HIV-1抑制劑(Betulinic acid)正在熱銷的產(chǎn)品：A1c(Mouse Glycated hemoglobin A1c) ELISA Kit 小鼠糖化血紅蛋白A1c無水硫鎂 CP
LFA-3/CD58(Mouse lymphocyte function associated antigen 3) ELISA Kit 小鼠淋巴功能相關(guān)抗原3無水硫鎂 99.99% metals bas
英文名稱：Betulinic acid
產(chǎn)品規(guī)格：1mL(10mM)|25mg|50mg|100mg|200mg|500mg
貨號：FS-X11042
產(chǎn)品介紹:
Betulinic acid能誘導(dǎo)腫瘤細胞凋亡，還可抑制HIV-1，EC50為1.4μ M。 注：本品僅可用于科研實驗，嚴禁用于臨床醫(yī)療及其他用途！ 號：472-15-1 別名：Lupatic acid;Betulic acid 純度：98.58% 分子量：456.7 儲存條件：-20℃，有效期2年，溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內(nèi)使用。 |
培養(yǎng)操作步驟：
1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；
2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個平皿可放置2-3片）；
3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時；
4．將經(jīng)過計數(shù)的細胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；
5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當(dāng)貼壁細胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學(xué)檢測。
實驗報告：
一、分離與培養(yǎng)： 1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大??； 2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置； 3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化； 4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)； 5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)； | 二、免疫熒光鑒定： 1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min； 2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min； 3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min； 4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜； 5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h； 6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。 |
操作規(guī)程
1、在96孔板加入細胞100μL/孔，通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞，細胞毒性實驗每孔加入100微升5000～10000個細胞（具體每孔所用的細胞的數(shù)目，需根據(jù)細胞的大小，細胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.
2、.加入適當(dāng)濃度的0～10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時，使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。
7、酶標(biāo)儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。
8、結(jié)果分析
a、細胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細胞的OD 值，C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =（加藥細胞OD/對照細胞OD）×100
b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)
匍匐曲霉原變種Enterococcus sacchrolyticus大鼠甲狀旁腺激(PTH)
靈芝屬Enterococcus mundtii大鼠組(HIS)
葡萄座腔菌Enterococcus faecalis大鼠組(HIS)
委內(nèi)瑞拉鏈霉菌Enterococcus durans大鼠白介13(IL-13)
土曲霉原變種Enterococcus hirae大鼠白介13(IL-13)
枯草芽孢桿菌Enterococcus solitarius大鼠白介15(IL-15)
土生空團菌*Enterococcus malodoratus大鼠白介15(IL-15)
大豆慢生根瘤菌Tetragenococcus halophilus大鼠白介16(IL-16)
Lysinibacillus sphaericus大鼠白介16(IL-16)
大腸桿菌Lysinibacillus sphaericus大鼠白介17(IL-17)
變化考克氏菌Bacillus cereus大鼠白介17(IL-17)
釀酒酵母Lysinibacillus sphaericus大鼠白介1可溶性受體Ⅰ(IL-1sRⅠ)
茄勞爾氏菌Bacillus pumilus大鼠白介1可溶性受體Ⅰ(IL-1sRⅠ)
pTRV 2Bacillus globisporus大鼠可溶性E選擇(sE-selectin)
魚蛉假絲酵母Bacillus licheniformis大鼠可溶性E選擇(sE-selectin)
湖北擬酵母Bacillus licheniformis大鼠白介1可溶性受體Ⅱ(IL-1sRⅡ)
視黃受體應(yīng)答蛋白3抗體解糖熱纖維菌屬柱狀假絲酵母菌
視黃受體應(yīng)答蛋白1抗體致黑脫硫腸狀菌錐毛殼屬
Rad52抗體地下熱袍菌Pannonibacter phragmitetus
抑癌基因Rbms3抗體萊廷格熱袍菌Paenibacillus dauci
HIV-1抑制劑(Betulinic acid)螺旋鏈霉 ent-16a,17,19-三羥基貝殼杉烷-18-羧
艾丁湖鹽漬芽孢桿 ent-16α17-二羥基貝殼杉烷-18-羧
大腸埃希 豨薟
平菇 ENT-16βH-貝殼杉烷-17,18-二羧
鴨疫里氏桿 細葉遠志B;遠志糖B
仙臺鏈霉 地黃苦
枯草芽孢桿 地黃C
弗雷德里克斯堡假單胞 G2
擬盤多毛孢 G1
釀酒酵母 B2
黑曲霉 B1
青島芽孢桿 新莪術(shù)二酮
枯草芽孢桿 白藜蘆-4'-甲
褐球固氮 桑黃酮G；桑根酮C
紅斑黃菇 甲基原纖細薯蕷皂
