BCIP/NBT堿性磷酸酯酶顯色試劑盒正在熱銷的產(chǎn)品：Endostatin 內(nèi)皮抑/內(nèi)皮他丁抗體薄荷酯 98%
Endo G 核內(nèi)切G抗體十四 Standard for GC，≥99.5% (GC)
beta endorphin β-內(nèi)啡肽抗體十四 98%
envelope glycoprotein (Yellow fever virus) 黃熱病包膜糖蛋白抗體十四 ，≥99.5% (G
中文名稱：BCIP/NBT堿性磷酸酯酶顯色試劑盒
英文名稱：BCIP/NBT Alkaline Phosphatase Color Development Kit
產(chǎn)品規(guī)格：共100ml
貨號：FS-X9795
產(chǎn)品介紹:
BCIP/NBT 堿性磷酸酯酶顯色試劑盒是一種用于免疫組化顯色、Western 等膜顯色和誘導(dǎo)多功能干細(xì)胞iPS 鑒定等的試劑盒。 BCIP/NBT 是堿性磷酸酯酶的常用底物。在堿性磷酸酯酶的催化下，BCIP 會被水解產(chǎn)生強(qiáng)反應(yīng)性的產(chǎn)物，該產(chǎn)物會和NBT 發(fā)生反應(yīng)，形成不溶性的深藍(lán)色至藍(lán)紫色的NBT-formazan。 本試劑盒可以用于細(xì)胞或組織的堿性磷酸酯酶顯色包括誘導(dǎo)多功能干細(xì)胞iPS 的鑒定，也可以用于Western 等結(jié)合有堿性磷酸酯酶的膜的顯色檢測。同時(shí)也可以用于細(xì)胞或組織內(nèi)源性的堿性磷酸酯酶顯色。 組份規(guī)格： 試劑A：堿性磷酸酯酶顯色緩沖液 100ml 試劑B：BCIP 溶液(300X) 350μl 試劑C：NBT 溶液(150X) 700μl 使用說明 1. 對于組織切片或細(xì)胞樣品或膜，在與堿性磷酸酯酶標(biāo)記的抗體或其它形式的探針孵育后，用適當(dāng)洗滌液洗滌3-5 次，每次3-5 分鐘。對于檢測內(nèi)源性堿性磷酸酯酶的組織或細(xì)胞樣品，在適當(dāng)固定后，也用適當(dāng)洗滌液洗滌3-5 次，每次3-5 分鐘。 2. 按照如下比例依次加入各溶液，混勻后即配制成BCIP/NBT 染色工作液，配方如下：試劑A：堿性磷酸酯酶顯色緩沖液 3mL試劑B：BCIP 溶液(300X) 10μL試劑C：NBT 溶液(150X) 20μL染色工作液總體積：3.03mL 3. 后一次洗滌完畢后，去除洗滌液，加入適量BCIP/NBT 染色工作液，確保能充分覆蓋樣品。 4. 室溫避光孵育5-30 分鐘或更長時(shí)間(可長達(dá)24 小時(shí))，直至顯色至預(yù)期深淺。 5. 去除BCIP/NBT 染色工作液，用蒸餾水洗滌1-2 次即可終止顯色反應(yīng)。 6. 對于組織切片或細(xì)胞樣品，顯色反應(yīng)終止后，如有必要可以用中性紅染色液(neutral red staining solution)染色，以便于觀察。對于膜，顯色反應(yīng)終止后，可以室溫晾干避光保存。 儲存：4℃，有效期一年。 |
培養(yǎng)操作步驟：
1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；
2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個(gè)平皿可放置2-3片）；
3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí)；
4．將經(jīng)過計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；
5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當(dāng)貼壁細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí)，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測。
實(shí)驗(yàn)報(bào)告：
一、分離與培養(yǎng)： 1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大??； 2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置； 3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化； 4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)； 5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)； | 二、免疫熒光鑒定： 1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min； 2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min； 3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min； 4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜； 5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h； 6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。 |
操作規(guī)程
1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔，通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞，細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000～10000個(gè)細(xì)胞（具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目，需根據(jù)細(xì)胞的大小，細(xì)胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).
2、.加入適當(dāng)濃度的0～10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時(shí)，使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。
7、酶標(biāo)儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。
8、結(jié)果分析
a、細(xì)胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細(xì)胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細(xì)胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細(xì)胞的OD 值，C 為對照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =（加藥細(xì)胞OD/對照細(xì)胞OD）×100
b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)
胱天蛋白11(P11)英文名：P11 C型凝集結(jié)構(gòu)域家族4成員C抗體包裝25mg
胱天蛋白1(P1)英文名：P1 CD226抗體包裝25g
胱硫醚β合(CβS)英文名：CβS CD26抗體包裝5g
骨形成蛋白8B(BMP8B)英文名：BMP8B 免疫球蛋白G Fc段受體Ⅱ/Fc γ RII a抗體包裝5g
骨形成蛋白6(BMP6)英文名：BMP6 緊密連接蛋白20抗體包裝1g
骨形成蛋白1(BMP1)英文名：BMP1 中心體蛋白135抗體包裝5g
骨骼肌特異性受體酪激(MUSK)英文名：MUSK 半胱蛋白蛋白-7抗體包裝100g
骨骼肌慢肌肌鈣蛋白T(TNNT1)英文名：TNNT1 鈣調(diào)節(jié)抗體（鈣調(diào)蛋白/鈣調(diào)）包裝10g
骨骼肌快肌肌鈣蛋白I(TNNI2)英文名：TNNI2 1號染色體開放閱讀框181抗體包裝25g
骨鈣(OC)英文名：OC Ⅰ型補(bǔ)體受體抗體（C3b/C4b受體抗體）包裝25mg
骨成型蛋白受體Ⅱ(BMPRⅡ)英文名：BMPRⅡ 8型膠原/內(nèi)皮膠原蛋白抗體包裝1g
骨成型蛋白受體1A(BMPR1A)英文名：BMPR1A 結(jié)合轉(zhuǎn)化激活因子CITED1抗體包裝5g
骨成型蛋白7(BMP7)英文名：BMP7 色P450 2C9抗體包裝10MG
骨成型蛋白4(BMP4)英文名：BMP4 色P450 2D6抗體包裝100g
骨成型蛋白2(BMP2)英文名：BMP2 血小板活化因子CTR9抗體包裝25g
特羅伊察棲砂桿菌Arenibacter│troitsensis 質(zhì)量規(guī)格：效價(jià)測定早老2試劑盒乙?；邹继J;Acetyl-trans
長柄鏈格孢Alternaria│longipes 質(zhì)量規(guī)格：>98%,合物早老1試劑盒羊藿次II;Icarisid II
鮑希瓦氏菌Shewanella│haliotis 質(zhì)量規(guī)格：>99%,USP32,BR,可用于培養(yǎng)再生胰島衍生1α/胰石蛋白/胰線蛋白試劑盒茵芋;Skimmin
BCIP/NBT堿性磷酸酯酶顯色試劑盒細(xì)孢毛霉 亞磷二異丁酯4-羥基苯酮雙加氧
匍枝根霉(黑根霉) 6-氨基-吡-2-羧甲酯COP9結(jié)構(gòu)光形態(tài)發(fā)生同源物亞基2
Aureimonas frigidaquae N-(3-氨基基)-N-甲基叔丁酯鹽鹽COP9結(jié)構(gòu)光形態(tài)發(fā)生同源物亞基2抗體
光帽鱗傘(滑菇) S-甲基-L-半胱CC趨化因子配體1
茶藨子葡萄座腔 4-溴-3,5-二三氟甲苯RIG-I
釀酒酵母 N,N-雙(2-乙基)叔丁酯柯薩奇病B3
橄欖綠鏈霉 4-(二氟甲氧基)-3-(環(huán)氧基)苯甲DNA甲基轉(zhuǎn)移3A2
白僵 1,1,2,3,3-五烷雌受體γ
冬菇屬 膽固琥珀單酯柯薩奇病
米曲霉 3-(4-溴芐基)-2-丁基-5--4-咪唑甲G_(i;o)蛋白
耐冷冷桿 Nα,Nε-雙(叔丁氧羰基)-L-賴二環(huán)己鹽蛋白聚糖A
普通鏈霉 甲氧基去氧腎上腺鹽鹽蛋白聚糖B
香菇 反式-4'-乙基-[1,1'-聯(lián)環(huán)己烷]-4-酮酪氨基轉(zhuǎn)移
Paucimonas lemoignei 5-(2-甲氧基苯氧基)-[2,2-二嘧啶]-4,6(1H,5H)-二酮谷氨基轉(zhuǎn)移
芽孢桿屬 2-(2-甲氧基苯氧基)二二甲酯補(bǔ)體蛋白1
