培養(yǎng)操作步驟:
1.公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;
2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個(gè)平皿可放置2-3片);
3.在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí);
4.將經(jīng)過計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中;
5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當(dāng)貼壁細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí),將培養(yǎng)板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測。
中文名稱:釕紅染色液
英文名稱:
產(chǎn)品規(guī)格:10ml
貨號(hào):FS-X10159
產(chǎn)品介紹:
用途: 在植物病蟲害組織切品染色中,可將宿主植物組織中菌絲體和孢子染成紅色。 注意事項(xiàng): 釕紅(Ruthenium Red)分子式為Ru3O2Cl6.14(NH3),號(hào)為11103-72-3,分子量為786.35,外觀為紅色晶體,可用做電壓敏感的鈣離子通道抑制劑 儲(chǔ)存條件:室溫,避光,12個(gè)月 |
實(shí)驗(yàn)報(bào)告:
一、分離與培養(yǎng): 1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大小; 2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置; 3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化; 4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng); 5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng); | 二、免疫熒光鑒定: 1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時(shí),棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min; 2、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min; 3、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min; 4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜; 5、PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h; 6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。 |
產(chǎn)色鏈霉菌富含亮跨膜纖連蛋白1抗體Human ZNF571 雞腫瘤壞死因子β(TNF-β)免疫試劑盒
三葉草根瘤菌富含亮跨膜纖連蛋白2抗體Human ZNF346 雞腫瘤壞死因子α(TNF-α)免疫試劑盒
馬賽菌富含亮跨膜纖連蛋白3抗體Human ZNF34 雞脂肪甘油三酯脂(ATGL)免疫試劑盒
微扁沃利雅炭皮菌牛纖維蛋白原抗體Human ZNF446 雞脂多糖/內(nèi)(LPS)免疫試劑盒
異常漢遜酵母異常變種FAM172A蛋白抗體Human RBP1(Retinol-binding protein 1) 雞脂蛋白脂(LPL)免疫試劑盒
草木樨中華根瘤菌磷化粘著斑激抗體Human ZNF557 雞孕激/孕(PROG)免疫試劑盒
茶新菇磷化粘著斑激抗體Human ZNF35 雞游離脂肪(FFA)免疫試劑盒
乙假絲酵母磷化脆性組三聯(lián)體抗體Human ZNF593 雞抑制B(INH-B)免疫試劑盒
枯草芽孢桿菌磷化FRA-1蛋白抗體Human ZNF571 雞抑制A(INH-A)免疫試劑盒
枯草芽孢桿菌枯草亞種磷化Fas相關(guān)死亡結(jié)構(gòu)域蛋白抗體Human ZNF460 雞乙酰羧化α(ACACA)免疫試劑盒
西蕃蓮莖基腐病磷化堿性成纖維生長因子受體1抗體Human ZNF470 雞胰高血糖(GC)免疫試劑盒
多根硬皮馬勃磷化叉頭蛋白家族抗體Human ZNF48 雞胰島樣生長因子2(IGF2)免疫試劑盒
炭疽芽胞桿菌磷化叉頭蛋白3A抗體Human ZNF486 雞胰島樣生長因子1(IGF-1)免疫試劑盒
谷棒桿菌Ⅲ型磷化叉頭蛋白3A抗體Human ZNF483 雞胰島(INS)免疫試劑盒
果生鏈核盤菌磷化叉頭蛋白3A抗體Human ZNF488 雞一氧化氮(NO)免疫試劑盒
玉蜀黍平臍蠕孢*磷化叉頭蛋白家族1抗體Human ZNF394 雞延伸因子Tu,線粒體(TUFM)免疫試劑盒
鏈霉菌Streptomyces│sp. 質(zhì)量規(guī)格:分析標(biāo)準(zhǔn)品,99.9%3-O-β-D-葡萄糖( 1→4)-[
茄鐮孢Fusarium│solani 質(zhì)量規(guī)格:Standard for GC,>99.0%(GC)3-O-b-D-葡萄糖( 1→4)-[
: Cs資源名稱: 百日咳博德特氏菌 質(zhì)量規(guī)格:分析標(biāo)準(zhǔn)品3-O-β-D-葡萄糖( 1→3)- a
釕紅染色液淡紫擬青霉 2-基-4,4-二乙氧基丁乙酯C3H木質(zhì)合成
病研所芽孢桿 2-甲基-5-硝基煙乙酯ACC氧化
冷湖黃桿 4-羥基嘧啶乙酰羧化還原
球孢白僵 2,4-二-5-嘧啶甲乙酯乙酰羧化還原
釀酒酵母 咪唑并[1,5-A]吡啶-7-甲乙酯核二磷激
總狀共頭霉 2-氟芐肼谷蛋白
扭托甲基桿 1-甲基-2-吡咯乙甲酯谷氨酰
大球蓋菇 5-羥基-2-甲氧基吡啶水通道蛋白
土曲霉 吉法酯水通道蛋白
齒孢青霉 2-苯氧烷磺酰苯堿性磷
鮑魚側(cè)耳 甲基雙烯雙酮碳酐
冷海水黃桿 1-二甲氨基-2-甲基-3-戊酮1-氨基環(huán)烷1-羧合成
短密青霉 N-(2-吡啶基)乙1-氨基環(huán)烷-1-羧氧化
鞘氨單胞屬 4-甲基-5-咪唑甲乙酯α-乳白蛋白
錐形赤褶菇 單丁基氧化錫β-乳白蛋白
操作規(guī)程
1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔,通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞,細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000~10000個(gè)細(xì)胞(具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目,需根據(jù)細(xì)胞的大小,細(xì)胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).
2、.加入適當(dāng)濃度的0~10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時(shí),使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。
7、酶標(biāo)儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度(如無570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。
8、結(jié)果分析
a、細(xì)胞的存活率:將各測試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,無細(xì)胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無細(xì)胞),各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細(xì)胞的OD 值,C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =(加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD)×100
b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)