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細(xì)胞傳代技術(shù)實(shí)驗(yàn)原理:
當(dāng)培養(yǎng)的細(xì)胞增殖達(dá)到一定密度后,將會出現(xiàn)密度抑制現(xiàn)象,表現(xiàn)為細(xì)胞的生長和分裂速度逐漸減慢,甚至停止。貼壁細(xì)胞會在培養(yǎng)瓶中長成致密單層 (懸浮細(xì)胞會充滿整個體積的培養(yǎng)液),鋪滿培養(yǎng)瓶底部,此時如果不及時進(jìn)行分裝再培養(yǎng),即傳代培養(yǎng),細(xì)胞將逐漸走向衰老、死亡,將培養(yǎng)的細(xì)胞從一個容器以適當(dāng)比率轉(zhuǎn)移到其他容器中擴(kuò)大培養(yǎng),稱為傳代培養(yǎng)。
首先,我們需要準(zhǔn)備好相應(yīng)的實(shí)驗(yàn)器材:裝有75%醫(yī)用消毒酒精的酒精噴壺、PBS緩沖液、yi酶、含血清培養(yǎng)基、巴氏吸管、移液器、離心管、廢液缸。至于其他的超凈臺、培養(yǎng)箱、離心機(jī)等都是一個細(xì)胞間的基礎(chǔ)設(shè)施。
然后,我們需要把我們準(zhǔn)備的器材放入超凈臺,打開紫外照射滅菌,值得注意的是若是培養(yǎng)的細(xì)胞對溫度比較敏感,可以將含血清的培養(yǎng)基瓶子(包括盛放yi酶的瓶子)放入37℃的水浴箱使得培養(yǎng)基溫度在37℃,再轉(zhuǎn)移到超凈臺紫外滅菌,當(dāng)然一般的細(xì)胞對培養(yǎng)基的溫度不是很敏感,不用對培養(yǎng)基加溫也是可以的。另外,細(xì)胞培養(yǎng)間也需要紫外照射半小時左右。
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