操作步驟:
1、貼壁細(xì)胞的消化
①吸除培養(yǎng)液,用無菌 PBS、Hanks 液或無血清培養(yǎng)液洗滌細(xì)胞一次,以去除殘余的血清。
②加入少量Trypsin-EDTA solution,略蓋過細(xì)胞即可,室溫放置 0.5~2min, 不同的細(xì)胞消化時(shí)間有所不同。
③顯微鏡下觀察,細(xì)胞明顯收縮,并且肉眼觀察培養(yǎng)器皿底部發(fā)現(xiàn)細(xì)胞的形態(tài)發(fā)生明顯的變
化;或者用槍吹打細(xì)胞發(fā)現(xiàn)細(xì)胞剛好可以被吹打下來,吸除細(xì)胞消化液。加入含血清的 *細(xì)胞培養(yǎng)液,吹打下細(xì)胞,即可直接用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。
④如果發(fā)現(xiàn)消化不足,則加入 Trypsin-EDTA solution 重新消化。
⑤如果發(fā)現(xiàn)細(xì)胞消化時(shí)間過長,未及吹打細(xì)胞,細(xì)胞已經(jīng)有部分直接從培養(yǎng)器皿底部脫落, 直接用細(xì)胞培養(yǎng)液把細(xì)胞全部吹打下來。1000~2000g 離心 1min,沉淀細(xì)胞,盡量去除細(xì)胞消化液后,加入含血清的*培養(yǎng)液重新懸浮細(xì)胞,即可用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。
2、組織的消化不同的組織需要消化的時(shí)間相差很大,通常以消化后可以充分打散組織為宜。
產(chǎn)品屬性:
產(chǎn)品名稱 | 英文名稱 | 產(chǎn)品規(guī)格 | 產(chǎn)品貨號(hào) |
LysoBlue | 200μL | FS-X9806 |
產(chǎn)品介紹:
溶酶體藍(lán)色熒光探針LysoBlue探針是熒光素pH 指示探針,可以用來區(qū)分酸性細(xì)胞器,使得動(dòng)態(tài)研究活細(xì)胞內(nèi)溶酶體生物合成和功能成為可能。LysoView 染料是在酸性細(xì)胞器內(nèi)富集,可導(dǎo)致其質(zhì)子化。而質(zhì)子化可以減少染料的側(cè)鏈上弱堿,減少熒光淬滅,使得的熒光強(qiáng)度增加。因此,LysoBlue 試劑表現(xiàn)出pH 依賴性,在酸化條件下,熒光強(qiáng)度增加。 這些探針可以單獨(dú)或者組合使用,檢測酸化的溶酶體和細(xì)胞內(nèi)溶酶體的功能改變。例如,在某些腫瘤細(xì)胞的溶酶體具有較低的pH 值,而有的腫瘤細(xì)胞則相反。此外,一些細(xì)胞的細(xì)胞器酸化缺陷表現(xiàn)為囊性纖維化和其他病癥。LysoBlue 探針在此類應(yīng)用上非常廣泛有意義。 濃度:1 mM in DMSO 儲(chǔ)存:-20℃,避光,有效期6個(gè)月。 |
注意事項(xiàng):
1、本試劑盒僅供科學(xué)研究使用,不可用于診斷或治療。
2、螺旋蓋微量試劑管裝的試劑在開蓋前請(qǐng)短暫離心,將蓋和管內(nèi)壁上的液體離心至管底,避免開蓋時(shí)試劑損失。
3、禁止與其他品牌的試劑混用,否則會(huì)影響使用效果。
4、樣品或試劑被細(xì)菌或真菌污染或試劑交叉污染可能會(huì)導(dǎo)致錯(cuò)誤的結(jié)果。
5、最好使用一次性吸頭、管、瓶或玻璃器皿,可重復(fù)使用的玻璃器皿必須在使用前清洗并*清除殘留清潔劑。
6、避免皮膚或粘膜與試劑接觸。
7、需長時(shí)間保存可-20℃避光保存。避免反復(fù)凍融,否則將會(huì)增加空白吸收,從而影響檢測結(jié)果。最好小劑量分裝,用避光袋或是黑紙、錫箔紙包住避光。
8、用培養(yǎng)基或 PBS 來配制待檢測藥物。如果待測藥物有還原性,則測定不含細(xì)胞,僅含有 MTS 的待測藥物溶液在 490 nm處的空白吸光度。如果該吸光度很小,則可以直接加入 MTS ,如果吸光度相對(duì)較大,則需要除去培養(yǎng)基,并用新鮮培養(yǎng)基洗滌細(xì)胞兩次,然后加入新的 100 μl 培養(yǎng)基和 10 μl MTS 進(jìn)行檢測。
9、細(xì)胞處理需要小心操作,盡量避免人為的損傷細(xì)胞。
10、加 MTS 溶液后孵育時(shí)間的長短根據(jù)細(xì)胞的類型和細(xì)胞的密度等實(shí)驗(yàn)情況而定,對(duì)于大多數(shù)情況孵育 1 小時(shí)即可,白細(xì)胞需要培養(yǎng)較長時(shí)間。
11、如果不是使用 96 孔板檢測,MTS 溶液的用量相應(yīng)等比例增加即可。
單核細(xì)胞趨化蛋白2(MCP2)英文名:MCP2 卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白144A抗體包裝25g
單核細(xì)胞趨化蛋白1(MCP1)英文名:MCP1 周期B3抗體包裝1g
單氧化A(MAOA)英文名:MAOA 羧肽X(M14家族2)抗體包裝25g
存活(Surv)英文名:Surv 上皮鈣粘附分子結(jié)合蛋白E7包裝5g
簇集蛋白(CLU)英文名:CLU 周期D結(jié)合蛋白1抗體包裝1g
促胰液(SCT)英文名:SCT 卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白120抗體包裝5g
促微管蛋白聚合蛋白(TPPP)英文名:TPPP 卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白23抗體包裝1g
促泌(SCGN)英文名:SCGN 卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白89抗體包裝25g
刺猬因子相互作用蛋白(HHIP)英文名:HHIP 卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白30抗體包裝5g
次磷核糖基轉(zhuǎn)移1(HPRT1)英文名:HPRT1 卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白40抗體包裝5mg
雌激受體β(ERβ)英文名:ERβ 卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白114抗體包裝100g
雌激受體α(ERα)英文名:ERα 卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白39抗體包裝25g
垂體腺環(huán)化激活肽(ADCYAP1)英文名:ADCYAP1 卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白34抗體包裝25g
穿孔1(PRF1)英文名:PRF1 卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白75抗體包裝5g
成纖維細(xì)胞生長因子受體3(FGFR3)英文名:FGFR3 卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白65抗體包裝25g
光硬皮馬勃Scleroderma│cepa Pers. 質(zhì)量規(guī)格:含量>98.5%,類白色粉末游離三狀腺原試劑盒鹽白屈菜紅堿;Chelerythrin
嗜鹽潮間帶桿菌Aestuariibacter│halophilus 質(zhì)量規(guī)格:>99%,USP31游離肉堿銀杏酚;Ginkgolic acids
豬鏈球菌Streptococcus│suis 質(zhì)量規(guī)格:HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品游離前列腺特異性抗原試劑盒野菊花內(nèi)酯;Yejunualactone
溶酶體藍(lán)色熒光探針粟酒裂殖酵母 3-甲氧基-4-苯甲EB病早期抗原IgA
鞘氨單胞 2--5-甲氧基苯甲蓖麻抗體
蜂房哈夫尼 1-異基哌β-乙型溶血性鏈球
食屬(噬屬) 1-(四氫-2H-吡喃-4-基)乙酮弓形蟲
蘇云金芽孢桿 1-甲基-1h-咪唑-4-磺酰父系表達(dá)基因2
細(xì)交鏈孢霉 2,6-二氟苯膜結(jié)合型前列腺E合成1
產(chǎn)芽孢梭(生孢梭) 4-甲氧基-3-SCETIN
新疆糖單孢 2-羥基-3-硝基-5-氟吡啶角化生長因子2
葡萄穗霉 7-氮雜-2-羧20S蛋白體
球黑孢霉 5--2-26S蛋白體
蠟狀芽孢桿 (R)-3-氟吡咯烷(HCL)HA tag標(biāo)簽
球形賴芽孢桿 (S)-(+)-3-氟吡咯烷鹽鹽系統(tǒng)性紅斑狼瘡
枇杷假尾孢 2,6-二氟甲酯沉默調(diào)節(jié)蛋白1
辣乳菇 5--2,4-二氟苯磺酰組織蛋白F
蠟狀芽孢桿 4-(三氟甲基)-2-巰基嘧啶膽紅氧化代謝物