產(chǎn)品介紹:
英文名稱:BI-D1870 產(chǎn)品規(guī)格:1mL(10mM)|2mg|5mg|10mg|50mg BI-D1870是一種特異性強,ATP競爭性RSK抑制劑,抑制RSK1、RSK2、RSK3、RSK4的活性,IC50值分別為31nM、24nM、18nM、15nM。 注:本品僅可用于科研實驗,嚴禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! 號:501437-28-1 純度:99.21% 分子式:C??H??F?N?O? 分子量:391.42 儲存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內(nèi)使用。 |
中文名稱:RSK抑制劑(BI-D1870)
英文名稱:BI-D1870
產(chǎn)品規(guī)格:1mL(10mM)|2mg|5mg|10mg|50mg
貨號:FS-X10506
實驗報告:
一、分離與培養(yǎng): 1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大?。?/span> 2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置; 3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化; 4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng); 5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng); | 二、免疫熒光鑒定: 1、待心房肌細胞生長至80%融合時,棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min; 2、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min; 3、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細胞30min; 4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜; 5、PBS沖洗細胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h; 6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。 |
操作規(guī)程
1、在96孔板加入細胞100μL/孔,通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞,細胞毒性實驗每孔加入100微升5000~10000個細胞(具體每孔所用的細胞的數(shù)目,需根據(jù)細胞的大小,細胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.
2、.加入適當濃度的0~10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養(yǎng)箱中孵育適當時間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時,使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。
7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度(如無570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。
8、結(jié)果分析
a、細胞的存活率:將各測試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,無細胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無細胞),各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細胞的OD 值,C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =(加藥細胞OD/對照細胞OD)×100
b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)
培養(yǎng)操作步驟:
1.公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;
2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個平皿可放置2-3片);
3.在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時;
4.將經(jīng)過計數(shù)的細胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中;
5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當貼壁細胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時,將培養(yǎng)板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學檢測。
溴敵對照液辣椒受體樣蛋白1抗體Anti-HGF Antibody尾加壓2受體(UTS2R)
紋黑蛋巢谷酰轉(zhuǎn)1抗體Anti-HHEX Antibody維生D受體(VDR)
福氏志賀氏菌T淋巴瘤侵襲轉(zhuǎn)移誘導(dǎo)蛋白1抗體Anti-HGF Antibody維生D5(VD5)
釀酒酵母腫瘤壞死因子誘導(dǎo)蛋白2(TNFα-IP 2)抗體Anti-HGS Antibody維生B9(VB9)
早熟禾鐮孢味覺受體蛋白家族2亞基16抗體Anti-HIF-1 alpha/HIF1A Antibody維甲誘導(dǎo)基因1蛋白(RIG1)
黃海海桿狀菌線粒體硫氧還蛋白2抗體Anti-HHEX Antibody維甲受體應(yīng)答基因1(RARRES1)
暗擬莖點霉腫瘤壞死因子受體超家族成員5抗體Anti-HIF-2-alpha/EPAS1 Antibody維甲受體γ(RARγ)
水堿菌瞬時表達軸索糖蛋白1抗體Anti-HIF1A Antibody維甲受體β(RARβ)
腐皮鐮孢非受體酪蛋白激2抗體Anti-HIF3A Antibody維甲受體α(RARα)
曲霉疏展變種腫瘤壞死因子α誘導(dǎo)蛋白5Anti-HIF1A Antibody(PB0245)維甲X受體α(RXRα)
平臍蠕孢菌腫瘤壞死因子CAnti-HIF3A Antibody圍脂滴蛋白5(PLIN5)
鞘單胞菌轉(zhuǎn)化生長因子β4抗體Anti-Histidine decarboxylase/HDC Antibody圍脂滴蛋白4(PLIN4)
Massilia namucuonensis轉(zhuǎn)化生長因子β活化激結(jié)合蛋白1抗體Anti-HK1 Antibody圍脂滴蛋白3(PLIN3)
釀酒酵母硫氧還蛋白結(jié)合蛋白2抗體Anti-HK2 Antibody圍脂滴蛋白1(PLIN1)
香菇MAPK調(diào)控蛋白TRB2抗體Anti-HINT1 Antibody微小染色體維持缺陷蛋白5(MCM5)
*獼猴桃細菌性潰瘍病ATP結(jié)合轉(zhuǎn)運因子2抗體Anti-HLA-A Antibody(PB0407)微小染色體維持缺陷蛋白2(MCM2)
突觸相關(guān)蛋白97抗體巴氏芽孢梭菌人卵巢上皮細胞
神經(jīng)細胞囊泡循環(huán)蛋白2抗體海水產(chǎn)堿菌人子宮成纖維細胞
突觸相關(guān)蛋白29抗體解淀粉芽孢桿菌解淀粉亞種人卵巢成纖維細胞
突觸泡蛋白2B抗體變色栓菌(云芝)人臍帶單核細胞
RSK抑制劑(BI-D1870)根霉 松弛C多巴
小單孢 2,3-二喹喔啉5羥色
球毛殼 1-氨基神經(jīng)肽Y
釀酒酵母 5,15-二苯基卟啉皮質(zhì)
豬鏈球 (R)-(+)-2,2′,6,6′-四甲氧基-4,4′-雙(二苯基膦)-3,3′-聯(lián)吡啶抗繆勒氏管
楊樹細盾霉(都不提供) 氘代乙抑制A
Clostridium sp. 5-氟-2-甲基芐球蛋白G
雅致小克銀漢霉 FMOC-D-炔基甘脂多糖;內(nèi)
污白干酪 FMOC-L-2-溴苯二
毛霉狀卷霉 2,2-二氟-1,3-二甲基-咪唑烷超氧化物歧化
大腸埃希氏 3-溴呋喃球蛋白G
松杉靈芝 2,4-二氟-3-甲氧基苯甲17β-雌二
Penicillium 1,1,1-三(二苯基膦甲基)乙烷C-反應(yīng)蛋白
異常漢遜酵母異常變種 4-羥基-3-三氟甲C肽
鏈霉屬 4-氟-3-(三氟甲基)TIM-1