培養(yǎng)操作步驟:
1.公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;
2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個(gè)平皿可放置2-3片);
3.在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí);
4.將經(jīng)過計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中;
5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當(dāng)貼壁細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí),將培養(yǎng)板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)。
中文名稱:天狼星紅染色液
英文名稱:
產(chǎn)品規(guī)格:2×50ml|2×100ml
貨號(hào):FS-X9964
產(chǎn)品介紹:
用途: 膠原纖維染色、分型 注意事項(xiàng): 偏振光顯微鏡觀察,Ⅰ型膠原纖維呈橙黃色或紅色,Ⅲ型膠原纖維呈綠色,主要成分還包括Mayer蘇木素。 儲(chǔ)存條件:4℃,避光,12個(gè)月 |
實(shí)驗(yàn)報(bào)告:
一、分離與培養(yǎng): 1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大??; 2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置; 3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化; 4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng); 5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng); | 二、免疫熒光鑒定: 1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時(shí),棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min; 2、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min; 3、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min; 4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜; 5、PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h; 6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。 |
匍枝根霉原變種NK表面抑制性受體CD94抗體Human CKAP4 山羊血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)免疫試劑盒
白僵菌淋巴功能相關(guān)抗原-3抗體Human CKS2 山羊血管緊張轉(zhuǎn)化(ACE)免疫試劑盒
香菇—五香1號(hào)皮膚T虜獲趨化因子抗體Human Claudin 23 山羊血管緊張Ⅱ(ANG-Ⅱ)免疫試劑盒
釀酒酵母補(bǔ)體C3a過敏抗體Human CREB1 山羊血管緊張Ⅰ(ANG-Ⅰ)免疫試劑盒
猴假單胞菌巨噬炎癥蛋白-1γ抗體Human CREB3L2 山羊褪黑(MT)免疫試劑盒
奇異球菌神經(jīng)粘附分子配體1抗體Human CREST 山羊銅藍(lán)蛋白(CP)免疫試劑盒
盤孢菌8號(hào)染色體開放閱讀框30a抗體Human CRMP1 山羊瘦(LEP)免疫試劑盒
釀酒酵母色P450 11A1抗體Human Claudin 7 山羊生長激釋放多肽(GHRP)免疫試劑盒
鍺栓孔菌肉堿棕櫚?;D(zhuǎn)移1A抗體Human CLEC10A/CD301 山羊生長激(GH)免疫試劑盒
芽胞桿菌分化周期CDC42蛋白抗體Human CPOX(Coproporphyrinogen oxidase) 山羊狀腺原(T3)免疫試劑盒
中國臺(tái)灣根霉磷化分化周期CDC42蛋白抗體Human CIN85 山羊熱休克蛋白70(HSP-70)免疫試劑盒
蘋果落葉交鏈孢霉環(huán)化相關(guān)蛋白CAP-2抗體Human CREB1 山羊固(ALD)免疫試劑盒
假單胞菌屬階段特異性胚胎表面抗原-1抗體Human CKAP4 山羊前列腺內(nèi)過氧化物合1(前列腺G / H合和環(huán)氧合)(PTGS1)免疫試劑盒
硬結(jié)節(jié)桿菌20號(hào)染色體開放閱讀框202抗體Human CKS2 山羊前列腺G/H合2(PTGS2)免疫試劑盒
根瘤菌粘膜相關(guān)上皮趨化因子28抗體Human Cortactin 山羊前列腺E2(PGE2)免疫試劑盒
梨形毛霉癌胚抗原單克抗體(包被)Human Claudin 23 山羊皮質(zhì)(Cortisol)免疫試劑盒
熱帶假絲酵母Candida│tropicalis 質(zhì)量規(guī)格:>95%,BRQ熱科克斯體1試劑盒輪環(huán)藤堿
刺囊殼Ascotricha│sp. 質(zhì)量規(guī)格:>50%,BSP選擇試劑盒羅紅霉
匍枝根霉(黑根霉)Rhizopus│stolonifer 質(zhì)量規(guī)格:>98%,BRP物質(zhì)受體試劑盒吉堿
天狼星紅染色液黃桿 甲基四氫苯二甲酐(4:6)隱球
炭疽芽孢桿 1-苯基-4-甲基-3-吡唑烷酮B類清道夫受體2
盤孢屬 3,3-二甲基-2,3-二氫-1H-茚-1-酮白介28B
孢小克銀漢霉原變種 溶劑橙2肽基精脫亞氨4
枯草芽孢桿 2,4-二吡啶微粒體甘油三酯轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白大亞基
泰國鹽球 對(duì)甲苯磺酰甘甲酯肝X受體β
戴爾根霉 3-溴-5--2-氟吡啶法尼酯X受體
泰國放線短鏈孢 鄰甲苯基縮水甘油酰基;膽固酰基轉(zhuǎn)移
根瘤 肼單鹽鹽趨化因子c-c-基元配體19
弗蘭克氏 異煙酰乙乙酯α-pro-GDNF
蘇云金芽孢桿蠟螟亞種 1-β-pro-GDNF
賴芽胞桿屬 2-溴-1-(2,4-二基)乙酮豬肉銚蟲
中華靈芝(紫芝) 5-氟-2-甲氧基煙著絲粒蛋白
瓶形毛殼 4-溴-3-氟苯磺酰狼瘡抗凝IgG抗體
海洋桿 α--3,4-二苯乙酮狼瘡抗凝IgM抗體
操作規(guī)程
1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔,通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞,細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000~10000個(gè)細(xì)胞(具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目,需根據(jù)細(xì)胞的大小,細(xì)胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).
2、.加入適當(dāng)濃度的0~10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時(shí),使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。
7、酶標(biāo)儀在570nm 波長處檢測(cè)每孔的光密度(如無570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。
8、結(jié)果分析
a、細(xì)胞的存活率:將各測(cè)試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,無細(xì)胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無細(xì)胞),各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細(xì)胞的OD 值,C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =(加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD)×100
b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)