培養(yǎng)操作步驟:
1.公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;
2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個平皿可放置2-3片);
3.在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí);
4.將經(jīng)過計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中;
5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當(dāng)貼壁細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí),將培養(yǎng)板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測。
中文名稱:HDAC6抑制劑(Tubacin)
英文名稱:Tubacin
產(chǎn)品規(guī)格:1mL(10mM)|1mg|5mg|10mg|20mg
貨號:FS-X10744
產(chǎn)品介紹:
Tubacin是一種有效的,選擇性的HDAC6抑制劑,IC50值為4nM,大約是對HDAC1的350倍。 注:本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! 號:537049-40-4 純度:98.87% 分子量:721.86 儲存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內(nèi)使用。 |
實(shí)驗(yàn)報(bào)告:
一、分離與培養(yǎng): 1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大??; 2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置; 3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化; 4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng); 5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng); | 二、免疫熒光鑒定: 1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時(shí),棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min; 2、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min; 3、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min; 4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜; 5、PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h; 6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。 |
巴氏醋桿菌擬南介金屬離子轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白(抗原)Anti-FUT3 Antibody人癌標(biāo)志物-CA153
大腸埃希菌黏膜選址(抗原)Anti-FUNDC1 Antibody人癌標(biāo)志物-CA153
異常威克漢姆酵母髓鞘相關(guān)糖蛋白a/b(抗原)Anti-G3BP2 Antibody人卵巢癌標(biāo)志物CA125
金針菇髓鞘相關(guān)糖蛋白(抗原)Anti-FZD9 Antibody人卵巢癌標(biāo)志物CA125
大豆慢生根瘤菌基質(zhì)金屬蛋白-1(小鼠抗原)Anti-G3BP1 Antibody人甲種胎兒球蛋白/甲胎蛋白(AFP)
Bacillus aryabhattai 中腦核仁蛋白1(抗原)Anti-GAB2 Antibody人甲種胎兒球蛋白/甲胎蛋白(AFP)
細(xì)麗擬盤多毛孢中腦核仁蛋白2(抗原)Anti-GABARAPL2 Antibody人癌胚抗原(CEA/CD66)
蘋果鏈格孢菌一種應(yīng)激分子抗原Anti-GABBR2 Antibody人癌胚抗原(CEA/CD66)
谷棒桿菌多藥耐藥相關(guān)蛋白3(抗原)Anti-GABRA6 Antibody人基質(zhì)金屬蛋白抑制因子4(TIMP-4)
蠟葉散囊菌多藥耐藥相關(guān)蛋白1(抗原)Anti-GABRA4 Antibody人基質(zhì)金屬蛋白抑制因子4(TIMP-4)
木糖氧化無色桿菌肺耐藥相關(guān)蛋白(抗原)Anti-GABRA3 Antibody人基質(zhì)金屬蛋白抑制因子3(TIMP-3)
紅色鏈孢囊菌間皮(多肽抗原)Anti-GABRB1 Antibody人基質(zhì)金屬蛋白抑制因子3(TIMP-3)
小柄凸臍蠕孢MSH2抗原Anti-GABRE Antibody人基質(zhì)金屬蛋白抑制因子2(TIMP-2)
節(jié)桿菌神經(jīng)激肽B受體(抗原)Anti-GABRD Antibody人基質(zhì)金屬蛋白抑制因子2(TIMP-2)
總狀毛霉低分子量神經(jīng)絲蛋白(抗原)Anti-GABRG1 Antibody人抑瘤M(OSM)
敏捷食菌中分子量神經(jīng)絲蛋白(抗原)Anti-GAK Antibody人抑瘤M(OSM)
溶質(zhì)載體蛋白家族20成員2抗體地衣形芽孢桿菌人NK/T細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞
線粒體二羧載體蛋白抗體Herbaspirillumcanariense羅猴胎腎細(xì)胞
溶質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白家族44成員1抗體Herbaspirillumaurantiacum高轉(zhuǎn)移人肝癌細(xì)胞
突觸結(jié)合蛋白1抗體Herbaspirillumsoli白介-2轉(zhuǎn)染耐VP16絨癌細(xì)胞
HDAC6抑制劑(Tubacin)球黑孢 1-苯基異喹啉白介3
異常畢赤酵母 2-乙?;?3-乙基吡白介5
蠟樣芽孢桿 5-甲氧基-2-萘滿酮口蹄疫病
釀酒酵母 4-三氟甲酰繆勒管抑制物質(zhì);抗繆勒管
水稻紋枯?。⒖萁z核) 三羥甲基烷基烯酯新孢子蟲
黑曲霉 3,5-雙(三氟甲基)布病
阪崎氏年輕泰坦桿(阪崎克羅諾桿) 3,5-二(三氟甲基)苯口瘡病抗體
亮白曲霉 1--3,5-雙(三氟甲基)苯布魯氏桿病抗原
戊糖乳桿 1,3-雙(三氟甲基)-5-溴苯痘病抗體
嗜熱脂肪地球芽胞桿 4-(三氟甲基)一氧化氮
克魯斯假絲酵母 1,5-二氟-2,4-二N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖
葡枝根霉 鄰硝基對叔丁基透明質(zhì)
臘狀芽胞桿 1,1,3,3-四甲基二硅氧烷透明質(zhì)
大腸埃希 2,3-二甲苯膽固
土味鏈霉 1-溴-2,4,5-三氟苯
操作規(guī)程
1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔,通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個細(xì)胞,細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000~10000個細(xì)胞(具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目,需根據(jù)細(xì)胞的大小,細(xì)胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).
2、.加入適當(dāng)濃度的0~10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時(shí),使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。
7、酶標(biāo)儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度(如無570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。
8、結(jié)果分析
a、細(xì)胞的存活率:將各測試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,無細(xì)胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無細(xì)胞),各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細(xì)胞的OD 值,C 為對照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =(加藥細(xì)胞OD/對照細(xì)胞OD)×100
b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)