FRAX486是group I PAKs有效抑制劑正在熱銷的產(chǎn)品：Cr ELISA Kit 大鼠骨膠原交聯(lián)過氧化苯叔丁酯 98%
C I CP ELISA Kit 大鼠Ⅰ型前膠原C末端肽過氧化氫異苯 80-85 %
DPD ELISA Kit 大鼠脫氧吡啶/脫氧吡啶啉十二酰 98%
PY ELISA Kit 大鼠吡啶交聯(lián)物過氧化十二酰 98%
OPN ELISA Kit 大鼠骨橋2-異苯
培養(yǎng)操作步驟：
1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；
2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個(gè)平皿可放置2-3片）；
3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí)；
4．將經(jīng)過計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；
5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當(dāng)貼壁細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí)，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測。
中文名稱：FRAX486是group I PAKs有效抑制劑
英文名稱：FRAX486
產(chǎn)品規(guī)格：1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg
貨號：FS-X10938
產(chǎn)品介紹:
FRAX486是group I PAKs有效選擇性抑制劑，對PAK1、PAK2和PAK3的IC50值分別為8.25nM、39.5nM和55.3nM，對PAK4的抑制力弱（IC50=779nM）。 注：本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn)，嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途！ 號：1232030-35-1 純度：98.0% 分子量：513.39 儲存條件：-20℃，有效期2年，溶入溶劑后-20℃請盡量在一個(gè)月內(nèi)使用。 |
實(shí)驗(yàn)報(bào)告：
一、分離與培養(yǎng)： 1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大小； 2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置； 3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化； 4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)； 5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)； | 二、免疫熒光鑒定： 1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min； 2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min； 3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min； 4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜； 5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h； 6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。 |
洋蔥伯克霍爾德菌人水通道蛋白2Paenibacillus mucilaginosus小鼠胰島樣生長因子結(jié)合蛋白1(IGFBP-1)
紫皮麗菇人水通道蛋白1Bacillus mycoides小鼠胰島樣生長因子結(jié)合蛋白2(IGFBP-2)
豬鏈球菌分型血清參考品 血清型 SS12人水通道蛋白0Bacillus mycoides小鼠胰島樣生長因子結(jié)合蛋白2(IGFBP-2)
釀酒酵母人類風(fēng)濕因子Bacillus mycoides小鼠白介16(IL-16)
桑樹枝枯病人抗鏈球菌溶血O/抗OBacillus mycoides小鼠白介16(IL-16)
拜耳接合酵母人腎上腺皮質(zhì)抗體Bacillus mycoides小鼠白介3(IL-3)
鏈格孢人抗腎小球基底膜抗體Bacillus mycoides小鼠白介3(IL-3)
熒光假單胞菌人β2微球蛋白Bacillus mycoides小鼠白介4(IL-4)
枯草芽孢桿菌人膜聯(lián)蛋白ⅤBacillus mycoides小鼠白介4(IL-4)
毛栓菌人抗腎小管基底膜抗體Bacillus niacini小鼠白介-5(IL-5)
橄欖灰鏈霉菌人apelin 13Bacillus oleronius小鼠白介-5(IL-5)
根霉人Apelin 36Bacillus pseudofirmus小鼠層連蛋白/板層(LN)
新月彎孢人肌鈣蛋白TBacillus pseudofirmus小鼠層連蛋白/板層(LN)
巴氏醋桿菌人血管內(nèi)皮抑抗體Bacillus pseudofirmus小鼠巨噬集落激因子(M-CSF)
奇異球菌屬人血管緊張Ⅱ受體Ⅰa型Sporosarcina psychrophila小鼠巨噬集落激因子(M-CSF)
球孢白僵菌人血管生成樣蛋白3Bacillus psychrosaccharolytic小鼠巨噬來源的趨化因子(MDC/CCL22)
鋅指蛋白263抗體梨干枯擬莖點(diǎn)菌大鼠心肌細(xì)胞
鋅指蛋白195抗體丁香絲膜菌人的腎小球內(nèi)皮細(xì)胞
鋅指蛋白266抗體栓黑管菌小鼠腎足細(xì)胞
鋅指蛋白786抗體稻平臍蠕孢(斜面)人支氣管上皮細(xì)胞
FRAX486是group I PAKs有效抑制劑釀酒酵母 碳錳胰島
凝結(jié)芽孢桿 硫錳胰島樣生長因子1
擬莖點(diǎn)霉 硬脂鈣胰島樣生長因子2
乳乳球霍氏亞種 草鈣胰島樣生長因子結(jié)合蛋白-1
球蓋蟻巢傘 乙鈣胰島樣生長因子結(jié)合蛋白-3
宇佐美曲霉 無水硫鈣胰高血糖
Kocuria polaris 硫鈣乙酰CoA羧化
冬蟲夏草 焦磷鈣乙酰CoA羧化α
金針菇 磷三鈣乙酰CoA羧化β
枯草芽孢桿 磷二氫鈣異檸檬脫氫
根瘤 過磷鈣硬脂酰去飽和1
枯草芽孢桿枯草亞種 氫氧化鈣游離膽固
硬水黃桿 碳鈣孕酮
香草蘭根疾 磷氫鈣脂蛋白脂
赤紅球 二甲基亞砜脂肪甘油三酯脂
操作規(guī)程
1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔，通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞，細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000～10000個(gè)細(xì)胞（具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目，需根據(jù)細(xì)胞的大小，細(xì)胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).
2、.加入適當(dāng)濃度的0～10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時(shí)，使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。
7、酶標(biāo)儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。
8、結(jié)果分析
a、細(xì)胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細(xì)胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細(xì)胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細(xì)胞的OD 值，C 為對照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =（加藥細(xì)胞OD/對照細(xì)胞OD）×100
b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)
