醋酸酯系統(tǒng)適用性混合物 規(guī)格:30mg 英文名稱：
溶液用于生物測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)品 規(guī)格:1ml 英文名稱：
胺碘酮相關(guān)物質(zhì)E標(biāo)準(zhǔn)品 規(guī)格:25mg 英文名稱：Amiodarone Related Compound E
尼泊金甲酯標(biāo)準(zhǔn)品 規(guī)格:125mg 英文名稱：Methylparaben
