產(chǎn)品介紹:
英文名稱:Necrostatin-1 產(chǎn)品規(guī)格:1mL(10mM)|10mg|50mg|100mg Necrostatin-1是一種特異性的受體相互作用蛋白1(RIP1)激酶抑制劑,作用于Jurkat細(xì)胞,抑制程序性壞死,EC50為490nM。 注:本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! 號(hào):4311-88-0 純度:99.20% 分子量:259.33 儲(chǔ)存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請(qǐng)盡量在一個(gè)月內(nèi)使用。 |
中文名稱:受體相互作用蛋白1激酶抑制劑
英文名稱:Necrostatin-1
產(chǎn)品規(guī)格:1mL(10mM)|10mg|50mg|100mg
貨號(hào):FS-X10282
實(shí)驗(yàn)報(bào)告:
一、分離與培養(yǎng): 1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大?。?/span> 2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置; 3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化; 4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng); 5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng); | 二、免疫熒光鑒定: 1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí),棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min; 2、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min; 3、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min; 4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜; 5、PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h; 6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。 |
操作規(guī)程
1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔,通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞,細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000~10000個(gè)細(xì)胞(具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目,需根據(jù)細(xì)胞的大小,細(xì)胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).
2、.加入適當(dāng)濃度的0~10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時(shí),使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。
7、酶標(biāo)儀在570nm 波長(zhǎng)處檢測(cè)每孔的光密度(如無570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。
8、結(jié)果分析
a、細(xì)胞的存活率:將各測(cè)試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,無細(xì)胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無細(xì)胞),各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細(xì)胞的OD 值,C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =(加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD)×100
b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)
培養(yǎng)操作步驟:
1.公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;
2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個(gè)平皿可放置2-3片);
3.在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí);
4.將經(jīng)過計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中;
5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當(dāng)貼壁細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí),將培養(yǎng)板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)。
貝倫格葡萄座腔菌梨生專化型豬胰島單克抗體Human SAA4(Serum amyloid A-4 protein) 載脂蛋白B48(apo-B48)
釀酒酵母KB抑制蛋白激α/IκBα/IKK-α/IKKα/I-κB-α 抗體Human RAB11FIP3 載脂蛋白B100(apo-B100)
美澳型核果褐腐病菌抗重組人胰島抗體Human ENPP1(Ectonucleotide pyrophosphatase/phosphodiesterase family member 1) 載脂蛋白A5(apo-A5)
產(chǎn)皮歐(票)霉鏈霉菌磷化肌聚磷鹽磷樣蛋白1抗體Human RAB11FIP5 載脂蛋白A4(Apo-A4)
奧氏蜜環(huán)菌胰島受體抗體Human PVRL4 載脂蛋白A2(apo-A2)
釀酒酵母胰島受體α抗體Human PXMP2 載脂蛋白A1(apo-A1)
石泉海源菌胰島受體β抗體Human PWP1 載脂蛋白A1(apo A1)
猴假單胞菌KB抑制蛋白激α/β抗體Human PWP2 運(yùn)甲狀腺蛋白/前白蛋白(TTR)
鹽漬喜鹽芽孢桿菌白介12抗體Human RABGAP1L 孕烯(PREG)
聚團(tuán)屈撓桿菌干擾誘導(dǎo)35蛋白抗體Human PCK2(Phosphoenolpyruvate carboxykinase [GTP], mitochondrial) 孕受體(PGR)
菊池鏈格孢完整膜蛋白E25A抗體Human CYP27B1(25-hydroxyvitamin D-1 alpha hydroxylase, mitochondrial) 孕和adipoQ受體家族成員Ⅶ(PAQR7)
弗雷德里克斯堡假單胞菌小腸型脂肪結(jié)合蛋白抗體Human RABGEF1 孕(PROG)
日本擬無枝菌胰島降解抗體Human PYGO2 孕激誘導(dǎo)阻斷因子(PIBF)
禽腺病Ⅴ型KB抑制蛋白激β抗體Human PWP2 孕激/孕(PROG)
淺黃曲霉白介17受體D抗體Human PYCR1 (Pyrroline-5-carboxylate reductase 1, mitochondrial)遠(yuǎn)端上游元件結(jié)合蛋白1(FUBP1)
根瘤菌白介-17B抗體Human PXMP2 原纖維蛋白-1(FBN1)
平展單頂孢Monacrosporium│effusum 質(zhì)量規(guī)格:>99.5%(GC),標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)知母皂BII
解淀粉周培瑾氏菌Zhouia│amylolytica 質(zhì)量規(guī)格:>99.5%(GC),標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)10-脫乙酰巴卡亭
淺綠灰鏈霉菌Streptomyces│glauciniger 質(zhì)量規(guī)格:>98.0%(GC)(T)安格洛甙C
受體相互作用蛋白1激酶抑制劑枯草芽胞桿 2,2,2-三酯核糖核IgG抗體
蘋果鏈格孢 鹽羥甲基戊二單酰
大腸埃希 4-甲氧基-3-硝基吡啶尿激型纖溶原激活物
盤長(zhǎng)孢狀盤孢 甲基對(duì)甲苯砜鈣非依賴型磷脂A2
金黃色葡萄球金黃亞種 7-氟滿二酮磷化雷帕霉靶蛋白
卡利比克邁耶氏酵母 4,5-二甲基-1,2-苯二死骨片1
季也蒙畢赤酵母 4-甲基-2-甲氧基自噬基因Beclin 1
茶炭疽病 2-乙基己鹽自噬相關(guān)蛋白5
枯草芽孢桿 2',4'-二-5'-氟苯乙酮微管相關(guān)蛋白1A;1B輕鏈3B
大腸埃希氏(大腸桿) 對(duì)甲苯磺酰氧甲基膦二乙酯低密度脂蛋白受體相關(guān)蛋白1
綠僵 3,5-二溴-2-羥基磷化乙酰
矩圓黑盤孢 2,4-二羥基苯甲酰鞘磷脂合成1
科羅拉多擬無枝 3-乙?;谆阴t然?/span>
釀酒酵母 氟苯咪唑硝基還原
灰色鏈霉灰色亞種 2-甲基-2-戊烯血紅加氧