培養(yǎng)操作步驟:
1.公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;
2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個平皿可放置2-3片);
3.在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時;
4.將經(jīng)過計數(shù)的細胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中;
5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當(dāng)貼壁細胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時,將培養(yǎng)板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學(xué)檢測。
英文名稱:Hesperadin
產(chǎn)品規(guī)格:1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg
貨號:FS-X10850
產(chǎn)品介紹:
Hesperadin是ATP競爭性Aurora B抑制劑,IC50為250nM。 注:本品僅可用于科研實驗,嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! 號:422513-13-1 純度:99.67% 分子量:516.65 儲存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內(nèi)使用。 |
實驗報告:
一、分離與培養(yǎng): 1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大??; 2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置; 3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化; 4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng); 5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng); | 二、免疫熒光鑒定: 1、待心房肌細胞生長至80%融合時,棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min; 2、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min; 3、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細胞30min; 4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜; 5、PBS沖洗細胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h; 6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。 |
產(chǎn)氮假單胞菌小鼠絨毛膜促性腺激βAnti-PLK3 Antibody人α平滑肌肌動蛋白(α-SMA)
葉點霉屬人腫瘤特異生長因子/腫瘤相關(guān)因子Anti-PLXDC1 Antibody人α平滑肌肌動蛋白(α-SMA)
楊奇青霉人色上皮衍生因子Anti-PMCH Antibody人α橫紋肌肌動蛋白(α-SCA)
產(chǎn)氣莢膜梭菌 C型小鼠性激結(jié)合球蛋白Anti-PLXNC1 Antibody人α橫紋肌肌動蛋白(α-SCA)
Chryseomicrobium imtechense人白介23Anti-PMS2CL Antibody人平滑肌肌球蛋白(SMM)
樹舌2-3小鼠脫氫表雄S7Anti-PNKP Antibody人平滑肌肌球蛋白(SMM)
金針菇(毛柄金錢菌、冬菇)人克拉拉蛋白Anti-PMEPA1 Antibody人心肌特異性肌鈣蛋白T(c)
pSH-EFIRES-B-AtAFB2-mCherry大鼠心肌營養(yǎng)1Anti-PNCK Antibody人心肌特異性肌鈣蛋白T(c)
成晶節(jié)桿菌大鼠抗α-胞襯蛋白抗體IgG/IgAAnti-PMEPA1 Antibody人肌球蛋白重鏈(MHC)
釀酒酵母小鼠脫氫表雄Anti-PNN Antibody人肌球蛋白重鏈(MHC)
蛛網(wǎng)菌人低氧誘導(dǎo)因子1αAnti-PNPLA6 Antibody人熱休克蛋白27(HSP-27)
火木層孔菌人黑色抗體Anti-PNPLA8 Antibody人熱休克蛋白27(HSP-27)
豬丹絲菌小鼠高遷移率族蛋白B1Anti-PNPLA8 Antibody人血管抑/血管穩(wěn)定蛋白(ANG)
泡盛曲霉大鼠脂蛋白αAnti-PODXL2 Antibody人血管抑/血管穩(wěn)定蛋白(ANG)
金黃弗拉特氏菌人轉(zhuǎn)鐵蛋白受體Anti-POFUT1 Antibody人心型脂肪結(jié)合蛋白(h-FABP)
圍小叢殼小鼠內(nèi)皮脂肪Anti-POFUT2 Antibody人心型脂肪結(jié)合蛋白(h-FABP)
跨膜蛋白4超家族成員3抗體番茄葉點菌人增生性瘢痕成纖維細胞
宮頸癌原癌基因8抗體貝氏葡萄座腔菌梨專化型人喉表皮樣癌細胞
腫瘤壞死因子α誘導(dǎo)蛋白8抗體新月彎孢霉小鼠結(jié)節(jié)性硬化癥細胞
跨膜蛋白161A抗體柿苗擬莖點霉人膽管細胞型肝癌細胞
Aurora B抑制劑(Hesperadin)腐皮鐮孢 亞硫鈉瓊脂球蛋白輕鏈lambda
枯草芽孢桿 龍膽紫血液瓊脂基礎(chǔ)抑制性蛋白
油鑒別試劑 硫十二烷基鈉瓊脂內(nèi)
球毛殼 PNB(對甲)內(nèi)皮1
核黃氧化德沃斯氏 -6-羧內(nèi)源性糖皮質(zhì)
分枝節(jié)桿 WL營養(yǎng)瓊脂檸檬合
枯草芽孢桿 改良沙氏瓊脂培養(yǎng)基檸檬合
有柄樹舌靈芝(白芝)(可訂購) 沙氏BHI瓊脂凝集
黑木耳 -5-羧凝血原
地花 2-氨基-4-甲氧基-6-甲基-1,3,5-三皮質(zhì)
露濕擬漆斑 1,2-雙(二苯基膦)乙烷皮質(zhì)結(jié)合球蛋白
嗜糖土地芽孢桿 3-氨基-5-巰基-1,2,4-三氮唑皮質(zhì)酮;腎上腺酮
密叢毛霉 改良亞硫鹽瓊脂皮質(zhì)抑
醬油曲霉 UBA培養(yǎng)基葡萄糖
果生核盤 NBB培養(yǎng)基葡萄糖-6-磷脫氫
操作規(guī)程
1、在96孔板加入細胞100μL/孔,通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞,細胞毒性實驗每孔加入100微升5000~10000個細胞(具體每孔所用的細胞的數(shù)目,需根據(jù)細胞的大小,細胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.
2、.加入適當(dāng)濃度的0~10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時,使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。
7、酶標(biāo)儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度(如無570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。
8、結(jié)果分析
a、細胞的存活率:將各測試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,無細胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無細胞),各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細胞的OD 值,C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =(加藥細胞OD/對照細胞OD)×100
b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)