T4 DNA Ligase
商品屬性:
產(chǎn)品分類 | 規(guī)格 | 貨號(hào) |
克隆載體及相關(guān)產(chǎn)品 | 500U×10 | BJ-PJ6552 |
商品介紹:
描述:
T4 DNA Ligase 可催化相鄰 DNA 鏈的 5’-P 末端和3’-OH 末端以磷酸二酯鍵結(jié)合的反應(yīng),需 ATP 作輔酶,不僅可以催化粘性末端之間或平滑末端之間的 DNA 的連接,也可以催化 DNA 與 RNA 之間以及少數(shù) RNA 之間的連接???br style="box-sizing: border-box; margin: 0px;"/>應(yīng)用于在粘性末端或平末端連接雙鏈 DNA 分子,也可應(yīng)用于修補(bǔ)雙鏈 DNA、RNA 或 DNA RNA 雜交體上的缺口。
活性定義:16°C 反應(yīng) 30 分鐘條件下,使 1pmol 的粘性末端
DNA 連接所需要的酶量定義為 1Unit。
失活:65°C,10 分鐘。
10×T4 Ligase Buffer:500 mM Tris-HCl, pH 7.5, 50 mM
MgCl2, 25mM DTT, 5mM ATP.
操作方法
1. 按以下組分配制反應(yīng)體系
10×T4 Ligase Buffer 2 μl
載體 50 ng(0.2-1pmol)
插入片段 1-50 ng(0.2-10pmol)
T4 DNA Ligase(200 U/μl) 1 μl
ddH2O Up to 20 μl
注意:兩個(gè)片段的連接時(shí),通常載體與插入片段的摩爾比為
1:3(但該比例并非絕對(duì)嚴(yán)謹(jǐn),在 1:1-1:10 范圍內(nèi)均可獲得理想的實(shí)驗(yàn)結(jié)果),提取根據(jù)片段大小與濃度,計(jì)算其摩爾濃度。
2. 如為粘末端連接反應(yīng), 22°C (16-37°C)連接 30min,
連接產(chǎn)物直接用于轉(zhuǎn)化(或凍存于-20°C)。
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