中文名稱:鞭毛染色液(Leifson法)
英文名稱:
產(chǎn)品規(guī)格:3×50ml
貨號(hào):FS-X10115
產(chǎn)品介紹:
用途: 鞭毛染色 注意事項(xiàng): 又叫利夫森氏染色法,主要由鞣酸、堿性品紅等組成,染色后菌體和鞭毛呈紅色。 儲(chǔ)存條件:室溫,避光,12個(gè)月 |
培養(yǎng)操作步驟:
1.公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;
2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個(gè)平皿可放置2-3片);
3.在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí);
4.將經(jīng)過計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中;
5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當(dāng)貼壁細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí),將培養(yǎng)板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)。
實(shí)驗(yàn)報(bào)告:
一、分離與培養(yǎng): 1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大??; 2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置; 3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化; 4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng); 5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng); | 二、免疫熒光鑒定: 1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí),棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min; 2、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min; 3、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min; 4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜; 5、PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h; 6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。 |
操作規(guī)程
1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔,通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞,細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000~10000個(gè)細(xì)胞(具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目,需根據(jù)細(xì)胞的大小,細(xì)胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).
2、.加入適當(dāng)濃度的0~10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時(shí),使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。
7、酶標(biāo)儀在570nm 波長(zhǎng)處檢測(cè)每孔的光密度(如無570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。
8、結(jié)果分析
a、細(xì)胞的存活率:將各測(cè)試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,無細(xì)胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無細(xì)胞),各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細(xì)胞的OD 值,C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =(加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD)×100
b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)
灰黃青霉DH5α大腸桿菌菌體蛋白抗體Human MSC(Musculin) 人B受體相關(guān)蛋白31(BCAP31)免疫試劑盒
谷棒桿菌磷化絲裂原活化蛋白激1/2抗體Human CENPU (Centromere protein U) 人B生長(zhǎng)因子(BCGF)免疫試劑盒
釀酒酵母上皮粘附分子抗體Human MKL2 (MKL/myocardin-like protein 2) 人B淋巴瘤因子6(Bcl6)免疫試劑盒
香菇屬酪蛋白激受體B2抗體Human MOAP1 (Modulator of apoptosis 1) 人B淋巴瘤-XL(Bcl-xl)免疫試劑盒
少孢酵母表皮生長(zhǎng)因子抗體Human MAZ (Myc-associated zinc finger protein) 人B連接蛋白(BLNK)免疫試劑盒
*雞油菌都不能訂購(gòu)表皮生長(zhǎng)因子受體3抗體Human MOB2 (MOB kinase activator 2) 人B活化因子受體(BAFF-R)免疫試劑盒
突臍蠕孢菌酪蛋白激A4受體抗體Human MDGA1 (MAM domain-containing glycosylphosphatidylinositol anchor protein 1) 人B活化因子(BAFF)免疫試劑盒
雀黃鏈霉菌上皮鈣粘附分子抗體Human MPHOSPH10 (U3 small nucleolar ribonucleoprotein protein MPP10) 人Bκ 輕肽基因增強(qiáng)子核因子抑制因子ε(NFKBIE)免疫試劑盒
鏈格孢紅生成受體抗體Human PRX(Periaxin) 人B群鏈球菌多糖抗體(IgG)免疫試劑盒
克魯斯假絲酵母腦啡肽抗體Human MKX(Homeobox protein Mohawk) 人B-淋巴趨化因子1(BLC-1/CXCL13)免疫試劑盒
楊齒白木層孔菌EID2蛋白抗體Human MARCO (Macrophage receptor MARCO) 人B淋巴抗原(CD20)免疫試劑盒
大腸桿菌上皮粘附分子抗體Human MST1R(Macrophage-stimulating protein receptor) 人blca-4 免疫試劑盒
淡紫擬青霉紅膜相關(guān)蛋白ERMAP抗體Human M6PR (Cation-dependent mannose-6-phosphate receptor) 人blca-1 免疫試劑盒
菜豆間座殼腺樣癌特異性相關(guān)抗原EMC1抗體Human SEMG1(Semenogelin-1) 人Bcl-2樣蛋白1(BCL2L1)免疫試劑盒
擬粉紅鎖擲孢酵母腺樣癌特異性相關(guān)抗原EMC1抗體Human MAD1L1(Mitotic arrest deficient 1-like protein 1) 人B7-H4 免疫試劑盒
斯氏梭菌硫軟骨蛋白多糖3抗體Human M6PR (Cation-dependent mannose-6-phosphate receptor) 人A組鏈球菌菌壁多糖抗體(ASP)免疫試劑盒
綠色木霉Trichoderma│viride 質(zhì)量規(guī)格:100μg/ml,u=3%華蟾酥基
熒光假單胞菌生物型FPseudomonas│fluorescens biotype F 質(zhì)量規(guī)格:分析標(biāo)準(zhǔn)品木蘭脂
多噬伯克霍爾德氏菌Burkholderia│multivorans 質(zhì)量規(guī)格:分析標(biāo)準(zhǔn)品,≥99.5%(GC)異飛薊賓
鞭毛染色液(Leifson法)秀珍菇 2-氟苯頻呢酯香豆-3-羥化
黑曲霉 3--2-中性轉(zhuǎn)化
氣微 4'-羥基-3'-乙酮堿性磷
枯草芽孢桿 4,6-二-5-嘧啶羧甘油三酯
綠粘帚霉 反式-4-乙基環(huán)己基酮脫氫
*匍枝根霉 5-溴-1H-吡唑[3,4-B]吡啶乙脫氫
黃玫瑰色諾卡氏 2-氟-5-溴吡啶-3-甲蘋果合
冷海水黃桿 3-肼基鹽鹽脯氧化
洋蔥伯克霍爾德 2,6-二-3-基-4-甲基 吡啶氫ATP
扶桑本森頓酵母 2--3-氟苯甲纖維蛋白
粗糙脈孢 5--2-嘧啶合成
解脂亞羅酵母 3,5-二甲黃質(zhì)脫氫
草菇 [羥基(4-苯丁基)氧膦基]乙芐酯酮脫氫
鹽水球形 3-溴-2-甲氧基苯甲蘋果脫氫
枯草芽孢桿 N,2-二甲基芐蘋果合