產(chǎn)品介紹:
用途: 常規(guī)組織切片HE染色 注意事項(xiàng): 蘇木素染色中l(wèi)eagene推薦采用該試劑。無(wú)氧化膜,細(xì)胞核染色質(zhì)著色深而細(xì)微,臨床上常替代Harris蘇木素染色液,染色時(shí)間一般3-5分鐘。 儲(chǔ)存條件:室溫,12個(gè)月 |
中文名稱(chēng):改良Lillie-Mayer蘇木素染色液
英文名稱(chēng):
產(chǎn)品規(guī)格:100ml|500ml
貨號(hào):FS-X10044
實(shí)驗(yàn)報(bào)告:
一、分離與培養(yǎng): 1、無(wú)菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大小; 2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置; 3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化; 4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng); 5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng); | 二、免疫熒光鑒定: 1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí),棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min; 2、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min; 3、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min; 4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜; 5、PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h; 6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀(guān)察圖像并拍照。 |
操作規(guī)程
1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔,通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞,細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000~10000個(gè)細(xì)胞(具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目,需根據(jù)細(xì)胞的大小,細(xì)胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).
2、.加入適當(dāng)濃度的0~10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時(shí),使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。
7、酶標(biāo)儀在570nm 波長(zhǎng)處檢測(cè)每孔的光密度(如無(wú)570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。
8、結(jié)果分析
a、細(xì)胞的存活率:將各測(cè)試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,無(wú)細(xì)胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無(wú)細(xì)胞),各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細(xì)胞的OD 值,C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =(加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD)×100
b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)
培養(yǎng)操作步驟:
1.公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無(wú)菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;
2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個(gè)平皿可放置2-3片);
3.在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí);
4.將經(jīng)過(guò)計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中;
5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當(dāng)貼壁細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí),將培養(yǎng)板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)。
釀酒酵母C型凝集結(jié)構(gòu)域家族1成員B抗體Human EFHD2(EF-hand domain-containing protein D2) 人抗磷脂酰抗體(IgG)免疫試劑盒
昆明腐霉陽(yáng)離子通道相關(guān)蛋白β亞基抗體Human C9orf140(Protein C9orf140) 人抗磷脂酰絲抗體(APSA)免疫試劑盒
瑞士乳桿菌特異性蛋白57抗體Human TNFRSF12A(Tumor necrosis factor receptor superfamily member 12A) 人抗磷脂酰甘油抗體(IgM)免疫試劑盒
產(chǎn)蛋下降綜合征病L選擇抗體Human TEC(Tyrosine-protein kinase Tec) 人抗磷脂酰甘油抗體(IgG)免疫試劑盒
毛革蓋菌CD53抗體Human CDH6(Cadherin-6) 人抗磷脂酰甘油抗體(IgA)免疫試劑盒
尖孢鐮孢死亡同源蛋白6抗體Human MC5R(Melanocortin receptor 5) 人抗磷脂??贵w(IgM)免疫試劑盒
葡萄座腔菌屬離子通道KB抗體Human MSH2(DNA mismatch repair protein Msh2) 人抗磷脂??贵w(IgG)免疫試劑盒
毛霉C型凝集結(jié)構(gòu)域家族12成員A抗體Human ARC(Activity-regulated cytoskeleton-associated protein) 人抗磷脂??贵w(IgA)免疫試劑盒
淺藍(lán)灰曲霉離子通道蛋白2抗體Human PDX1(Pancreas/duodenum homeobox protein 1) 人抗磷壁抗體(TA)免疫試劑盒
BacillusC型凝集結(jié)構(gòu)域家族9成員A抗體Human C19orf10(UPF0556 protein C19orf10) 人抗鏈球菌溶血O抗體(IgM)免疫試劑盒
無(wú)菌藥品 無(wú)菌檢查(陰性) C型凝集結(jié)構(gòu)域家族9成員A抗體Human UBE3A(Ubiquitin-protein ligase E3A) 人抗鏈球菌溶血O抗體(IgG)免疫試劑盒
海氏腸球菌腦鈣粘蛋白12抗體Human ENTPD1(Ectonucleoside triphosphate diphosphohydrolase 1) 人抗鏈激(SK)抗體免疫試劑盒
pK18mobsacB鈣粘蛋白20抗體Human MAPK8(Mitogen-activated protein kinase 8) 人抗連接IgG抗體免疫試劑盒
豇豆輪紋病菌鈣粘蛋白29抗體Human CHIA(Acidic mammalian chitinase) 人抗利尿激V2受體/精加壓受體2(AVPR2)免疫試劑盒
*蛹蟲(chóng)草(北冬蟲(chóng)夏草、北蟲(chóng)草)CD200受體抗體Human AVPR1B(Vasopressin V1b receptor) 人抗利尿激/血管加壓/精加壓(ADH/VP/AVP)免疫試劑盒
小白蘑菇鈣粘蛋白26抗體Human LILRB2(Leukocyte immunoglobulin-like receptor subfamily B member 2) 人抗類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎核抗原抗體(RANA)免疫試劑盒
香菇Lentinula│edodes (Berk.) Pegler 質(zhì)量規(guī)格:ARⅠ型前膠原C末端肽試劑盒24-乙酰澤瀉F
: Be2/50資源名稱(chēng): 弗勞地拘櫞桿菌 質(zhì)量規(guī)格:BS(生物染色級(jí))Ⅰ型膠原交聯(lián)羧基末端肽試劑盒澤瀉B
灰略紅鏈霉菌Streptomyces│griseorubens 質(zhì)量規(guī)格:分析標(biāo)準(zhǔn)品Ⅰ型膠原N末端肽試劑盒25-脫澤瀉A;澤瀉G
改良Lillie-Mayer蘇木素染色液pDC316 2-(乙基)苯Ia
云芝 1,4-二芐氧基苯拓?fù)洚悩?gòu)10
灰樹(shù)花孔 3-(二乙基)-1,2-二金黃色葡萄球腸D
土壤薄層 畢卡魯間隙連接蛋白43
總狀毛霉 4-甲基-N-苯基苯乙二Ⅰ
Cerrena unicolor 4-二甲氨基甲狀腺反應(yīng)基因
薄層屬 2--3,6-二氟芐溴Tolloid樣蛋白1
白僵 4-乙基腫瘤調(diào)節(jié)蛋白1
旋絲毛殼 2,6-二-7-脫氮腫瘤調(diào)節(jié)蛋白
黃白生叢赤殼 4-溴甲酯硬纖毛蛋白
蘇云金芽孢桿 2-基呋喃固類(lèi)生成因子1
尼泊爾正青霉 雙三氟磺酰亞鋰肽基精脫亞氨
嘴突凸臍蠕孢 L-(-)-蘋(píng)果二甲酯Ⅺa
枯草芽孢桿 衣康二甲酯IXa
塔賓曲霉 3,4-二氨基噻吩XIIIa