培養(yǎng)操作步驟:
1.公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;
2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個平皿可放置2-3片);
3.在距離紫外燈直射范圍內20-30 厘米處照射2-3小時;
4.將經過計數(shù)的細胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中;
5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當貼壁細胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時,將培養(yǎng)板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學檢測。
中文名稱:海水藻保存液Ⅰ
英文名稱:
產品規(guī)格:100ml
貨號:FS-X10188
產品介紹:
用途: 含有福爾馬林、乙酸、乙醇等。 注意事項: 推薦用于海水藻類的保存。此類保存液不能保色,如需保色,需用此保存液作用1-2天后轉入保色液中長期保存。 儲存條件:室溫,避光,12個月 |
實驗報告:
一、分離與培養(yǎng): 1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大小; 2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置; 3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復此步驟2-3次,直至組織*被消化; 4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng); 5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng); | 二、免疫熒光鑒定: 1、待心房肌細胞生長至80%融合時,棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min; 2、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min; 3、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細胞30min; 4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜; 5、PBS沖洗細胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h; 6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。 |
紫丁香蘑赤霉抗體Human UBC 大鼠血紅結合蛋白(HPX)免疫試劑盒
生孢梭菌鳥核結合蛋白X抗體Human TTLL10 大鼠血紅蛋白(Hb)免疫試劑盒
紫晶口磨GRAM結構域蛋白2抗體Human TWF1 大鼠血管性血友病因子裂解(vWF-cp)免疫試劑盒
蘇云金芽胞桿菌γ-谷酰轉移輕鏈2抗體Human TUSC5 大鼠血管性血友病因子/瑞斯托霉輔因子(VWF)免疫試劑盒
假單胞菌屬原鈣粘蛋白γA1抗體Human TTRAP 大鼠血管舒緩激肽(BK)免疫試劑盒
日本裂殖酵母G蛋白偶聯(lián)受體70抗體Human TWIST1(Twist-related protein 1) 大鼠血管生成抑制因子免疫試劑盒
杜氏籃狀菌G蛋白偶聯(lián)受體71抗體Human TUB 大鼠血管生成樣蛋白6(ANGPTL6)免疫試劑盒
地中海中慢生根瘤菌谷受體δ2/GluR-δ2抗體Human TWIST2 大鼠血管生成樣蛋白3(ANGPTL3)免疫試劑盒
季也蒙邁耶氏酵母血型糖蛋白A/涎糖蛋白抗體Human TUBGCP3 大鼠血管生成4(ANG-4)免疫試劑盒
釀酒酵母谷脫羧67抗體Human TWSG1 大鼠血管生成2(ANG-2)免疫試劑盒
布魯氏菌 生物Ⅰ型生長抑制DNA損傷基因45抗體Human DNM2(Dynamin-2) 大鼠血管生成1(ANG-1)免疫試劑盒
擬青霉胃泌抑制肽抗體Human TUSC4 大鼠血管生長(ANG)免疫試劑盒
綠色木霉葡萄糖轉運蛋白4抗體Human C19orf80(Betatrophin) 大鼠血管內皮粘附分子1(VCAM-1)免疫試劑盒
盤長孢狀盤孢磷脂?;鞍拙厶?/span>-3抗體Human TTK 大鼠血管內皮生長因子受體2(VEGFR-2)免疫試劑盒
小腸腸球菌糖皮質激受體抗體Human TTL 大鼠血管內皮生長因子受體1(VEGFR-1/Flt1)免疫試劑盒
濟州古名氣微菌胰高血糖樣肽-1抗體Human TUSC5 大鼠血管內皮生長因子D(VEGF-D)免疫試劑盒
球二孢Botryodiplodia│sp. 質量規(guī)格:2-3mm,球形丹D
小單孢菌屬Micromonospora│sp. 質量規(guī)格:20-40目,氣相、液相色譜柱丹C
: CI-104資源名稱: 牛型分枝桿菌 質量規(guī)格:40-60目,氣相、液相色譜柱遠志山III
海水藻保存液Ⅰ越南芽孢桿 2-硝基-4--6-溴苯末端補體復合物C5b-9
釀酒酵母 1,2-二溴四氟苯鈉-葡萄糖共轉運載體1
Gordonia 扁桃乙酯腦鈉;腦鈉尿肽
膠韌革(榆耳,榆蘑) 3-溴-4-氟甲酯腦源性神經營養(yǎng)因子
異常漢遜酵母 5-氨基-1-苯基吡唑內
聚多曲霉 N-十六烷基苯甲酰內皮
矩圓黑盤孢 2,6-二-5-氟煙內皮1
馬克斯克魯維酵母 3-基-2,6-二-5-氟吡啶內皮型一氧化氮合
三骨菇 2-苯基異丁內皮脂肪
雜色曲霉 3-氟-4-內源性分泌型糖基化終末產物受體
中華芽孢桿 4-戊基雙環(huán)己內脂
枯草芽孢桿 3-氨基-5-叔丁基吡唑黏著斑激
山楂生葉點霉 2-重氮乙酰乙對硝基芐酯尿蛋白
巴氏醋桿 2-氨基-3-氟尿二磷葡萄糖轉移1
產氨短桿 4-甲氧基芐尿肌酐
操作規(guī)程
1、在96孔板加入細胞100μL/孔,通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞,細胞毒性實驗每孔加入100微升5000~10000個細胞(具體每孔所用的細胞的數(shù)目,需根據(jù)細胞的大小,細胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.
2、.加入適當濃度的0~10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養(yǎng)箱中孵育適當時間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時,使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。
7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度(如無570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。
8、結果分析
a、細胞的存活率:將各測試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,無細胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無細胞),各重復孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細胞的OD 值,C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =(加藥細胞OD/對照細胞OD)×100
b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)